一種鄒皮木瓜提取物，提取方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及皺皮木瓜中木瓜總?cè)频奶崛『妄R墩果酸分 離、純化方法及其在治療胃潰瘍中應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 皺皮木瓜為薔薇科植物貼梗海棠 Chaenomeles speciosa(Sweet)Nakai的干燥近 成熟果實(shí)，又名皺皮木瓜、鐵腳梨、貼梗海棠、宣木瓜、酸木瓜、空兒木瓜、木瓜實(shí)等。木瓜有 "百益之果"之稱，是一種非常重要的觀賞和食用的植物，被列為衛(wèi)生部2003年首批認(rèn)定的 藥食兩用的食品之一。其被用作一種可食用的果實(shí)，又被應(yīng)用于美容化妝品和保健品領(lǐng)域， 同時(shí)作為一種常用中藥，其味酸、溫，入肝、脾經(jīng)，有平肝舒筋、和胃化濕之功效，可用于濕痹 拘攣、腰膝關(guān)節(jié)酸重疼痛、吐瀉轉(zhuǎn)筋、腳氣水腫等。中醫(yī)認(rèn)為木瓜有舒筋、活絡(luò)、健脾開(kāi)胃、舒 肝止痛、祛風(fēng)除濕之功效，可用于預(yù)防和治療風(fēng)濕病、霍亂、痢疾、胃腸炎、腳氣病及維生素 C 缺乏癥等?；瘜W(xué)成分研究表明木瓜果實(shí)及其它部位中主要包含揮發(fā)油類、有機(jī)酸類、黃酮 類、萜類、皂苷類、糖類等化學(xué)成分，是一種很具有開(kāi)發(fā)價(jià)值的少數(shù)民族的草藥資源。三萜類 化合物是最早從木瓜屬植物中分離得到的化合物之一，按其結(jié)構(gòu)可以分為齊墩果烷型、烏 蘇烷型和羽扇豆烷型這三種。分離出的化合物有齊墩果酸、3-0-乙酰坡模醇酸、乙酰熊果 酸沽柯二醇、2α_羥基白樺脂酸、馬斯里酸、白樺脂酸、白樺脂醇、3-(E)_p-香豆?；讟?酯醇、3-(Z)-P-香豆?；讟逯?；羽扇-20 (29)烯-3 β，24, 28-三醇、2 α -羥基烏索酸、 2 α，3 α，9 α -三羥基烏索-12-烯-28-酸、2 α，3 β，19 α -三羥基烏索-12-烯-28-酸。
[0003] 胃潰瘍是常見(jiàn)病、多發(fā)病之一，據(jù)相關(guān)不完全統(tǒng)計(jì)，全球范圍內(nèi)，胃潰瘍的發(fā)病率 為5%~10%，而在我國(guó)更是高達(dá)15%~35%，而且隨著生活節(jié)奏加快、不良生活習(xí)慣、社 會(huì)、工作、家庭、心理負(fù)擔(dān)加重及長(zhǎng)期非留體抗炎藥和皮質(zhì)類固醇等藥物使用，使得胃潰瘍 的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升趨勢(shì)。胃潰瘍的病因迄今尚未完全闡明，一般認(rèn)為胃潰瘍的最終形 成是由于胃酸、胃蛋白酶對(duì)黏膜自身消化所致，而引起的因素有幽門螺桿菌感染、長(zhǎng)期服用 非甾體抗炎藥、皮質(zhì)類固醇等藥物或長(zhǎng)期吸煙、飲酒和飲用濃茶、咖啡等。此外遺傳因素和 長(zhǎng)期精神緊張、焦慮或情緒波動(dòng)的人易患潰瘍。目前治療胃潰瘍的藥物主要有胃酸抑制劑、 組胺受體拮抗劑、質(zhì)子栗抑制劑、幽門螺桿菌抑制劑、胃黏膜保護(hù)劑、胃動(dòng)力藥等，上述藥物 的使用對(duì)于近期潰瘍愈合率均較高，但停藥后其復(fù)發(fā)率高，且副作用多的問(wèn)題依然難以解 決。中醫(yī)藥在改善全身狀況、穩(wěn)定病情及減少副作用等方面具有優(yōu)越性，運(yùn)用中醫(yī)藥治療胃 潰瘍歷史悠久、療效確切。中醫(yī)藥對(duì)參與潰瘍愈合的多種因素均有影響，如通過(guò)增加胃黏膜 保護(hù)因子、根除幽門螺桿菌、改善血液循環(huán)等方面，實(shí)現(xiàn)對(duì)局部病理改變的修復(fù)。