Salipro顆粒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及脂蛋白顆粒，其用作疏水試劑（如疏水性藥物或膜蛋白）的遞送或載 體系統(tǒng)，本發(fā)明還設(shè)及用于制備該盤狀脂蛋白的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 膜蛋白和疏水性的化合物非常難W處理，并且制藥和生命科學(xué)研究和應(yīng)用中具 有兩個(gè)主要的挑戰(zhàn)：（i)為不可溶的疏水化合物或膜蛋白提供在水溶液中的可溶性，W及 (ii)將運(yùn)類疏水性物質(zhì)作為治療劑和診斷劑施用。
[0003] 膜蛋白由全部ORF的大約30%編碼（參見文獻(xiàn)"WallinandvonHeiJne,Protein Science1998Apr;7 (4) : 1029-38")，并且由于大部分（即，大于60% )藥物實(shí)際上革己向 運(yùn)類蛋白，因此其代表了一類重要的藥物祀點(diǎn)（參見文獻(xiàn)"Overingtonetal.，化化re ReviewsDrugDiscovery5, 993-996(December2006)")。膜蛋白在許多生物過程中發(fā)揮 重要作用，如信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、分子和能量運(yùn)輸、識(shí)別和細(xì)胞通訊。然而，當(dāng)將膜蛋白從其天然脂雙 層環(huán)境中提取出來后，膜蛋白由于其不溶性和趨于聚集的性質(zhì)而難W研究。為了維持膜蛋 白的完整性，需要人造的疏水環(huán)境。在此，去垢劑膠束是最常使用的，然而其會(huì)對(duì)生物相容 性產(chǎn)生負(fù)作用，能夠?qū)δさ鞍椎幕钚援a(chǎn)生不利影響，并且可能會(huì)干擾檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)條件。
[0004] 另一個(gè)主要的藥理學(xué)挑戰(zhàn)是，施用和遞送疏水性化合物和/或疏水性蛋白作為治 療劑或診斷劑。由于運(yùn)些疏水性試劑的溶解度有限，它們趨于聚集，運(yùn)將導(dǎo)致局部藥物顆 粒濃度高，從而會(huì)導(dǎo)致高的毒性、不希望的免疫反應(yīng)，并且會(huì)使藥物失活（參見文獻(xiàn)"Allen andCullis,SCIENCE, 303 (5665) :1818-1822,MAR19,2004")。
[0005] 因此，非常需要將諸如膜蛋白、藥物或診斷化合物等疏水試劑納入可溶性的顆粒 中的應(yīng)用。目前，解決運(yùn)兩個(gè)挑戰(zhàn)的方法主要設(shè)及脂質(zhì)體和重組高密度脂蛋白（r皿L)顆粒 (參見文獻(xiàn)"QianandBoxer,QirrentOpinioninchemicalBiology11:1-7, 2007")。
[0006]EP1596828B1公開了盤狀生物活性試劑運(yùn)送顆粒，包含W雙帶樣形式緊密包圍脂 雙層的載脂蛋白。上述顆粒的內(nèi)部由脂雙層的疏水區(qū)域形成。運(yùn)與具有含水內(nèi)部的封閉球 狀雙層殼的脂質(zhì)體不同。EP1596828B1中公開的盤狀生物活性試劑運(yùn)送顆粒的斯托克斯直 徑約為IOnm,并且提出了將其用作疏水性藥物如兩性霉素B或喜樹堿的遞送載體。
[0007]EP1345959B1公開了相似類型的直徑約10皿、高度約5. 5皿的納米顆粒。該顆粒 為盤狀，并且由（i)人工膜腳手架蛋白、（ii)憐脂雙分子層和（iii)至少一種疏水性或部 分疏水性膜蛋白組成。所述膜腳手架蛋白也W雙帶樣式包圍脂雙層，并且是人載脂蛋白A-I 的衍生物或截短形式，缺少人載脂蛋白A-I的N-末端球狀結(jié)構(gòu)域，其是兩親性的并且形成 至少一個(gè)a螺旋，并且在水環(huán)境中會(huì)與憐脂或憐脂的混合物自組裝成所述盤狀的納米顆 粒。運(yùn)種工程化的膜腳手架蛋白（MS巧將為納米級(jí)盤狀脂蛋白顆粒提供穩(wěn)定性、尺寸均勻 性W及有用的功能性。
