上述成套抗腫瘤試劑中，所述嚴(yán)格條件是在2XSSC，0. 1%SDS的溶液中，在68°C 下雜交并洗膜2次，每次5min，又于0. 5XSSC，0. 1 %SDS的溶液中，在68°C下雜交并洗膜2 次，每次15min。
[0057] 上述75%或75%W上同一性，可為80%、85%、90%或95%W上的同一性。
[005引上述成套抗腫瘤試劑中，所述T淋己細(xì)胞可為含有T淋己細(xì)胞的外周血單個(gè)核細(xì) 胞（peripheralbloodmononuclearcell，PMBC)。
[0059] 所述外周血單個(gè)核細(xì)胞具體可按Ficol1分層液法制備。
[0060] 上述成套抗腫瘤試劑中，所述成套抗腫瘤試劑還包括所述SCAB識(shí)別的蛋白質(zhì)。
[0061] 上述成套抗腫瘤試劑中，所述SCAB識(shí)別的蛋白質(zhì)為下述X)或y):
[0062] X)序列表中SEQIDNo. 3的第1-559位氨基酸所示的蛋白質(zhì)；
[0063] y)包含序列表中SEQIDNo. 4的第13-126位氨基酸的蛋白質(zhì)。
[0064] 上述成套抗腫瘤試劑中，所述成套抗腫瘤試劑可只由所述SCAB和所述效應(yīng)細(xì)胞 組成，其名稱為成套抗腫瘤試劑1 ;所述成套抗腫瘤試劑也可由所述SCAB、所述效應(yīng)細(xì)胞和 所述SCAB識(shí)別的蛋白質(zhì)組成，其名稱為成套抗腫瘤試劑2。 陽0化]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了下述任一產(chǎn)品：
[0066] h)所述SCAB;
[0067] i)所述生物材料； W側(cè)如含有所述SCAB的融合抗體； W例 k)所述SCAB誘導(dǎo)的T淋己細(xì)胞；
[0070] 1)所述生物材料誘導(dǎo)的T淋己細(xì)胞；
[0071] m)所述融合抗體誘導(dǎo)的T淋己細(xì)胞；
[0072] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了下述任一產(chǎn)品：
[0073] C1、治療和/或預(yù)防腫瘤的產(chǎn)品，其活性成分為所述成套抗腫瘤試劑；
[0074] C2、治療和/或預(yù)防腫瘤的產(chǎn)品，其活性成分為所述SCAB;
[0075] C3、治療和/或預(yù)防腫瘤的產(chǎn)品，其活性成分為所述生物材料；
[0076] C4、治療和/或預(yù)防腫瘤的產(chǎn)品，其活性成分為所述融合抗體；
[0077] C5、治療和/或預(yù)防腫瘤的產(chǎn)品，其活性成分為所述成套抗腫瘤試劑誘導(dǎo)的T淋己 細(xì)胞；
[007引 C6、治療和/或預(yù)防腫瘤的產(chǎn)品，其活性成分為所述SCAB誘導(dǎo)的T淋己細(xì)胞；
[0079] C7、治療和/或預(yù)防腫瘤的產(chǎn)品，其活性成分為所述生物材料誘導(dǎo)的T淋己細(xì)胞；
[0080] C8、治療和/或預(yù)防腫瘤的產(chǎn)品，其活性成分為所述融合抗體誘導(dǎo)的T淋己細(xì)胞。
[0081] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了下述任一應(yīng)用：
[0082] L1)所述成套抗腫瘤試劑在制備腫瘤抑制劑或腫瘤細(xì)胞抑制劑中的應(yīng)用；
[0083] L2)所述SCAB在制備腫瘤抑制劑或腫瘤細(xì)胞抑制劑中的應(yīng)用；
[0084] L3)所述生物材料在制備腫瘤抑制劑或腫瘤細(xì)胞抑制劑中的應(yīng)用；
[0085]L4)所述融合抗體在制備腫瘤抑制劑或腫瘤細(xì)胞抑制劑中的應(yīng)用；
[0086]L5)所述成套抗腫瘤試劑誘導(dǎo)的T淋己細(xì)胞在制備腫瘤抑制劑或腫瘤細(xì)胞抑制劑 中的應(yīng)用；
[0087]L6)所述SCAB誘導(dǎo)的T淋己細(xì)胞在制備腫瘤抑制劑或腫瘤細(xì)胞抑制劑中的應(yīng)用；
[008引 L7)所述生物材料誘導(dǎo)的T淋己細(xì)胞在制備腫瘤抑制劑或腫瘤細(xì)胞抑制劑中的應(yīng) 用；
[0089]L8)所述融合抗體誘導(dǎo)的T淋己細(xì)胞在制備腫瘤抑制劑或腫瘤細(xì)胞抑制劑中的應(yīng) 用。
