米顆粒尺寸小(<2nm)使得其在510nm的表面等離子體共振(SPR)峰不明顯，但由于包裹了金納米顆粒后使得其在500-800nm之間的吸收值遠大于G2-DTPA-PEG-FA顆粒(圖3)，這表明體系中成功修飾了靶向分子FA和包裹了金納米顆粒。TEM測試結(jié)果表明:制備得到的金納米顆粒的尺寸分布較窄，具有良好的水分散性(圖5a、5c)，平均粒徑約1.6nm(圖5b、5d)。
[0057](5)將(4)所得產(chǎn)品28mg溶解在0.10mL無菌放射性高鍀酸鹽(放射性99mTc濃度為740MBq/mL)溶液，加入100 μ g SnCl2，振蕩混合，并用凝膠過濾柱分離純化，其標記率為70 %，放化純大于99 %，得到包裹金納米粒子和螯合核素99mTc的SPECT/CT雙模態(tài)成像造影劑 G2-DTPA-PEG-FAiAu-"mTc 0
[0058]實施例2
[0059]取實施例1中(4)所得產(chǎn)品的水溶液(0.4mg/mL)，置于不同溫度下半小時后，測定其紫外圖譜，確定產(chǎn)品在不同溫度下的穩(wěn)定性。結(jié)果表明:在不同溫度(4-50°C)條件下，實施例1中(4)所得產(chǎn)品的紫外圖譜沒有發(fā)生明顯的偏移和改變，表明其具有良好的穩(wěn)定性(圖4a)。取實施例1中⑷所得產(chǎn)品的水溶液(0.4mg/mL)，以0.1M的鹽酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)其pH值(5.0、6.0、7.0、8.0)。室溫放置20min后，測定其紫外圖譜，確定產(chǎn)品在不同pH值(5.0-8.0)下的穩(wěn)定性。結(jié)果表明:在不同pH(5.0-8.0)條件下，實施例1中(4)所得產(chǎn)品的紫外圖譜沒有發(fā)生明顯的偏移和改變，表明其具有良好的穩(wěn)定性(圖4b)。
[0060]實施例3
[0061]取實施例1中(4)所得產(chǎn)品用無菌PBS緩沖液配置成40000nM的母液。之后稀釋為ΙΟΟΟΟηΜ的樣品溶液。另以同樣方案準備不含靶向分子FA的對比例1中(2)所得G2-DTPA-mPEGiAu的樣品溶液。取培養(yǎng)好的HeLa胞種于96孔板中，按照1萬細胞/孔的密度接種，每孔體積200 μ L。培養(yǎng)過夜后，加入上述各稀釋梯度的樣品，與細胞共培養(yǎng)24h。每個梯度用培養(yǎng)液稀釋10倍，即每孔終濃度分別為4000、2000、1000、500、200nM。每個梯度做5個平行孔，以PBS緩沖液作為空白對照。隨后用MTT法檢測細胞活力。每孔加MTT溶液(20 μ L，5mg/mL)，37°C孵化4h。之后除去孔中液體，加入二甲基亞砜200 μ L。搖床混勻20min，之后用酶標儀檢測570nm處吸光度值。MTT測試結(jié)果表明，G2-DTPA-PEG_FA@Au和G2-DTPA-mPEGiAu顆粒在此范圍內(nèi)都不顯示出細胞毒性，表現(xiàn)出良好的細胞相容性(圖6)。
[0062]實施例4
[0063]取實施例1中(4)所得產(chǎn)品以蒸餾水為溶劑，配制金濃度為0.04M的母液。之后梯度稀釋出0.02、0.01和0.005M的樣品。同時，以臨床用碘海醇為對照材料加蒸餾水稀釋出相應(yīng)碘濃度的樣品，并對兩組材料分別進行CT成像測試。測試結(jié)果顯示:在試驗濃度范圍內(nèi)，G2-DTPA-PEG-FA@Au顆粒表現(xiàn)出優(yōu)于碘海醇的X-射線衰減系數(shù)(圖7)。
[0064]實施例5
[0065]取實施例1中(4)所得產(chǎn)品用無菌PBS緩沖液配制成濃度為40000nM的母液，之后稀釋為ΙΟΟΟΟηΜ的樣品溶液。取培養(yǎng)好的HeLa細胞種于24孔板中，按照20萬細胞/孔的密度接種，每孔體積為lmL。培養(yǎng)過夜后，一組HeLa細胞加入2mM FA共培養(yǎng)2h定義為FA受體低表達的HeLa細胞，另一組HeLa細胞沒有加FA共培養(yǎng)定義為FA受體高表達的HeLa細胞。接著，加入上述稀釋10倍后的樣品(4000nM和1000nM)分別與FA受體高、低表達的HeLa細胞在37°C下共培養(yǎng)3小時。對比例1中(2)所得G2-DTPA_mPEG@Au也用無菌PBS緩沖液配制成濃度為4000和ΙΟΟΟηΜ分別與FA受體高表達的HeLa細胞在37°C下共培養(yǎng)3小時。以PBS緩沖液作為空白對照。培養(yǎng)結(jié)束后用PBS清洗3次，再胰酶消化離心后收集細胞，加入2mL王水消化24h，然后通過ICP-0ES檢測細胞中Au元素的吞噬量(圖8)。如圖8所示，在研究濃度范圍內(nèi)，G2-DTPA-PEG-FA@Au培養(yǎng)的FA受體高表達(未FA阻斷)的HeLa細胞對金的吞噬量明顯高于低FA受體表達(被FA阻斷)的HeLa細胞和G2-DTPA-mPEGiAu培養(yǎng)的FA受體高表達的HeLa細胞的吞噬量。結(jié)果表明，靶向分子FA的修飾使得G2-DTPA-PEG-FA@Au對FA受體高表達的HeLa細胞有特異靶向能力。
