藤麗誘導(dǎo)PC12神經(jīng)細胞損傷的保護作用,在給藥濃度 為10yg/mL時,細胞存活率由54. 2%提高到85. 2%;體內(nèi)試驗也顯示該部位具有良好的 抗帕金森病作用,在給藥濃度為(250mg/kg)時,可顯著提高魚藤麗損傷模型中大鼠腦黑 質(zhì)部位的多己胺能神經(jīng)元的表達和數(shù)目,降低a-synuclein的表達,改善大鼠PD樣運動 障礙。
[0037] 有意技術(shù)效果:
[0038] 1、本發(fā)明的連翅活性部位,不僅具有抑制魚藤麗誘導(dǎo)的神經(jīng)細胞損傷的作用,還 能夠改善魚藤麗所導(dǎo)致的PD樣行為學(xué)改變、增加多己胺能神經(jīng)元的數(shù)量,具有明顯的抗PD 作用。該藥理作用目前未見報道,是本發(fā)明重要的創(chuàng)新點。
[0039] 2、通過大孔吸附樹脂對連翅提取物進行富集,除去了大量的糖類成分W及其它一 些雜質(zhì)成分,大大降低了使用的劑量,制備所得的活性部位僅為藥材量的0. 5-1 %,有利于 進一步開發(fā)制備成各種劑型的中成藥。
[0040] 3、本發(fā)明從連翅活性部位中共分離了 15個化學(xué)成分,其中9個新化合物,包括4 個苯己醇巧黃麗加合物,為研究活性部位作用機制提供化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)。
[0041] 4、本發(fā)明所提供的連翅活性部位具有制備工藝簡單、易操作、生產(chǎn)成本低、安全可 靠等優(yōu)點,整個過程符合綠色環(huán)保的要求。
【附圖說明】
[0042] 圖1連翅活性部位化Q10)的制備流程
[0043] 圖化Q10顯著提高黑質(zhì)致密區(qū)(substantianigracompacta,SNc)酪氨酸居化 酶(tyrosinehy^〇wlase,TH)陽性細胞數(shù)目。(免疫組織化學(xué)法,放大倍數(shù)為,左;右二 200:100)
[0044] 圖SWesternblot檢測LQ10對魚藤麗所致大鼠黑質(zhì)區(qū)TH、a-synuclein蛋白變 化的影響
【具體實施方式】
[0045] 下面的實施例及藥理活性實驗用于進一步說明本發(fā)明,但送并不意味著對本發(fā)明 的任何限制。
[0046] 1、連翅活性部位的制備方法
[0047] 實施例1
[0048] (1)采用連翅干燥藥材10kg粉碎,用8化體積濃度為75 %己醇提取3次,每次 1.化;將提取液合并后過濾,濾液減壓回收溶劑,濃縮后得連翅總提取物;
[0049] (2)使用蒸傭水將所得連翅總提取物密度調(diào)至1. 10,依次用3倍體積的石油離、己 酸己醋、正了醇萃取,每種試劑萃取3次,合并正了醇部位溶液減壓回收溶劑并干燥,得連 翅正了醇部位;
[0050] (3)取連翅正了醇部位加水分散溶解,靜置過夜,W300化/min的速度離必20min 后取上清液,濃縮至濃度為1.Og/血的上樣液。上樣液通過DiaionHP-20大孔吸附樹脂, 樹脂填充體積(mL)與上樣量(g)比為20:1,先用體積濃度為10%己醇洗脫,洗脫體積2BV, 再用30 %己醇洗脫,洗脫體積6BV,收集30 %己醇洗脫液,回收溶劑,干燥,即得連翅活性部 位。
[00川 實施例2
[0052] (1)采用連翅干燥藥材10kg粉碎,用10化體積濃度為50%己醇提取2次,每次 化;將提取液合并后過濾,濾液減壓回收溶劑,濃縮后得連翅總提取物;
[0053] (2)使用蒸傭水將所得連翅總提取物密度調(diào)至1. 10,依次用體積比為1倍量的氯 仿,己酸己醋,正了醇萃取,每種試劑萃取5次,合并正了醇部位溶液減壓回收溶劑并干燥, 得連翅正了醇部位;