[0090] 所述SCAB的制備方法，也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0091] 本發(fā)明中，所述腫瘤可為實(shí)體腫瘤。所述實(shí)體腫瘤具體可為惡性腫瘤。所述惡性 腫瘤可為肺癌、非小細(xì)胞肺癌、宮頸癌、前列腺癌、膜腺癌、腸癌、鼻咽癌、肝癌、胃癌、乳腺癌 或子宮內(nèi)膜癌，具體可為人肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549引發(fā)的腫瘤。所述腫瘤細(xì)胞可為引發(fā)所述腫瘤 的細(xì)胞，如A549。
[0092] 實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明的單鏈抗體SCAB能刺激T淋己細(xì)胞增殖，也能高效地誘導(dǎo)人T 淋己細(xì)胞殺傷表達(dá)CD105的293T-肥細(xì)胞，并且該殺傷作用隨效祀比的增加而增強(qiáng)。
[0093] 實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明的單鏈抗體SCAB對(duì)腫瘤的生長具有抑制作用，且治療作用隨 SCAB劑量的增加而增強(qiáng)：在治療第30天，100yg/100y1的SCAB+PBMC治療的小鼠未見腫 瘤生長；10yg/100y1的SCAB+PBMC和1yg/100y1的SCAB+PBMC治療的小鼠的腫瘤體積 分別為BscAbxCD3+PBMC治療小鼠的腫瘤體積的0. 0281倍和0. 4687倍。
[0094] 本發(fā)明的成套抗腫瘤試劑1對(duì)腫瘤的生長具有抑制作用，且治療作用隨SCAB劑 量的增加而增強(qiáng)：在治療第30天，100yg/100y1的SCAB+PBMC治療的小鼠未見腫瘤生長； 10yg/100y1的SCAB+PBMC治療的小鼠的腫瘤體積的分別為SCAB、PBMC和PBS治療小鼠的 腫瘤體積的0. 0277倍、0. 0279倍和0. 0273倍；1yg/100y1的SCAB+PBMC治療的小鼠的腫 瘤體積的分別為SCAB、PBMC和PBS治療小鼠的腫瘤體積的0. 4609倍、0. 4654倍和0. 4551 倍。 W95] 本發(fā)明的成套抗腫瘤試劑2對(duì)腫瘤也具有治療作用：在治療第30天，SCAB-CD105+PBMC治療的小鼠的腫瘤體積分別為SCAB、PBMC和PBS治療小鼠的腫瘤體積的 0. 4559 倍、0. 4604 倍和 0. 4502 倍。
[0096] 實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明的成套抗腫瘤試劑1和單鏈抗體SCAB能誘導(dǎo)的T淋己細(xì)胞來治 療腫瘤，治療具有祀向性且治療效果隨SCAB濃度的增加而增強(qiáng)。
【附圖說明】
[0097] 圖1為SCAB的純化圖譜。
[0098] 圖2為純化后的SCAB的SDS-PAGE電泳圖。
[0099] 圖3為純化后的SCAB的WesternBlot檢測結(jié)果。其中，泳道Ladder為蛋白分子 量標(biāo)準(zhǔn)。
[0100] 圖4為SCAB與293T和293T-肥的結(jié)合流式分析圖。其中SCAB濃度單位為yg/ rnL〇
[0101] 圖5為SCAB與CD4、CD8結(jié)合流式分析圖。
[0102] 圖6為SCAB特異性刺激人T淋己細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 陽103]圖7為不同濃度SCAB和不同效祀比誘導(dǎo)人T淋己細(xì)胞細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)結(jié)果。其中，A為不同濃度SCAB誘導(dǎo)人T細(xì)胞細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)結(jié)果；B為不同效祀比誘導(dǎo)人T淋己細(xì)胞細(xì)胞毒 實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖。 陽104] 圖8為SCAB對(duì)腫瘤的治療作用。其中，A為不同濃度的SCAB治療腫瘤后的腫瘤 體積；B為不同物質(zhì)治療腫瘤后的腫瘤體積。 陽1化]圖9為肥染色法檢測SCAB治療腫瘤后體內(nèi)重要器官的結(jié)果圖（400X)。