[0008] 然而，目前可用的納米盤技術(shù)存在一些缺點(diǎn)，例如，在顆粒的組裝過程中需要去除 去垢劑。除此之外，在現(xiàn)有技術(shù)的方法中，由載脂蛋白衍生的MSP的緊密雙帶樣形式提供的 尺寸均勻性似乎導(dǎo)致了運(yùn)樣的代價(jià)：固定的最小顆粒尺寸，和限制了可獲得的最大直徑。
[0009] 銷脂激活蛋白（saposin)家族包括4種?。ù蠹s80個(gè)氨基酸）蛋白，包括銷脂激 活蛋白A到D，其與脂結(jié)合和/或相互作用，并且在銷脂代謝中作為一些溶酶體酶的重要輔 因子（參見"化化n，BiochemJ. (2005) 389, 249-257"和其所引用的文獻(xiàn)）。據(jù)描述，銷脂激 活蛋白更偏好帶負(fù)電荷的脂質(zhì)和低抑值，在酸性抑環(huán)境中顯示出明顯提高的活性，最佳抑 值為溶酶體內(nèi)4. 75的抑值。銷脂激活蛋白A、B、C和D由單一的大的前體蛋白銷脂激活 蛋白原（prosaposin)通過蛋白水解作用水解而得。已經(jīng)報(bào)道了銷脂激活蛋白A、B、C和D 的完整氨基酸序列、化及銷脂激活蛋白原的基因組結(jié)構(gòu)和CDNA序列（請(qǐng)參見"0'化ienet al. (1988)Science241, 1098-1101 !F^irst等（1992)BiochimBio地ysActa1126:1-16")。
[0010] 銷脂激活蛋白C在酸性環(huán)境中能夠誘導(dǎo)含憐脂的載體發(fā)生膜融合（參見 "ArchivesofBiochemistryandBiophysics2003Jul1;415(1) :43-53"),其他銷脂激 活蛋白沒有表現(xiàn)出該特征。文獻(xiàn)"Qietal. (2009)ClinCancerRes15(18):5840 - 5851" 報(bào)道了銷脂激活蛋白C偶聯(lián)的二油酷基憐脂酷絲氨酸納米載體（SapC-DOP巧，其具有含水 內(nèi)部、大約190nm的平均直徑，并且在體內(nèi)表現(xiàn)出腫瘤祀向活性。在SapC-DOPS中，銷脂激 活蛋白C或其衍生膚作為其結(jié)合的脂質(zhì)體的導(dǎo)向膚化omingP巧tide)。銷脂激活蛋白C而 后祀向脂質(zhì)體到細(xì)胞膜外葉暴露有憐醋酷絲氨酸的癌細(xì)胞。作者認(rèn)為，由于溶酶體酶的細(xì) 胞外泄漏而導(dǎo)致的癌細(xì)胞周圍的獨(dú)特酸性微環(huán)境使得腫瘤組織成為銷脂激活蛋白C的最 佳祀標(biāo)。根據(jù)Qi等人所述，SapC-DCPS溶酶體通過W下方法制備：在N2(g)下干燥溶劑溶 解的憐脂，將干燥的憐脂分散在含有純化的銷脂激活蛋白C的酸性緩沖液（pH5)中，在生 理水溶液中將混合物稀釋50倍，W及通過后續(xù)的超聲處理促進(jìn)納米載體組裝。
[0011]文獻(xiàn)叩opovicetal. ,PNAS,Vol. 109,No. 8 (2012) 2908-2912"報(bào)道了銷脂激活蛋 白A去垢劑盤的結(jié)構(gòu)。銷脂激活蛋白AW可溶的、脂/去垢劑-結(jié)合的狀態(tài)存在。在脂質(zhì) 缺乏時(shí)，銷脂激活蛋白A采取封閉的無配體（apo)構(gòu)象。相反，Popovic等報(bào)道的銷脂激活 蛋白A去垢劑盤結(jié)構(gòu)顯示了開放構(gòu)象的銷脂激活蛋白A的兩條鏈，其包裹了 40個(gè)內(nèi)部結(jié)合 的去垢劑分子，它們被組織在高度有序的雙層樣疏水核屯、中。
