刺甘草査爾酮的新用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及刺甘草査爾酮的新用途。
【背景技術(shù)】
[0002] Nrf2是II相解毒或抗氧化酶核心調(diào)節(jié)因子，能保護(hù)細(xì)胞避免發(fā)生氧化損傷。Nrf2 的激活可以增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力和機(jī)體排毒能力。Nrf2激動劑的使用被證明在多種疾病 上都能起到不同程度的保護(hù)作用。例如，SFN是一種從西蘭花、圓白菜中提取的化合物。諸 多文獻(xiàn)報道了 SFN對糖尿病、心血管疾病和神經(jīng)退行性疾病的保護(hù)作用。有研究表明，Nrf2 缺失會加重多種疾病的嚴(yán)重程度。例如，相較于對照組，小鼠胰島β細(xì)胞株ΜΙΝ6β細(xì)胞中 Nrf2敲除后，過氧化氫帶來的各項損傷包括細(xì)胞活力、細(xì)胞形態(tài)及凋亡等生物指標(biāo)都明顯 加強(qiáng)。因此，Nrf2激動劑的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用是十分必要的。
[0003] Nrf2在決定生物體壽命中發(fā)揮重要的作用。衰老是一個不可避免的過程，氧化損 傷會加速整個進(jìn)程。Nrf2激動劑可以激活A(yù)RE下游的抗氧化基因轉(zhuǎn)錄，減輕細(xì)胞的氧化損 傷，延緩衰老的進(jìn)程。目前研究表明二甲雙胍可以通過激活Nrf2及AMPK信號通路，延長線 蟲的壽命。另外，微囊蛋白-1抑制Nrf2信號通路，促進(jìn)氧化脅迫誘導(dǎo)的細(xì)胞衰老。
[0004] 肝臟是腹腔內(nèi)最大的實質(zhì)性器官，擔(dān)負(fù)人體的重要生理功能。許多物質(zhì)可通過胃 腸道門靜脈或體循環(huán)進(jìn)入肝臟進(jìn)行轉(zhuǎn)化，因此肝臟容易受到毒性物質(zhì)損傷。肝損傷在臨床 上較為常見，一直是醫(yī)學(xué)科學(xué)重點研究的對象之一。引起肝損傷的因素很多，包括藥物（化 療藥、解熱鎮(zhèn)痛藥、抗病毒藥等），大自然和人類工業(yè)生產(chǎn)過程中的化學(xué)物質(zhì)（黃曲霉毒素、 四氯化碳、二甲基甲酰胺等），病毒（甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒等）以及酒精等。肝損傷 的長期存在往往會導(dǎo)致肝臟不同程度的肝細(xì)胞壞死、脂肪變性、肝硬化甚至肝癌。因此，預(yù) 防和治療肝損傷是臨床上肝病治療的重要環(huán)節(jié)之一，是抑制肝纖維化、肝壞死、肝硬化以及 肝癌等疾病發(fā)生和發(fā)展的基礎(chǔ)。臨床上各種保肝藥物種類繁多，但大多價格昂貴，或具有較 大的毒副作用，從而使它們的使用受到限制。因此，發(fā)現(xiàn)有效的新型保肝藥物仍然具有重要 的現(xiàn)實意義和良好的應(yīng)用前景。
[0005] 刺甘草查爾酮（echinatin)，CAS號為34221-41-5,分子式為C16H 1404,分子量為 270。以前的文獻(xiàn)研究表明刺甘草查爾酮具有顯著的抗腫瘤活性（Shibata，S.等，Stem Cell 1994, 12, 44-52 ;Iwata, S.等，Biol. Pharm. Bull. 1995, 18, 1710-1713)以及治療牛皮癬的 作用[歐洲專利公開號EP0998939 (Al)]。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供刺甘草査爾酮的新用途。
[0007] 本發(fā)明提供的式I所示化合物（刺甘草査爾酮）和其醫(yī)學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑 化物、立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、前藥中的至少一種在制備具有如下（1)-(7)中至少一種功 能的產(chǎn)品中的應(yīng)用：
