[0017] 本發(fā)明的優(yōu)點在于： 1、本發(fā)明采用酸水提取法，成功利用生物堿類化合物在酸性溶劑中成鹽，增加生物堿 類化合物在溶媒中的溶解度；采用醇類溶劑沉淀的前處理方法，去除提取物中的蛋白質(zhì)，多 糖及鞣質(zhì)等植物體內(nèi)普遍含有的大分子有機雜質(zhì)；該方法工藝簡單，提取效率高，雜質(zhì)分離 充分。
[0018]2、本發(fā)明充分依靠生物堿類化合物不同的結(jié)構(gòu)類型具有不同的化學結(jié)構(gòu)和不同 的pKa值，調(diào)節(jié)總生物堿水溶液中的pH值，使各個生物堿具有不同的酸堿結(jié)合狀態(tài)，但阿普 菲類生物堿在強酸性介質(zhì)中成鹽，在有機溶劑中仍然具有較好的溶解度的特點，采用有機 溶劑萃取法可以充分分離總生物堿中的阿普菲類生物堿。
[0019]3、本發(fā)明中的主要原材料禿瘡花中，生物堿的高含量成分異紫堇堿(含量平均在 0.5%)，在醇類溶劑中依靠含量的顯著差異和良好的結(jié)晶度，可以從阿普菲類生物堿中充分 結(jié)晶析出，得到很好的分離效果；結(jié)晶母液中的阿普菲類生物堿包括未結(jié)晶完全的部分異 紫堇堿重新加入到生物堿有效部位中，可以起到降低異紫堇堿含量，相應降低生物堿有效 部位的生物體內(nèi)毒性，但總體并不改變生物堿有效部位的化合物結(jié)構(gòu)類型,相應不會降低 中藥提取物中各個發(fā)揮藥理活性化合物之間的協(xié)同作用。
[0020] 4、利用大孔吸附樹脂的選擇性吸附作用，采用聚苯乙烯二乙烯基苯聚合制成的大 孔吸附樹脂，可以選擇吸附生物堿類等有機化合物，采用不同比例的有機溶劑，可以分步洗 脫分離除去禿瘡花提取物中的小分子蔗糖，無機鹽等大極性化合物雜質(zhì)，更進一步降低生 物堿有效部位中的雜質(zhì)含量，可以有效降低禿瘡花生物堿有效部位的給藥劑量。
[0021] 綜上所述，本發(fā)明的方法可以有效提高活性化合物的濃度，降低藥物服用劑量，顯 著提高禿瘡花生物堿的藥理活性。
【附圖說明】
[0022] 圖1為本發(fā)明生物堿制備方法中各個步驟得到生物堿部位的典型的HPLC-DAD檢 測液相色譜圖(其中圖1中標注為"酸性氯仿選擇性萃取色譜圖"是步驟C中"禿瘡花中總 阿普菲類生物堿部位"的典型液相色譜圖；標注為"混合標準品色譜圖"為式?:中所有單體標 準化合物混合得到標準色譜圖；標注為"大孔吸附樹脂選擇性吸附生物堿部位色譜圖"為步 驟D中"大孔吸附樹脂純化禿瘡花生物堿部位"的典型液相色譜圖；標注為"禿瘡花酸水提 取物色譜圖"為本申請專利中使用的原料步驟A中"禿瘡花藥材"的酸水提取物典型液相色 譜圖。圖中IS為異紫堇堿，C0為紫堇堿，SI為清風藤堿，PR為普羅托品，AL為別隱品堿， BE為小檗紅堿，HY為5-羥基黃連堿，BR為小檗堿，色譜儀：安捷倫1100,色譜柱SinoChrom ODS-BPC1S，檢測波長為270nm，流速為1mL/min，柱溫為30 °C。流動相：。A相為乙腈，B 相為1%的磷酸水溶液(用三乙胺調(diào)節(jié)pH值為6. 31 )，色譜洗脫梯度：以A相設(shè)置，0-20min: 20% -26% ；20-35min：26%-50% ；35-37min：50%-50% ；37-40min：50%-20% ；4〇-45min： 20%-20%〇) 圖2為生物堿部位HPLC-DAD檢測液相色譜圖。