[0012] 除了銷脂激活蛋白A去垢劑盤的結(jié)晶作用，Popovic等還描述了可溶性脂-銷脂激 活蛋白A復(fù)合物的制備，其在4. 75的抑下通過需要多步的方法進(jìn)行。首先，通過如下方式 制備均勻級(jí)分的大單層脂質(zhì)體載體：在N2(g)下干燥用氯仿溶解的脂質(zhì)，通過滿旋混合將干 燥的脂質(zhì)分散在酸性緩沖液巧OmM乙酸鋼抑4.8,150mM化Cl)中，對(duì)懸浮液進(jìn)行10個(gè)凍 融循環(huán)，在滿旋混合器中混合5分鐘，將混合物擠壓通過200nm過濾器。在酸性緩沖液中將 由此制備的大單層脂質(zhì)體載體與純化的銷脂激活蛋白A混合，由此獲得可溶的脂質(zhì)-銷脂 激活蛋白A顆粒。該顆粒表現(xiàn)出窄的尺寸分布，即，大約平均3. 2nm的流體動(dòng)力學(xué)（斯托克 斯）半徑，并且每個(gè)銷脂激活蛋白A鏈含有大約5:1的脂質(zhì)分子。顆粒的精確大小僅適度 地受到脂質(zhì)與蛋白的摩爾比W及脂質(zhì)體的組成的影響。無論在脂質(zhì)體混合物中是否存在陰 離子憐脂、膽固醇或銷糖脂，作者均觀察到了相似的3. 2nm的顆粒。在所有情況下，在3. 2nm 斯托克斯半徑的尺寸范圍內(nèi)觀察到了單一的峰，運(yùn)提示了相對(duì)窄的種類分布。因此，該文獻(xiàn) 公開的技術(shù)限制于4. 75的抑值、上述顆粒大小W及包括繁復(fù)的上游脂質(zhì)體制備步驟。
[0013] 在該背景下，需要一種可靠且易于實(shí)施的制備穩(wěn)定的特定脂蛋白-顆粒組合物的 方法，W使膜蛋白和其他疏水化合物溶液化?？紤]到現(xiàn)有技術(shù)中所公開的用于制備盤狀脂 蛋白顆粒的方法費(fèi)事且具有多個(gè)步驟，因此尤其具有運(yùn)樣的需求。
[0014] 多種疏水試劑能夠潛在地從現(xiàn)有技術(shù)中記載的載脂蛋白-或銷脂激活蛋白A-衍 生的納米盤技術(shù)中獲益。然而，由于銷脂激活蛋白A衍生顆粒具有3. 2nm大小的限制，似乎 (如果有的話）只有小分子可W在其中所公開的酸性抑值下被納入所述顆粒。盡管體積大 的疏水化合物和大的生物分子如（寡聚）膜蛋白能夠被納入現(xiàn)有技術(shù)中的載脂蛋白A衍生 的納米盤，但是可行的最大直徑仍然受到運(yùn)些顆粒的雙帶樣載脂蛋白A的周長(zhǎng)的限制。此 夕F，IOnm的載脂蛋白A衍生納米盤對(duì)于某些應(yīng)用而言可能過大。因此，需要先進(jìn)的納米盤技 術(shù)和更優(yōu)的具有靈活可控的尺寸范圍的脂蛋白顆粒，使得能夠適應(yīng)待被納入脂蛋白顆粒中 的疏水試劑的各自的尺寸。運(yùn)樣的顆粒應(yīng)當(dāng)可W簡(jiǎn)單地整合膜蛋白和其他疏水組分，所述 其他疏水組分例如可W為具有藥學(xué)或生物學(xué)活性的化合物或診斷化合物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0015] 本發(fā)明所要解決的問題是提供一種納米級(jí)脂蛋白顆粒，其大小可控和/或其大小 適應(yīng)于被納入的分子的性質(zhì)，并且其易于制備并且隨著時(shí)間的推移能夠保持均一的大小、 品質(zhì)和組成。
[0016] 該問題通過運(yùn)樣的顆粒而得W解決，該顆粒包含脂質(zhì)結(jié)合多膚、至少一種脂質(zhì)和 一種疏水試劑，其中所述疏水試劑不同于所述至少一種脂質(zhì)，并且其中所述脂質(zhì)結(jié)合多膚 是銷脂激活蛋白類蛋白或其衍生物或截短形式。
[0017] 本發(fā)明還提供了一種藥物組合物或診斷用組合物，其包含本發(fā)明所述的顆粒。