[0066]實施例6
[0067]取實施例1中(4)所得產(chǎn)品用無菌PBS緩沖液配制成濃度為40000nM的母液，之后稀釋為ΙΟΟΟΟηΜ的樣品溶液。取培養(yǎng)好的HeLa細胞種于6孔板中，按照200萬細胞/孔的密度接種，每孔體積為2mL。培養(yǎng)過夜后，加入上述稀釋10倍后的樣品(4000nM和ΙΟΟΟηΜ)分別與FA受體高、低表達的HeLa細胞在37°C下共培養(yǎng)3小時。對比例1中(2)所得G2-DTPA-mPEG@Au也用無菌PBS緩沖液配制成濃度為4000和ΙΟΟΟηΜ分別與FA受體高表達的HeLa細胞在37°C下共培養(yǎng)3小時。以PBS緩沖液作為空白對照。胰酶消化離心后收集細胞，并將細胞均勻的分散在200 μ LPBS緩沖液中。之后，對這三組樣品進行CT成像測試(圖9a和圖9b)。
[0068]如圖9所示，在研究濃度范圍內(nèi)，G2-DTPA-PEG-FA@Au培養(yǎng)的FA受體高表達的HeLa細胞的CT值明顯高于低FA受體表達的HeLa細胞和G2-DTPA_mPEG@Au培養(yǎng)的FA受體高表達的HeLa細胞。證明了靶向分子FA的修飾使得G2-DTPA-PEG_FA@Au對FA受體高表達的HeLa細胞有特異靶向能力。
[0069]實施例7
[0070]用SPECT/CT 成像儀研究所制備的 G2-DTPA-PEG-FA@Au-99mTc 和 G2-DTPA_mPEG@Au-99mTc的細胞成像效果。取實施例1中(5)所得的G2-DTPA-PEG-FA@Au-99mTc用無菌PBS緩沖液配制成500和100 μ Ci的樣品溶液。另以同樣方案準備不含F(xiàn)A靶向分子的對比例1中(3)所得G2-DTPA-mPEG@Au-99mTc的樣品溶液。取培養(yǎng)好的HeLa細胞種于6孔板中，按照200萬細胞/孔的密度接種，每孔體積為2mL。培養(yǎng)過夜后，加入上述兩種材料(500和100 μ Ci)分別與FA受體高、低表達的HeLa細胞在37°C下共培養(yǎng)3小時。對比例1中(3)所得G2-DTPA-mPEG@Au-MmTc也用無菌PBS緩沖液配制成濃度為500和100 μ Ci的樣品溶液分別與FA受體高表達的HeLa細胞在37°C下共培養(yǎng)3小時。胰酶消化離心后收集細胞，并將細胞均勻的分散在200 μ LPBS緩沖液中。之后，對這三組樣品進行SPECT成像測試(圖10a，圖 10b)。
[0071]如圖10所示，在研究濃度范圍內(nèi)，G2-DTPA-PEG-FAiAu-"mTc培養(yǎng)的FA受體高表達的HeLa細胞的SPECT成像效果明顯高于低FA受體表達的HeLa細胞和G2-DTPA-mPEGiAu-"mTc培養(yǎng)的FA受體高表達的HeLa細胞。證明了靶向分子FA的修飾使得G2-DTPA-PEG-FA@Au-99mTc對FA受體高表達的HeLa細胞具有更好的SPECT成像效果。
[0072]實施例8
[0073]用SPECT/CT 成像儀研究所制備的 G2-DTPA-PEG-FA@Au-99mTc 和 G2-DTPA_mPEG@Au-99mTc在小鼠體內(nèi)的成像效果。將實施例1中(5)得到的G2-DTPA-PEG-FA@Au-99mTc和對比例1中⑶得到的G2-DTPA-mPEG@Au-99mTc，以相同的锝放射性濃度和金濃度([99mTc]=740mBq/mL, [Au] = 0.08M)各取100 μ L，通過尾部靜脈注射進體重為22g的小鼠體內(nèi)，并于用藥后30min，120min，180min再分別通過SPECT/CT掃描得到小鼠腫瘤部位的SPECT、CT和SPECT/CT圖片。通過SPECT/CT小動物成像儀掃描檢測得到的SPECT/CT圖片和信號強度值(圖11和圖12)。從圖中可以看出G2-DTPA-PEG-FA@Au-99mTc材料可以實現(xiàn)小鼠腫瘤部位的特異性成像，其亮度明顯高于肝臟等其他主要器官，并同時可以看到肝臟，腎臟，脾臟的信號增強，而且在120min是達到最佳的成像效果，成像時間也可持續(xù)至少180min，并逐漸代謝信號減弱。證明本方法合成的G2-DT