【具體實施方式】
[0023] 為了更清楚的理解本發(fā)明，以下結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步的說明，但本發(fā)明 不限于以下實施例。
[0024] 實施例1:禿瘡花中生物堿有效部位的提取分離 A、酸水提取步驟：禿瘡花藥材4Kg粉碎，加入60L濃度為0. 05%的硫酸水溶液，放置 4h，回流提取1h，過濾，藥渣加入40L濃度為0. 05%的硫酸水溶液，回流提取2次，每次 提取1h，過濾，三次過濾液合并，用10%Na0H溶液中和值至中性，減壓回收溶劑，濃縮得到 禿瘡花生物堿提取物6. 5L，HPLC-DAD檢測。
[0025]B、醇沉除雜步驟：步驟A中禿瘡花生物堿提取物，在機械攪拌下加入95%的乙醇20 L，攪拌1h，自然放置4h，布氏漏斗過濾除雜，母液減壓回收溶劑至無醇味，得除禿瘡花生 物堿純化產(chǎn)物5L。
[0026] C、萃取分離步驟：步驟B中的除雜生物堿提取物，加水適量溶解，0. 1%硫酸調(diào)節(jié)pH 到3.0,用水定容至4L，加入2L氯仿，機械攪拌萃取1h，放置待分層，分離氯仿層，萃取3 次，每次用2L氯仿。氯仿萃取物加入無水硫酸鈉干燥，過夜，以上氯仿萃取物減壓回收溶 劑至干得到禿瘡花中總阿普菲類生物堿部位30g，HPLC-DAD檢測，水相進行下一步純化。
[0027] D、大孔吸附樹脂吸附分離除雜步驟：步驟C中萃取分離后的水相，用NaOH水溶液 調(diào)節(jié)pH為中性，濃縮至2L，用NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH為堿性，pH為9,作為聚苯乙烯二乙烯 基苯聚合制成的大孔吸附樹脂(樹脂型號為LX-28)柱的上樣液，采用直徑和柱高比(徑高 t匕）為1:10的色譜柱，填充預處理過的聚苯乙烯二乙烯基苯大孔吸附樹脂（LX-28)，成為大 孔樹脂吸附色譜柱，取上述上樣液加于大孔樹脂吸附色譜柱，流出液循環(huán)吸附2h，薄層色 譜鑒別（展開劑為氯仿：甲醇=4:1)，待吸附平衡后，用8L水洗脫樹脂柱，棄去洗脫液，再 用4L10%的乙醇溶液洗脫樹脂柱，棄去洗脫液；然后用95%的酸性乙醇溶劑6L，洗脫樹脂 柱，得到大孔吸附樹脂純化禿瘡花生物堿部位，調(diào)節(jié)該洗脫液的pH值為中性。
[0028]E、異紫堇堿純化步驟：步驟C中的阿普菲類生物堿部位用甲醇重結(jié)晶，待結(jié)晶析 出，過濾得到異紫堇堿15g，結(jié)晶母液回收溶劑，得到分離除去異紫堇堿的阿普菲類生物堿 部位； F、生物堿有效部位脫色處理步驟：將步驟D中的大孔吸附樹脂純化禿瘡花生物堿部位 和步驟E中分離除去異紫堇堿的阿普菲類生物堿部位二者合并，加入30g活性炭，甲醇回 流2小時，脫色，布氏漏斗抽濾，濾液減壓回收甲醇，得到禿瘡花生物堿有效部位80g，取樣 進行HPLC-DAD檢測。
[0029] 實施例2 :禿瘡花中生物堿有效部位的提取分離 A、酸水提取步驟：禿瘡花藥材4Kg粉碎，加入40L濃度為0. 01%的鹽酸水溶液，放置 24h，回流提取1h，提取3次，過濾，藥渣棄去，濾液合并，用NaOH溶液中和值至中性，減壓 回收溶劑，濃縮至4L，取樣進行HPLC-DAD檢測。
