一種寬體金線蛭提取物緩釋微丸的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及含肽的醫(yī)藥配制品，具體涉及來(lái)源于水蛭的提取物制成藥物制劑的方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 寬體金線蛭是水蛭的一種，水蛭是我國(guó)長(zhǎng)期應(yīng)用的傳統(tǒng)中藥之一，最早記載于 《神農(nóng)本草經(jīng)》，功能破血逐瘀。水蛭品種繁多，全世界約有400-500種，我國(guó)已發(fā)現(xiàn)89種 [1]?！吨袊?guó)藥典》收載水蛭為水蛭科動(dòng)物螞蟥（Whitmania pigra Whitman)、水蛭（Hirudo nipponica Whitman)或柳葉螞Φ黃（Whitmania acranulata Whitman)的干燥體。其中寬體 金線蛭又稱螞蟥，是目前臨床上使用最多的水蛭品種，占總量的95%。
[0003] 水蛭的臨床應(yīng)用方式一直以來(lái)都是口服給藥為主，可以單方或復(fù)方使用，目前市 售的含有水蛭的制劑如通心絡(luò)膠囊、活血通脈膠囊、逐瘀通脈膠囊、步長(zhǎng)腦心通，多是直接 將水蛭原藥材粉碎或煎煮后后制備成各種劑型，由于水蛭中的有效成份多為蛋白質(zhì)、多肽 類成分，難以避免水蛭有效成分被直接破壞或被胃腸道消化酶等降解。不能有效的保障其 發(fā)揮最佳的療效。
[0004] 國(guó)內(nèi)對(duì)于水蛭（科）的研究較多，主要涉及臨床應(yīng)用，抗凝作用，提取、純化方法， 活性物質(zhì)組成等方面，多項(xiàng)研究結(jié)果證明寬體金線蛭的活性成分與其它水蛭不同，其基本 不含水蛭素，含有相對(duì)穩(wěn)定的多肽類抗凝物；劉文偉等[3]比較了螞蟥和日本醫(yī)蛭經(jīng)不同 提取工藝處理后的抗凝血酶活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)無(wú)論采用何種提取工藝，螞蟥提取液基本無(wú)抗 凝血酶活性；而日本醫(yī)蛭提取液可抑制凝血酶，煎煮或炮制后活性明顯降低。歐興長(zhǎng)等[4] 比較了不同提取方法對(duì)菲牛蛭、日本醫(yī)蛭、天然螞蟥和人工飼養(yǎng)螞蟥的抗凝影響，也證明螞 蟥提取液幾乎無(wú)抑制凝血酶活性，而日本醫(yī)蛭和菲牛蛭活性較高，但受熱后活性急劇下降。 覃樹(shù)先[5]比較了冷提、溫浸和炮制三種提取工藝對(duì)日本醫(yī)蛭和螞蟥干體抗凝血酶作用的 影響，所得數(shù)據(jù)與歐興長(zhǎng)等人的結(jié)果一致。吳志軍等[6]采用抗凝血酶、抗胰蛋白酶和抗糜 蛋白酶3種檢測(cè)方法，測(cè)定螞蟥、日本醫(yī)蛭、歐洲醫(yī)蛭、菲牛蛭樣品的生物活性。結(jié)果顯示： 菲牛蛭的抗凝血酶活性相當(dāng)于日本醫(yī)蛭，而螞蟥幾乎無(wú)抗凝血酶活性；我們研究的結(jié)果頁(yè) 顯示：寬體金線蛭高中低劑量組均能抑制由角叉菜膠誘導(dǎo)的小鼠尾靜脈血栓形成、抑制由 膠原蛋白-腎上腺素誘導(dǎo)的小鼠偏癱和死亡、能延長(zhǎng)小鼠的凝血時(shí)間、能延長(zhǎng)小鼠的出血 時(shí)間。而提取物經(jīng)胃蛋白酶和胰蛋白酶水解后，以上活性均消失或明顯減弱。