[0018] 本發(fā)明還提供了用于制備包含脂質(zhì)結(jié)合多膚和脂質(zhì)的顆粒的方法，其中所述脂質(zhì) 結(jié)合多膚為銷脂激活蛋白類蛋白或其衍生物或截短形式，并且其中所述方法包括W下步 驟：在液體環(huán)境中使所述脂質(zhì)結(jié)合多膚與溶液化的脂質(zhì)接觸；并且在抑值為5. 0-10下使 得自組裝成所述顆粒。
[0019] 最終，本發(fā)明所述顆粒能夠作為疏水試劑遞送載體、作為藥物研發(fā)、藥物篩選、膜 蛋白研究的工具、W及作為疫苗接種制劑。
[0020] 不限于此理論，疏水試劑與脂質(zhì)W及銷脂激活蛋白類蛋白或其衍生物或截短形式 的結(jié)合看來提供了堅(jiān)固的結(jié)構(gòu)，其在廣泛抑范圍（特別是生理抑值）的水性溶液中穩(wěn)定 存在，并且使得能夠獲得比現(xiàn)有技術(shù)中3. 2nm的銷脂激活蛋白A衍生的脂蛋白顆粒更大的 顆粒。本發(fā)明所述的顆粒是通過本發(fā)明的方法獲得的，該方法在抑5.0至10下操作，運(yùn)樣 使得能夠自組裝成本發(fā)明所述的顆粒。
[0021] 能夠通過本發(fā)明所述方法獲得的銷脂激活蛋白類蛋白-脂蛋白顆粒（本文稱為 "Salipro顆粒"）在多個(gè)特征上與現(xiàn)有技術(shù)中的顆粒不同，例如，它們具有內(nèi)在的尺寸可變 性，并且能夠適應(yīng)于待被納入脂蛋白顆粒中的疏水試劑的各自的尺寸。
[0022] 與銷脂激活蛋白-脂蛋白顆粒應(yīng)當(dāng)在或接近于銷脂激活蛋白的最佳4. 75的天然 抑值下進(jìn)行最佳的組裝的預(yù)期不同，發(fā)現(xiàn)在制備銷脂激活蛋白-脂蛋白顆粒的過程中，保 持更加中性或堿性的抑能夠獲得具有改進(jìn)的性能和更廣的應(yīng)用范圍的銷脂激活蛋白-脂 蛋白顆粒。令人驚訝的是，發(fā)現(xiàn)在抑從5. 0到10W及存在溶液化的脂質(zhì)時(shí)，純化的銷脂激 活蛋白類蛋白或其衍生物或截短形式自組裝成穩(wěn)定的脂蛋白顆粒，而不需要繁瑣的上游脂 質(zhì)體制備步驟。當(dāng)嘗試在銷脂激活蛋白的最優(yōu)4. 75的天然抑下或者在缺乏脂質(zhì)下進(jìn)行顆 粒的組裝時(shí)，該簡(jiǎn)單且可靠的制備方法不能獲得滿意的結(jié)果。
[002引本發(fā)明所述Salipro顆粒被證明在生理抑值下能夠納入各種脂質(zhì)、膜蛋白和疏水 化合物，從而產(chǎn)生在水性環(huán)境中可溶且穩(wěn)定的納米復(fù)合物。
[0024] 本發(fā)明所述Salipro顆粒在經(jīng)受標(biāo)準(zhǔn)離屯、過濾單元進(jìn)行濃縮、W及冷凍和解凍時(shí) 是堅(jiān)固的。此外，實(shí)際實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明所述Salipro顆粒展現(xiàn)出一定程度的熱穩(wěn)定性。除 此之外，可W對(duì)本發(fā)明所述顆粒進(jìn)行冷凍干燥、儲(chǔ)存和再水化，而不會(huì)觀察到任何大的品質(zhì) 劣化。
【具體實(shí)施方式】
[0025] 脂質(zhì)結(jié)合多膚是銷脂激活蛋白類蛋白（SAPLI巧或其衍生物或截短形式。本文 所用的術(shù)語"銷脂激活蛋白類蛋白"（SAPLI巧是本領(lǐng)域熟知的，并且包括脂質(zhì)相互作用蛋 白的銷脂激活蛋白類蛋白（SAPLI巧家族的所有成員。SAPLIP家族的特征是具有銷脂激 活蛋白折疊，其為通過高度保守的分子內(nèi)二硫鍵保持穩(wěn)定的保守的a螺旋=維結(jié)構(gòu)（參 見文獻(xiàn)"Munford等.（1995)，JournalOf LipidResearch,vol. 36,no. 8, 1653 - 1663" 和"Bruhn(2005)，BiochemJ389(15) :249 - 257")。本發(fā)明所述的銷脂激活蛋白類 蛋白（SAPLIF0 家族的成員的例子在文獻(xiàn)"Munfordetal. (1995),JournalofLipid Research,vol. 36,no. 8, 1653 - 1663"和"化uhn(2005)，BiochemJ389 (15) : 249 - 257"中 有所描述，在此通過引用的方式將其全部?jī)?nèi)容并入本文。