[0030]B、醇沉除雜步驟：步驟A中禿瘡花生物堿提取物，在機械攪拌下加入甲醇20L，攪 拌1h，自然放置4h，離心過濾除雜，母液減壓回收溶劑至粘稠狀，加水溶解，得除禿瘡花生 物堿純化產(chǎn)物5L。
[0031]C、萃取分離步驟：步驟B中的除雜生物堿提取物，加水適量溶解，0. 1%硫酸調(diào)節(jié)pH到3.0,用水定容至4L，加入2二氯甲烷，振蕩萃取1h，放置待分層，分離二氯甲烷層，萃 取3次，每次用2L二氯甲烷。二氯甲烷萃取物加入無水硫酸鈉干燥，過夜，以上二氯甲烷 萃取物減壓回收溶劑至干得到禿瘡花中總阿普菲類生物堿部位28g，HPLC-DAD檢測，水相 進行下一步純化。
[0032]D、大孔吸附樹脂吸附分離除雜步驟：步驟C中萃取分離后的水相，用氨水溶液調(diào) 節(jié)pH為中性，濃縮至2L，用氨水溶液調(diào)節(jié)pH為堿性，pH為9,作為聚苯乙烯二乙烯基苯聚 合制成的大孔吸附樹脂(樹脂型號為LX-10)柱的上樣液，采用直徑和柱高比(徑高比)為1:5 的色譜柱，填充預處理過的聚苯乙烯二乙烯基苯大孔吸附樹脂（LX-10)，成為大孔樹脂吸附 色譜柱，取上述上樣液加于大孔樹脂吸附色譜柱，流出液循環(huán)吸附2h，薄層色譜鑒別(展開 劑為氯仿：甲醇=4:1)，待吸附平衡后，用8L水洗脫樹脂柱，棄去洗脫液，再用4L10%的 乙醇溶液洗脫樹脂柱，棄去洗脫液；然后用95%的酸性乙醇溶劑6L，洗脫樹脂柱，得到大孔 吸附樹脂純化禿瘡花生物堿部位，調(diào)節(jié)該洗脫液的pH值為中性。
[0033]E、異紫堇堿純化步驟：步驟C中的阿普菲類生物堿部位用乙醇重結(jié)晶，待結(jié)晶析 出，過濾得到異紫堇堿16g，結(jié)晶母液回收溶劑，得到分離除去異紫堇堿的阿普菲類生物堿 部位； F、生物堿有效部位脫色處理步驟：將步驟D中的大孔吸附樹脂純化禿瘡花生物堿部位 和步驟E中分離除去異紫堇堿的阿普菲類生物堿部位二者合并，加入30g活性炭，乙醇回 流2小時，脫色，布氏漏斗抽濾，濾液減壓回收乙醇，得到禿瘡花生物堿有效部位85g，取樣 進行HPLC-DAD檢測。
[0034] 實施例3 :禿瘡花中生物堿有效部位的提取分離 A、酸水提取步驟：禿瘡花藥材4Kg粉碎，加入40L濃度為0. 01%的硫酸水溶液，放置 浸泡4h，回流提取1h，過濾，藥渣用40L濃度為0. 01%的硫酸水溶液再回流提取2次，每 次1h，合并三次過濾液，用NaOH溶液中和值至中性，減壓回收溶劑，濃縮至4L，取樣進行 HPLC-DAD檢測。
[0035]B、醇沉除雜步驟：步驟A中禿瘡花生物堿提取物，在機械攪拌下加入95%的乙醇20L，攪拌1h，自然放置4h，離心過濾除雜，母液減壓回收溶劑至無醇味，得除禿瘡花生物堿 純化產(chǎn)物5L。
[0036]C、萃取分離步驟：步驟B中的除雜生物堿提取物，加水適量溶解，0. 1%鹽酸調(diào)節(jié)pH到3.0,用水定容至4L，加入2L乙酸乙酯，振蕩萃取1h，放置待分層，分離乙酸乙酯層，萃 取3次，每次用2L乙酸乙酯。乙酸乙酯萃取物加入無水硫酸鈉干燥，過夜，以上乙酸乙酯 萃取物減壓回收溶劑至干得到禿瘡花中總阿普菲類生物堿部位20g，HPLC-DAD檢測，水相 進行下一步純化。
[0037]D、大孔吸附樹脂吸附分離除雜步驟：步驟C中萃取分離后的水相，用氨水溶液調(diào) 節(jié)pH為中性，濃縮至2L，用氨水溶液調(diào)節(jié)pH為堿性，