[0005] 已有的研究結(jié)果均表明：菲牛蛭及日本醫(yī)蛭都含有凝血酶，通過(guò)凝血酶發(fā)揮作用， 但是凝血酶很不穩(wěn)定，非常容易降解，無(wú)論采用何種制劑手段，都難以制成可口服的穩(wěn)定制 劑；而寬體金線蛭的活性成分不是凝血酶，其成分雖然是蛋白或多肽（已實(shí)驗(yàn)證明），但是 相對(duì)穩(wěn)定，在提取、制劑過(guò)程中可保持基本不會(huì)破壞，但是如果采用目前最常規(guī)的口服給藥 方式，存在易被破壞及吸收困難以等弊端，結(jié)腸部位的蛋白水解酶濃度遠(yuǎn)低于其它腸段，且 藥物在此處滯留時(shí)間長(zhǎng)，結(jié)腸壁對(duì)大分子穿透的阻力小，有利于藥物的吸收，現(xiàn)在很多研究 都將多肽的口服制劑制成結(jié)腸給藥制劑，結(jié)合吸收促進(jìn)劑等附加劑的使用可適當(dāng)提高這類 藥物的穩(wěn)定性及生物利用度，但是由于結(jié)腸沒(méi)有絨毛及多肽的腸穿透力較弱導(dǎo)致其吸收仍 然較慢。
[0006] 對(duì)于水蛭的口服制劑有些研究報(bào)道及專利被公開(kāi)或授權(quán)；如湯沛需等人做了重組 水蛙素口服乳糜微粒的研究；專利CN101584859A公開(kāi)了一種水蛙素微球制劑及其制備方 法，用于口服給藥；專利CN1393266A公開(kāi)了一種水蛭素緩（控）釋制劑的制備方法，目標(biāo) 是維持給藥后水蛭素有效血藥濃度，克服其半衰期短的缺點(diǎn)；專利CN1428173A授權(quán)了一 種重組水蛭素腸溶緩釋制劑的方法，為加入穩(wěn)定保護(hù)劑和胃腸蛋自酶抑制劑的一種腸溶緩 釋口服制劑；專利CN01810561A公開(kāi)了一種水蛭素的聚離子膠束組合物的制備方法；專利 CN102362874B授權(quán)了一種水蛭結(jié)腸靶向口服制劑及其制備方法。以上的文獻(xiàn)及專利主要都 是天然或重組水蛭素設(shè)計(jì)的，以解決水蛭素口服吸收少，利用度低的問(wèn)題，但是水蛭素非常 不穩(wěn)定，很難解決其制劑過(guò)程、保存及口服后的穩(wěn)定性，即使設(shè)計(jì)了結(jié)腸給藥，也忽視了結(jié) 腸吸收較慢、溶出的藥物長(zhǎng)時(shí)間在結(jié)腸中仍會(huì)被酶及微生物降解的問(wèn)題，不能很好地解決 水蛭素口服吸收的問(wèn)題，且以上專利中選用的PH敏感型結(jié)腸釋藥系統(tǒng)，由于結(jié)腸的pH與小 腸差異較小，也存在提前或進(jìn)入結(jié)腸長(zhǎng)時(shí)間不能溶解而釋藥的問(wèn)題；以上專利申請(qǐng)中，有些 提及可用水蛭提取物，但是含水蛭素的醫(yī)蛭類與不含水蛭素的寬體金線蛭活性成分是完全 不同的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是公開(kāi)一種寬體金線蛭提取物緩釋微丸的制備方法， 該方法所得到的緩釋微丸具有生物利用度高的優(yōu)點(diǎn)。
[0008] -種寬體金線蛭提取物緩釋微丸的制備方法，該方法包括以下步驟：
[0009] a)取寬體金線蛭提取物，分別加入寬體金線蛭提取物重量2-10倍的骨架材料、 0. 1-1倍的致孔劑、0. 05-0. 5倍的粘合劑和0. 01-0. 1倍的口服吸收促進(jìn)劑，混合均勻后用 蒸餾水潤(rùn)濕制備軟材，再經(jīng)擠出、滾圓、干燥和過(guò)24-40目篩的工藝，即得載藥微丸；其中， 所述的骨架材料為微晶纖維素和淀粉中一種，或二者的混合物；所述的致孔劑為乳糖、聚乙 二醇或氯化鈉；所述的粘合劑為羥丙基甲基纖維素或聚乙烯吡咯烷酮；所述的口服吸收促 進(jìn)劑為SANC或十_烷基硫酸納；
[0010] b)在包衣鍋或流化床中，分別加入所述載藥微丸重量0. 1-0. 5倍的溶脹材料和 0. 01-0. 1倍的粘合劑，用蒸餾水溶解并混勻，然后，往包衣鍋或流化床中加入所述的載藥微 丸，在25°C -45°c下噴霧包裹溶脹衣膜；其中，所述的溶脹材料為交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮或低 取代羥丙級(jí)纖維素，所述的包衣粘合劑為聚乙烯吡咯烷酮或羥丙基甲基纖維素；