[002引在無配體（即，無去垢劑/無脂質(zhì)）的"封閉"狀態(tài)下，SAPLIP采取單體緊湊四 螺旋束型結(jié)構(gòu)，即，銷脂激活蛋白折疊。該折疊可W列舉W下結(jié)構(gòu)：人脂激活蛋白A的封閉 無配體形式的結(jié)構(gòu)（蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)（PDB)ID編號(hào)：2D0B，參見"Ahnetal. (2006)Protein Sci.l5:1849-1857")或銷脂激活蛋白C的結(jié)構(gòu)（PDBID編號(hào)：lM12;參見"deA化aet al. (2003)Biochemist巧 42, 14729 - 14740")、NK-細(xì)胞溶素的結(jié)構(gòu)（PDBID編號(hào)：INKL;參 見"Liepinshetal. (1997)化t.Struct.Biol. 4, 793 - 795")、阿米己穿孔素A(amoebapore A)的結(jié)構(gòu)（PDBID編號(hào)：10F9)和顆粒溶素（granulysin)的結(jié)構(gòu)（PDBID編號(hào)：1L9L;參 見"Andersonetal. (2003)J.Mol.Biol. 325, 355 - 365")，它們的結(jié)構(gòu)均幾乎相同并且易 于重疊（super-impos曰ble)。
[0027] SAPLIP在結(jié)合至配體（例如脂質(zhì)或去垢劑分子）后發(fā)生構(gòu)象變化。在配體結(jié)合 "開放"構(gòu)象中，SAPLIP采取V形或飛旋標(biāo)形構(gòu)象，暴露出與所結(jié)合的脂質(zhì)接觸的疏水表 面。該開放構(gòu)象可列舉W下結(jié)構(gòu)：現(xiàn)有技術(shù)中的銷脂激活蛋白A去垢劑盤結(jié)構(gòu)（PDB ID編 號(hào)：4孤J ;參見叩opovic等.，PNAS, Vol. 109, No. 8 (2012) 2908-2912")、和結(jié)合至SDS去垢 劑膠束的銷脂激活蛋白C的結(jié)構(gòu)（PDB ID編號(hào)：1SN6 ;參見"Hawkins et al. (2005)J.M〇1. Biol. :346:1381-1392")。
[0028] 在本發(fā)明的顆粒中，脂質(zhì)結(jié)合多膚優(yōu)選為兩親性的，其結(jié)構(gòu)的一部分或多或少是 親水的并且面向水性溶劑，另一部分或多或少是疏水的并且面向所述顆粒的包含脂質(zhì)的疏 水中屯、。脂質(zhì)結(jié)合多膚優(yōu)選具有如下特點(diǎn)：具有運(yùn)樣的兩親性a螺旋，其具有更多的主要 位于螺旋的一面上的疏水殘基（如A、C、F、G、I、LM、V、W或Y)、W及更多的位于螺旋的另 一面上的極性或帶電荷的殘基（如D、E、N、Q、S、T、H、K或時(shí)。
[0029] 本文所述氨基酸殘基的縮寫如下：A，Ala,丙氨酸；V，Val,鄉(xiāng)氨酸山Leu,亮氨 酸；I，lie,異亮氨酸；P，Pro,脯氨酸；F，化e，苯丙氨酸；W，化p，色氨酸；M，Met,甲硫氨酸；G，Gly,甘氨酸；S，Ser,絲氨酸；T，1'虹，蘇氨酸；C，切S，半脫氨酸；Y，Tyr,酪氨酸；N，Asn, 天冬酷胺；Q，Gln,谷氨酷胺；D，Asp,天冬氨酸化Glu,谷氨酸；K，Lys,賴氨酸；R，Arg,精 氨酸；和H,化S,組氨酸。