【具體實(shí)施方式】 陽106] 下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)描述，給出的實(shí)施例僅為了闡 明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。 陽107] 下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。 陽10引下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。 陽109] 下述實(shí)施例中的祀T28a(+)為南京金斯瑞生物科技有限公司產(chǎn)品。
[0110] 下述實(shí)施例中的大腸桿菌化21 〇)E3)為南京金斯瑞生物科技有限公司產(chǎn)品。 陽1川下述實(shí)施例中的61、41、21、謹(jǐn)、5〇1111、01復(fù)性溶液分別為向去離子水中加入尿素 和A液得到的尿素濃度分別為6M、4M、2M、lM、50mM和0M，A液的體積百分比濃度均為10% 的無菌溶液，6M、4M、2M、lM、50mM、0M復(fù)性溶液的抑均為8. 0。A液由溶質(zhì)和溶劑組成，pH 為8. 0,其中，溶劑為去離子水，溶質(zhì)及其濃度分別為50mMTris-Cl、200mM化Cl、lmM邸TA、 5% (體積百分比濃度）甘油、ImM苯甲基橫酷氣（PMSF)、0.Immol/L氧化型谷脫甘膚和 Immol/L還原型谷脫甘膚。
[0112] 下述實(shí)施例中的293T細(xì)胞不表達(dá)人CD105, 293T細(xì)胞為ATCC公司產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄 號(hào)為C化-3216?。
[0113] 下述實(shí)施例中的293T-肥為表達(dá)人CD105的穩(wěn)轉(zhuǎn)株，293T-肥為南京金斯瑞生物科 技有限公司產(chǎn)品。
[0114] 下述實(shí)施例中的CFSE為eBioscience公司產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號(hào)為65-0850。
[0115] 下述實(shí)施例中的0KT3是美國Ortho公司生產(chǎn)的0KT(0rthoKungTcell0KT)系 列中的一種抗人T淋己細(xì)胞分化抗原CD3的單克隆抗體，貨號(hào)為NDC: 59676-101。
[0116] 下述實(shí)施例中的BscAbxCD3為對(duì)照的雙特異性單鏈抗體，BscAbxCD3為南京金斯 瑞生物科技有限公司產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號(hào)為7107614-1。
[0117] 下述實(shí)施例中的人肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549為ATCC公司產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號(hào)為V-054279。
[0118] 下述實(shí)施例中的N0D/SCID小鼠為北京聯(lián)通利華信息技術(shù)有限公司產(chǎn)品，NOD. CB17-PrkdcSud/NcrCrl化，產(chǎn)品目錄號(hào)為 406。 陽119] 下述實(shí)施例中的CD105為重組人CD105胞外段，其氨基酸序列為序列表中SEQID No. 3的第1-559位，CD105為畑公司產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號(hào)為1097-EN。
[0120] 下述實(shí)施例中的Anti-6XHis-PerCP抗體為油cam公司產(chǎn)品，貨號(hào)為油17496， Anti-6XHis-PerCP標(biāo)記有巧光物質(zhì)PerCP。 陽121] 實(shí)施例1、單鏈抗體和成套抗腫瘤試劑的制備 陽122] 本發(fā)明所提供的成套抗腫瘤試劑，為成套抗腫瘤試劑1和成套抗腫瘤試劑2。 陽123] 成套抗腫瘤試劑1由單鏈抗體和PMBC組成；單鏈抗體名稱為SCAB,由下述甲、乙、 丙和下的蛋白質(zhì)連接而成：
[0124] 甲、序列表中SEQIDNo. 1的第37-161位氨基酸所示的蛋白質(zhì)； 陽1巧]乙、序列表中SEQIDNo. 1的第177-289位氨基酸所示的蛋白質(zhì)；