[0054] (3)取連翅正了醇部位加水分散溶解,靜置過夜,W300化/min的速度離必20min 后取上清液,濃縮至濃度為1.Og/血的上樣液。上樣液通過AB-8大孔吸附樹脂,樹脂填充 體積(mL)與上樣量(g)比為30:1,先用體積濃度為5%己醇洗脫,洗脫體積3BV,再用50% 己醇洗脫,洗脫體積5BV,收集50%己醇洗脫液,回收溶劑,干燥,即得連翅活性部位。
[00財 實施例3
[0056] (1)采用連翅干燥藥材10kg粉碎,用60L體積濃度為95%己醇提取4次,每次比; 將提取液合并后過濾,濾液減壓回收溶劑,濃縮后得連翅總提取物;
[0057] (2)使用蒸傭水將所得連翅總提取物密度調(diào)至1. 10,依次用體積比為2倍量的石 油離,氯仿,正了醇萃取,每種試劑萃取4次,合并正了醇部位溶液減壓回收溶劑并干燥,得 連翅正了醇部位;
[0058] (3)取連翅正了醇部位加水分散溶解,靜置過夜,W300化/min的速度離必20min 后取上清液,濃縮至濃度為1.Og/血的上樣液。上樣液通過HPD-826大孔吸附樹脂,樹脂填 充體積(血)與上樣量(g)比為10:1,先用體積濃度為10%己醇洗脫,洗脫體積1BV,再用 70%己醇洗脫,洗脫體積3BV,收集70%己醇洗脫液,回收溶劑,干燥,即得連翅活性部位。
[0059] 實施例4
[0060] (1)采用連翅干燥藥材10kg粉碎,用40L體積濃度為30%己醇提取5次,每次比; 將提取液合并后過濾,濾液減壓回收溶劑,濃縮后得連翅總提取物;
[0061] (2)使用蒸傭水將所得連翅總提取物密度調(diào)至1. 10,依次用體積比為3倍量的石 油離,氯仿,己酸己醋,正了醇萃取,每種試劑萃取4次,合并正了醇部位溶液減壓回收溶劑 并干燥,得連翅正了醇部位;
[0062] (3)取連翅正了醇部位加水分散溶解,靜置過夜,W300化/min的速度離必20min 后取上清液,濃縮至濃度為1.Og/血的上樣液。上樣液通過DM130大孔吸附樹脂,樹脂填充 體積(mL)與上樣量(g)比為15:1,先用體積濃度為5%己醇洗脫,洗脫體積3BV,再用40% 己醇洗脫,洗脫體積6BV,收集40%己醇洗脫液,回收溶劑,干燥,即得連翅活性部位。
[0063] 實施例5
[0064] (1)采用連翅干燥藥材10kg粉碎,用10化體積濃度為蒸傭水提取4次,每次化; 將提取液合并后過濾,濾液減壓回收溶劑,濃縮后得連翅總提取物;
[0065] (2)使用蒸傭水將所得連翅總提取物密度調(diào)至1. 10,依次用體積比為2倍量的氯 仿,己離,己酸己醋,正了醇萃取,每種試劑萃取5次,合并正了醇萃取部位溶液減壓回收溶 劑并干燥,得連翅正了醇部位;
[0066] (3)取連翅正了醇部位加水稀釋溶解,靜置過夜,W300化/min的速度離必20min 后取上清液,濃縮至濃度為1.Og/血的上樣液。上樣液通過LSA-10大孔吸附樹脂,樹脂填 充體積(mL)與上樣量(g)比為20:1,先用蒸傭水洗脫,洗脫體積4BV,再用60%己醇洗脫, 洗脫體積4BV,收集60%己醇洗脫液,回收溶劑,干燥,即得連翅活性部位。
[0067] 實施例6
[0068] 按連翅活性部位50g,經(jīng)LH-20凝膠柱層析、0DS反相硅膠柱層析及制備型液相等 分離手段反復(fù)純化得到15個化合物,經(jīng)UV、IR、NMR、MS及CD等譜學(xué)手段分析鑒定其結(jié)構(gòu), 其中9個為新化合物上述新化合物的波譜信息及核磁信號歸屬如下:
[0069]
[0070]ForsythoneosideA:淺黃色不定形粉末;UVAmax(MeOH)nm: 332, 270, 256 ; HR-ESI-MSm/zl231. 3354[M+Hr(calcdfor056山3013, 123 1. 3348) ;IR3370 .5, 1692. 6, 1600. 7, 1519. 4, 1448. 0cm1 ; [a];: -58. 5 (cO.lOMeOH);CDAmax nm(Ae) :368 ( + 4. 55),275 (-1. 28) ;'HNMR(500MHz,aceticacid-cU) 5 :6. 52 (IH,s,H-6), 7. 