[0030] 與現(xiàn)有技術(shù)中的載脂蛋白衍生納米盤不同，本發(fā)明所述脂質(zhì)結(jié)合多膚不W雙帶樣 形式包封脂質(zhì)（參見圖1)，相反，本發(fā)明所述顆粒通過包含脂質(zhì)的核屯、保持在一起，所述 脂質(zhì)被兩個(gè)或更多個(gè)近似V形或飛旋標(biāo)形狀的W頭-尾方向排列的脂質(zhì)結(jié)合多膚圍繞，并 且在本發(fā)明所述顆粒中，每個(gè)所述脂質(zhì)結(jié)合多膚之間實(shí)質(zhì)上沒有直接的蛋白與蛋白的接觸 (參見圖2-7)。希望不限于理論，認(rèn)為本發(fā)明的顆粒中的脂質(zhì)結(jié)合多膚和脂質(zhì)的運(yùn)種排列 方式提供了尺寸可變性，運(yùn)在體積大的疏水試劑或量增加的脂質(zhì)被納入本發(fā)明的顆粒中時(shí) 可W觀察到。
[0031] 盡管SAPLIP具有與脂質(zhì)相互作用的能力W及上述的兩親性性質(zhì)，并且S維結(jié)構(gòu) 高度保守，但是它們?cè)诎被嵝蛄兴缴鲜歉叨榷嘧兊?，其序列同一性低于定義同源性通 常所用的 25-30% 同一性的闊值范圍（參見"化Uhn(2005),BiochemJ389(15):249 - 257" 的圖4A和4B中的序列比對(duì)，本文W引用方式特別將其附圖并入本文）。
[0032] 在本發(fā)明所述脂蛋白顆粒中，脂質(zhì)結(jié)合多膚主要作為結(jié)構(gòu)蛋白，為本發(fā)明所述脂 蛋白顆粒提供盤狀結(jié)構(gòu)框架。由于運(yùn)個(gè)原因，與僅僅為序列決定相比，結(jié)構(gòu)特征、特別是 SAPLIP的銷脂激活蛋白折疊運(yùn)一特征對(duì)于限定本發(fā)明的脂質(zhì)結(jié)合多膚更加重要。
[0033] 本發(fā)明所述SPLIP的例子為銷脂激活蛋白A、B、C或D(例如W下來源的：人Olomo sapiens)[參見沈QIDNO. 1-4]、馬巧quusC油alius)、牛度OStaurus)、小家鼠（Mus mus州Ius)、家兔（Oryctolagus州ni州Ius)、大家鼠（Rattusnorvegicus)或非洲爪贍 狂enopusIaevis));表面活性蛋白B(例如W下來源的：人、家犬（Canisfamiliaris)、 小家鼠、家兔、綿羊（Ovisaries)或大家鼠）；粒溶素（例如人源的，參見SEQIDNO. 5); NK細(xì)胞溶素（如野豬（Susscrofa)源的；參見SEQIDNO. 6) ;NK細(xì)胞溶素直系同源 物（Odhologues)(如馬或牛來源的）；阿米己穿孔素（如溶組織內(nèi)阿米己巧ntamoeba histolytica)來源的）；阿米己穿孔素直系同源物（如迪斯帕內(nèi)阿米己巧ntamoeba dispar)或侵襲內(nèi)阿米己巧ntamoebainvadens)來源的）；阿米己穿孔素樣蛋白（如肝 片吸蟲（Fasciolahepatica)來源的）；耐格里屬阿米己穿孔素（化egleriapores)(如福 氏耐格里阿米己（化egleriafowleri)來源的）；Clo;rno;rin(如華支睪吸蟲（Clonorchis sinensis)來源的）；銷脂激活蛋白原（如人、馬、牛、小家鼠、家兔、大家鼠或非洲爪贍來源 的）和MSAP(如人源的）。
[0034] 本發(fā)明所用的特定的SAPLIP的序列在文獻(xiàn)"化Uhn(2005)，BiochemJ389(15): 249-257"的圖4A和4B中給出，其中所述附圖和序列特意通過引用方式并入本文。本發(fā)明 所用的特定SAPLIP的序列在如下序列中給出：SEQIDNO. 1銷脂激活蛋白A[人];SEQID N