近年來(lái)，來(lái) 源于少數(shù)民族的許多草藥，由于其治療胃潰瘍療效確切、毒副作用小、在民間臨床用藥歷史 悠久等多方面綜合優(yōu)勢(shì)，而成為了治療胃潰瘍先導(dǎo)化合物的寶庫(kù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明發(fā)明人經(jīng)過(guò)廣泛深入的研究，從土家藥物皺皮木瓜中總?cè)频奶崛∧竟峡?三萜以及分離、純化其中的齊墩果酸重要的三萜成分，并且經(jīng)過(guò)研究發(fā)現(xiàn)木瓜總?cè)坪妄R 墩果酸對(duì)各種類型的胃潰瘍均具有較好的治療作用，未見(jiàn)有明顯的毒副作用。目前還未見(jiàn) 有與我們提取木瓜總?cè)坪头蛛x、純化齊墩果酸的方法及其治療胃潰瘍的相關(guān)報(bào)道。
[0005] 本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種從皺皮木瓜中提取木瓜總?cè)坪头蛛x、純化齊墩果 酸方法。本發(fā)明方法包括皺皮木瓜樣品的提取及其木瓜總?cè)?、齊墩果酸的分離和純化。
[0006] 本發(fā)明具體地是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0007] 本發(fā)明提供了一種提取木瓜總?cè)坪头蛛x、純化齊墩果酸方法，包括下面步驟：
[0008] a)用石油醚脫去皺皮木瓜中的色素；
[0009] b)將a)步經(jīng)石油醚脫色后，過(guò)濾，得到脫色后木瓜的粗粉，用乙酸乙酯提??； [0010] c)將b)步的提取物過(guò)濾，回收乙酸乙酯后，干燥，得木瓜乙酸乙酯浸膏。
[0011] d)將c)步得到的乙酸乙酯浸膏再次加石油醚脫色后，過(guò)濾、干燥，得較為精致的 木瓜乙酸乙酯浸膏。
[0012] e)將d)步的木瓜乙酸乙酯浸膏用無(wú)水乙醇溶解后，加活性炭脫色，過(guò)濾、干燥，得 木瓜總?cè)瓢咨墓腆w粉末。
[0013] f)將e)步的木瓜總?cè)朴脽o(wú)水乙醇溶解后重結(jié)晶，得到無(wú)色齊墩果酸針狀晶體。
[0014] 在本發(fā)明一種具體的實(shí)施方案中，用常用溶劑提取皺皮木瓜近成熟的果實(shí)。將干 燥的皺皮木瓜用粉碎機(jī)粉碎后，過(guò)20目篩，將木瓜粗粉用石油醚按液固比5~7:1，在40~ 80°C條件下脫色3次，每次1~3小時(shí)，得到脫色后木瓜粗粉。
[0015] 將脫色后木瓜粗粉用乙酸乙酯按液固比4~8:1，在50~80°C條件下回流提取3 次，每次1~3小時(shí)，合并提取液，用布氏漏斗過(guò)濾，得乙酸乙酯提取物，減壓濃縮回收乙酸 乙酯后，干燥，得木瓜乙酸乙酯浸膏。為了純化木瓜乙酸乙酯浸膏，本發(fā)明繼續(xù)用石油醚脫 色，將木瓜乙酸乙酯浸膏用石油醚按液固比10~20:1，在40~80°C條件下脫色3次，每次 0. 5~2小時(shí)，合并過(guò)濾液，得到較為精致的木瓜乙酸乙酯浸膏。經(jīng)石油醚脫色后的乙酸乙 酯浸膏顏色仍較深，隨后用將浸膏用無(wú)水乙醇溶解后加活性炭脫色，無(wú)水乙醇、精致的木瓜 乙酸乙酯浸膏和活性炭的液固比60~120:1: 1，在20~60°C條件下脫色2次，每次0. 5~ 1小時(shí)，合并過(guò)濾液，回收乙醇，得木瓜總?cè)瓢咨墓腆w粉末。本發(fā)明在優(yōu)化的總?cè)铺崛?工藝條件下得到木瓜總?cè)频牡寐始s為3. 04%，純度為85. 78%。
[0016] 木瓜中齊墩果酸分離、純化：將提取得到木瓜總?cè)朴脽o(wú)水乙醇重結(jié)晶2次，即得 無(wú)色齊墩果酸針狀晶體。本發(fā)明齊墩果酸總產(chǎn)率為1. 18%左右，純度為97. 61 %。
[0017] 本發(fā)明經(jīng)提取和分離、純化得到木瓜總?cè)坪妄R墩果酸在胃潰瘍大、小鼠不同類 型的胃潰瘍模型上實(shí)驗(yàn)，表明它們對(duì)多種不同類型的胃潰瘍具有較好的預(yù)防和治療作用。
[0018] 本發(fā)明的有益效果