[0008]
[0009] ⑴激活Nrf2和/或AMPK信號通路；
[0010] ⑵增強(qiáng)Nrf2、抗氧化酶和/或代謝解毒酶的表達(dá)；
[0011] (3)抑制氧化造成的細(xì)胞損傷、組織損傷；
[0012] ⑷抗衰老；
[0013] (5)保護(hù)肝損傷；
[0014] (6)保護(hù)化學(xué)性肝損傷或保護(hù)氧化性肝損傷；
[0015] (7)用于抗皮膚細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化。
[0016] 上述的應(yīng)用中，所述抗氧化酶具體可為H0-1和/或NQ0-1 ;所述代謝解毒酶具體 可為谷胱甘肽；所述表達(dá)為mRNA水平和/或蛋白水平，即所述增強(qiáng)Nrf2、抗氧化酶和/或 代謝解毒酶的表達(dá)為增加 mRNA水平和/或蛋白水平。
[0017] 本發(fā)明的另一個目的是提供一種用于上述新用途的以刺甘草査爾酮為活性成分 的產(chǎn)品。
[0018] 本發(fā)明提供的一種Nrf2和/或AMPK信號激動劑，其活性成分為式I所示化合物 和其醫(yī)學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物、立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、前藥中的至少一種。
[0019] 本發(fā)明提供的一種抗氧化酶和/或代謝解毒酶誘導(dǎo)劑，其活性成分為式I所示化 合物和其醫(yī)學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物、立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、前藥中的至少一種。
[0020] 本發(fā)明提供的一種用于抗衰老和/或保護(hù)化學(xué)性肝損傷產(chǎn)品，其活性成分為式I 所示化合物（刺甘草査爾酮）和其醫(yī)學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物、立體異構(gòu)體、互變異構(gòu) 體、前藥中的至少一種。
[0021 ] 上述的產(chǎn)品中，所述產(chǎn)品可為藥品或保健食品。
[0022] 本發(fā)明提供的一種用于抗皮膚細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的產(chǎn)品，其活性成分為式I所示化合 物（刺甘草査爾酮）和其醫(yī)學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物、立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、前藥 中的至少一種。
[0023] 上述的產(chǎn)品中，所述產(chǎn)品可為藥品、保健品或皮膚護(hù)理劑。
[0024] 上述的產(chǎn)品為藥品時，所述藥品包括：
[0025] 1)式I所示化合物（刺甘草査爾酮）和其醫(yī)學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物、立體 異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、前藥中的至少一種；和
[0026] 2)藥學(xué)上可接受的載體。
[0027] 上述藥學(xué)上可接受的載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、 濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑等，各種劑型的藥物均可以按 照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制備得到。