[0011] C)按步驟b)所得包衣溶脹衣膜的載藥微丸的重量以控釋材料中的固含量計(jì)取 0. 033-0. 5倍的控釋材料，置于包衣鍋或流化床中，加入控釋材料重量的0. 02-0. 2倍的 增塑劑和控釋材料重量的〇. 01-0. 5倍的抗粘劑，用蒸餾水溶解，混合均勻。然后，往包衣 鍋或流化床中加入步驟b)所得包裹溶脹衣膜的載藥微丸，在25°C -45°C下進(jìn)行噴霧包 裹控釋衣膜；其中，所述的控釋材料是EudragitsRS30D、Eudragit ilRLSOIK EudragitiNE 30D、Eudragit"RS100、Eu.dr%g:lt?RLl():〇 或乙基纖維素中的一種，或者是Eudragit?RS30D: 和Eudragit*RL30D的混合物，或者是EudragitlRSlOO和EudragitltRLlOO丨的混合物；當(dāng) 所述的控釋材料是 Eudragit*RS30D 和 Eudragit?RL30D 的混合物時(shí)，Eudragit*RS30D 與Eud:ragitll!RL30D的重量比=5:1-50:1 ;當(dāng)所述的控釋材料是Eudragit'*RS100和 丑公._&目11*既1〇〇的混合物時(shí)，丑^『&目11$3_1〇〇與￡1}(1頂#:1 _^既10:_〇的重量比=5:1-5〇:1;所 述的增塑劑是聚乙二醇、檸檬酸三乙酯或癸二酸二丁酯；所述的抗粘劑是單硬脂酸甘油酯 或滑石粉；
[0012] d)按步驟c)所得包衣溶脹衣膜的載藥微丸的重量以腸溶材料中的固含量計(jì)取 0. 033-0. 5倍的腸溶釋材料，置于包衣鍋或流化床中，加入腸溶材料重量0. 02-0. 2倍的增 塑劑和0. 01-0. 5倍的抗粘劑，用蒸餾水溶解，混合均勻。然后，往包衣鍋或流化床中加入步 驟c)所得包衣控釋衣膜的載藥微丸，在25°C_45°C下進(jìn)行噴霧包裹腸溶衣膜；其中，所述的 腸溶材料為Eud ragitaL3QD-5:5、EudragitllOO-55、鄰苯二甲酸醋酸纖維素或羥丙基甲基 纖維素酞酸酯；所述的增塑劑為聚乙二醇或檸檬酸三乙酯；所述的抗粘劑為單硬脂酸甘油 酯或滑石粉。
[0013] 上述方法中所述的寬體金線蛭提取物是寬體金線蛭的水提物，該水提物是按常規(guī) 的方法水提或水提醇沉得到。
[0014] 根據(jù)寬體金線蛭活性物為蛋白或多肽，其擴(kuò)散速度較慢的特點(diǎn)，為了使本方法所 得到的緩釋微丸中寬體金線蛭提取物在水或人工腸液中約6小時(shí)釋放完全，本發(fā)明所述方 法的步驟a)將所述的載藥微丸制成骨架微丸，同時(shí)，加入致孔劑調(diào)節(jié)微丸中蛋白及多肽釋 放速度，添加口服吸收促進(jìn)劑促進(jìn)微丸中的藥物吸收。
[0015] 由于本發(fā)明所述方法的步驟b)在載藥微丸包裹溶脹衣膜，因此藥物進(jìn)入體內(nèi)后， 消化道液透過(guò)控釋層進(jìn)入微丸即被該溶脹材料吸收，不會(huì)進(jìn)一步進(jìn)入丸芯溶解藥物，直至 溶脹層吸收足夠水分，體積脹至使控釋層破裂，大量水分進(jìn)入，丸中藥物才開(kāi)始正常釋放。
[0016] 本發(fā)明所述方法的步驟c)所述控釋衣膜的作用是控制水分進(jìn)入微丸的速度，同 時(shí)阻止微丸中的藥物提前釋放，在控釋層未被溶脹層脹破前，微丸中藥物基本不釋放出。所 述控釋衣膜的另一作用是在腸溶層溶解后，大約4小時(shí)被溶脹層漲破，藥物開(kāi)始釋放，此時(shí) 間設(shè)計(jì)是基于人體小腸的轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)間。
[0017] 本發(fā)明所述方法的步驟d)所述腸溶衣膜的作用是使微丸口服后，在胃中阻止胃 液進(jìn)入微丸，委婉到達(dá)小腸后溶解，目的是克服胃排空時(shí)間個(gè)體差異較大帶來(lái)的