[0019] 本發(fā)明提供了一種從土家族藥物一皺皮木瓜中分離制備木瓜總?cè)坪妄R墩果 酸，研究顯示木瓜總?cè)坪妄R墩果酸對(duì)應(yīng)激、乙醇、乙酸、幽門結(jié)扎、吲哚美辛致大鼠、小鼠 胃潰瘍均具有良好的預(yù)防和治療作用，能顯著地降低潰瘍指數(shù)和升高潰瘍抑制率；降低幽 門結(jié)扎致胃潰瘍大鼠胃液量、總酸度和總酸排出量，抑制胃蛋白酶活性，抑制胃潰瘍的發(fā) 生；促進(jìn)潰瘍部位黏膜修復(fù)和胃上皮細(xì)胞排列整齊。尤其是木瓜總?cè)?，其作用效果?yōu)于雷 尼替丁。因此，與其相比較具有毒副作用小、療效較好的優(yōu)勢(shì)，值得開(kāi)發(fā)應(yīng)用。
[0020] 本提取分離制備方法為擴(kuò)大皺皮木瓜利用提供了較好的途徑。通過(guò)本工藝得到 的木瓜總?cè)飘a(chǎn)率及純度都比較高（采用上述分離制備方法得到的木瓜總?cè)萍兌葹?85. 78%，齊墩果酸純度為97.61% );在分離和純化齊墩果酸的過(guò)程中，避免了使用傳統(tǒng) 工藝中柱色譜分離的方法，所以使分離過(guò)程簡(jiǎn)單易行、快捷，成本較低；另外也沒(méi)有使用酸 堿試劑，避免了對(duì)生產(chǎn)設(shè)備的腐蝕及廢水的處理，降低了生產(chǎn)成本，同時(shí)減少了對(duì)環(huán)境的污 染?？傊撎崛≈苽涔に嚪浅＿m合醫(yī)藥企業(yè)規(guī)?；崛“櫰つ竟现锌?cè)萍吧a(chǎn)齊墩果 酸。
【附圖說(shuō)明】
[0021] 圖1為鄒皮木瓜提取物的提取、分離工藝。
[0022] 圖2為木瓜總?cè)啤R墩果酸對(duì)乙醇致小鼠胃潰瘍胃粘膜組織形態(tài)學(xué)的影響（A: 正常組，B:模型組，C:木瓜總?cè)聘邉┝拷M，D:齊墩果酸高劑量組，E:雷尼替丁組，HE染 色），
[0023] 圖3為木瓜總?cè)?、齊墩果酸對(duì)乙醇致小鼠胃潰瘍胃粘膜組織形態(tài)學(xué)的影響（A: 正常組，B:模型組，C:木瓜總?cè)聘邉┝拷M，D:齊墩果酸高劑量組，E:雷尼替丁組，HE染 色），
[0024] 圖4為木瓜總?cè)坪妄R墩果酸對(duì)吲哚美辛致小鼠胃黏膜外觀形態(tài)的影響（A:正常 組，B:模型組，C:木瓜總?cè)聘邉┝拷M，D:齊墩果酸高劑量組，E:雷尼替丁組），
[0025] 圖5為木瓜總?cè)?、齊墩果酸對(duì)吲哚美辛致小鼠胃潰瘍胃粘膜組織形態(tài)學(xué)的影響 (A:正常組，B:模型組，C:木瓜總?cè)聘邉┝拷M，D:齊墩果酸高劑量組，E:雷尼替丁組，HE 染色），
【具體實(shí)施方式】
[0026] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說(shuō)明，以下所述，僅是對(duì)本發(fā)明的較佳實(shí)施 例而已，并非對(duì)本發(fā)明做其他形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示 的技術(shù)內(nèi)容加以變更為同等變化的等效實(shí)施例。凡是未脫離本發(fā)明方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明 的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所做的任何簡(jiǎn)單修改或等同變化，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
[0027] 實(shí)施例1
[0028] 皺皮木瓜中一種具有治療胃潰瘍作用三萜組分木瓜總?cè)?，具體通過(guò)以下方法制 備：
[0029] 1)皺皮木瓜預(yù)處理
[0030] 皺皮木瓜近成熟的果實(shí)洗盡、切片曬干，取0.005kg保存，剩下的于48°C恒溫鼓風(fēng) 箱中干燥至恒重，凈重5. 0kg。
[0031] 2)皺皮木瓜脫色
[0032] 樣品用粉碎機(jī)粉碎，過(guò)20目篩，用石油醚為溶劑按6:1的液固比，在60°C條件下脫 色3次，每次2小時(shí)，得到脫色后木瓜粗粉4. 26kg(見(jiàn)圖1)。
[0033] 3)脫色后木瓜粗粉回流提取
[0034] 將上述2)所得脫色木瓜粗粉用乙