[0028] 所述藥品的劑型包括但不限于：散劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、溶液劑、乳劑、混懸 劑、注射劑、氣霧劑、膏劑或滴劑。
[0029] 上述的產(chǎn)品為保健食品時，所述保健食品包括：
[0030] 1)式I所示化合物（刺甘草査爾酮）和其醫(yī)學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物、立體 異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、前藥中的至少一種；和
[0031] 2)保健食品中可接受的載體。
[0032] 上述的產(chǎn)品為皮膚護(hù)理劑時，所述皮膚護(hù)理劑泛指用于皮膚護(hù)理的產(chǎn)品，其形式 包括但不限于膜、霜、乳、液、水、噴霧等形式。
[0033] 本發(fā)明具有如下有益效果：
[0034] (1)刺甘草查爾酮能夠劑量依賴性激活Nrf2/ARE螢光素酶報告基因的活性，并 且劑量和時間依賴地增加 MEFs細(xì)胞中Nrf2和p-AMPK蛋白水平，以及Nrf2下游抗氧化酶 H0-1和NQ0-1的mRNA水平和蛋白水平。同時，刺甘草查爾酮的毒性較低，僅在40 μ Μ時表 現(xiàn)出輕微的細(xì)胞毒性。刺甘草查爾酮在氧化脅迫誘導(dǎo)細(xì)胞衰老中起保護(hù)作用，但在Nrf2 敲除的MEFs細(xì)胞中，它的保護(hù)作用就消失了。在線蟲中，我們也觀察到了相同的實驗結(jié) 果。刺甘草查爾酮可以增強(qiáng)線蟲對于過氧化氫的抵抗，并延長線蟲的壽命，這種保護(hù)作用在 skn-l(zul35)和aak2(ok524)突變的線蟲上也是缺失的。以上結(jié)果表明刺甘草查爾酮可用 于制備抗衰老藥物或保健品。
[0035] (2)刺甘草查爾酮在JB6P+中劑量依賴性地升高Nrf2蛋白水平，以及Nrf2下游抗 氧化酶H0-1和NQ0-1的mRNA水平和蛋白水平。刺甘草查爾酮可以抑制TPA誘導(dǎo)的皮膚癌 轉(zhuǎn)化，并且這個作用是依賴于Nrf2的。以上結(jié)果表明刺甘草查爾酮可用于制備抗皮膚細(xì)胞 惡性轉(zhuǎn)化的藥物、保健品或皮膚護(hù)理用品。
[0036] (3)刺甘草查爾酮能夠劑量依賴性地增加 HepG2細(xì)胞中的Nrf2蛋白水平，以及 Nrf2下游抗氧化酶H0-1和NQ0-1的mRNA水平和蛋白水平。在腹腔注射刺甘草查爾酮之 后，該化合物能夠顯著提升小鼠肝臟組織中Nrf2的蛋白水平，以及Nrf2下游抗氧化酶H0-1 和NQ0-1的mRNA水平和蛋白水平。采用經(jīng)典的四氯化碳模型，在腹腔注射刺甘草查爾酮之 后，該化合物能夠顯著降低四氯化碳所致肝損傷小鼠血清的ALT和AST水平，增加肝臟組織 中的GSH水平，同時，從肝組織病理切片發(fā)現(xiàn)治療組的肝壞死面積相對于模型組顯著減小， 表明刺甘草查爾酮對于四氯化碳所致的小鼠肝損傷具有明顯的治療作用。以上結(jié)果表明刺 甘草查爾酮可用于制備化學(xué)性肝損傷保護(hù)藥物或保健品。
[0037] (4)刺甘草查爾酮可以在多種細(xì)胞中激活Nrf2信號通路，并且在小鼠體內(nèi)也能顯 著提升Nrf2下游抗氧化酶H0-1和NQ0-1的mRNA水平和蛋白水平。該化合物還可增加小 鼠肝臟的GSH水平，以及在MEFs中顯著升高過氧化氫所致的GSH水平降低。以上結(jié)果說明 刺甘草查爾酮可用于制備Nrf2激動劑及抗氧化和代謝解毒酶誘導(dǎo)劑。
【附圖說明】
[0038] 圖1為刺甘草查爾酮的核磁共振氫譜NMR)。
[0039] 圖2為刺甘草查爾酮的核磁共振碳譜（13C NMR)。
[0040] 圖3為刺甘草查爾酮激活Η印G2細(xì)胞內(nèi)Nrf2報告基因活性的實驗結(jié)果。
[0041] 圖4為刺甘草查爾酮抑制HepG2細(xì)胞活力的MTS實驗結(jié)果。
[0042] 圖5為刺甘草查爾酮激活MEFs細(xì)胞中Nrf2信號及下游基因的實驗結(jié)果。其中圖 5 (A)、圖 5 (B)、圖 5 (C)、圖 5 (D)為 qPCR 結(jié)果，圖 5 (E)、圖 5 (F)為