92 (IH,d,J= 2.5Hz,H-12),7.10(lH,d,J= 8. 5Hz,H-15),7. 95(lH,dd,J= 8. 5,2. 5Hz,H-16),5. 10(lH,d,J= 7. 5Hz,H-17),3. 7 6 (IH,m,H-18),3. 75 (IH,m,H-19),3. 60 (IH,m,H-20),3. 53 (IH,m,H-21),3. 86 (IH,m,H -22a),3. 54 (IH,m,H-22b),4. 70 (IH,brs,H-23),3. 85 (IH,m,H-24),3. 80 (IH,m,H-25 ),3. 50 (IH,m,H-26),3. 61 (IH,m,H-27),1. 20 (IH,d,J= 6.OHz,H-28),7. 12 (IH,s,H -2' ),6. 70(lH,s,H-5' ),4.64(lH,m,H-7' ),3.98(lH,m,H-8'a),3.87(lH,m,H-8'b ),7. 15aH,d,J= 2.甜z,H-10 ' ),6. 85 (IH,d,J= 8.甜z,H-13 ' ), 7. 02 (IH,dd,J = 8.5,2.5Hz,H-14 ' ),7.64(lH,d,J=16.0Hz,H-15 ' ),6.33(lH,d,J= 16. 0Hz,H-16' ),4. 48(lH,d,J= 8.0Hz,H-18' ),3. 56(lH,m,H-19' ),3.84 (lH,m,H-20 '),4. 98(lH,t,J=10. 0Hz,H-21' ),3. 39(lH,m,H-22' ),3. 65(lH,m,H-23'a),3. 51( lH,m,H-23'b), 4.74(lH,brs,H-24' ),3.91 化'),3.82 H-26' ),3.48 (lH,m ,H-27' ),3.65(lH,m,H-28' ),1.12(lH,d,J= 6.0Hz,H-29' );"CNMR(125MHz,acetic acid-cQ5 :161. 1 (C-2),138. 7 (C-3),181. 5 (C-4),162. 7 (C-5),102. 6 (C-6),161. 5 (C-7 ),103. 6(C-8), 156. 8(C-9), 110.O(C-IO), 125.O(C-ll), 119. 5(C-12), 147. 0(C-13), 151 .5(C-14), 118. 8(C-15), 126. 9(C-16), 107. 8 (C-17), 77. 4 (C-18), 79. 6 (C-19), 72. 3 (C-20),78. 3 (C-21),70. 6 (C-22),103. 6 (C-23),73. 8 (C-24),74. 3 (C-25),75. 9 (C-26),71. 3(C-27),19. 8(C-28),115. 7(C-r),119. 0(C-2' ),144. 0(C-3' ),147. 7(C-4' ),106 ,7(C-5' ),147.2(C-6' ),36.3(C-7' ),77.4(C-8' ),130.0(C-9' ),117.5(C-10' ),147.6( C-11' ),150. 5(C-12' ),118. 6(C-13' ),125. 6(C-14' ),149. 8(C-15' ),116. 9(C-16'), 170.5(C-17' ),105. 5(C-18' ),76.8(C-19' ),77. 5(C-20' ),73.9(021' ),76.3(C-22' ),69. 6(C-23' ),103. 2(C-24' ),73. 6(C-化'),74. 2(C-26' ),75. 8(C-27' ),71.4(C-28' ),19 .6(C-29')。
[0071]
[0072] ForsythoneosideB:淺黃色不定形粉末;UVAmax(Me0H)nm:332,270,256; HR-ESI-MS m/zl231