部溶解后，過0. 22 μ m有機濾膜于進樣小瓶中，使用高效液相色譜進行檢測。
[0159] 結果顯示，藥物僅在給藥乳區(qū)有檢出，非給藥乳區(qū)無藥物檢出，血漿中也僅有痕量 藥物檢出，且在給藥后24h血漿中藥物濃度已達檢測限以下。這說明藥物幾乎無法穿透血 乳屏障進入血液循環(huán)，僅在給藥乳區(qū)發(fā)揮抗菌消炎作用。具體結果表明，硫酸頭孢喹肟在乳 中藥時曲線下面積AUC為319987. 68±32561. 78h .ng/ml，消除半衰期t1/2為5. 78±0. 93h， 消除速率常數(shù)CI為0. 62±0. 13ml/h/Kg。結合已經(jīng)報道的MIC數(shù)據(jù)，當24h的藥物濃度能 夠全部達到高于致病菌MIC值，36h的藥物濃度則不足以對抗致病菌MIC值，因此，建議給藥 間隔為24h給藥一次。
[0160] 3、硫酸頭孢喹肟乳房注入劑在牛乳中的殘留試驗
[0161] 隨機選取18頭健康奶牛，擠奶后，每頭奶牛四個乳區(qū)，單次注入實施例1所制備硫 酸頭孢喹肟乳房注入劑一瓶（規(guī)格2. 5g/100ml)，間隔24h給藥一次，連續(xù)給藥3次。
[0162] 給藥后 Oh、12h、24h、36h、48h、72h、96h、120h，分別采集奶樣。
[0163] 每頭奶牛四個乳區(qū)在各時間點采集混合奶樣40ml，置于聚丙烯專用塑料瓶中，一 20°C保存。奶樣經(jīng)兩次乙腈提取后吹干，復溶后過HLB固相萃取柱凈化，采用HPLC法檢測 牛乳中藥物濃度。
[0164] 結果顯示，給藥后牛乳中硫酸頭孢喹肟消除迅速，給藥后60h中藥物濃度已低至 EMEA所規(guī)定乳中最高殘留限量20 μ g/Kg，經(jīng)軟件計算處理可知，本制劑在牛乳中休藥期為 94. 32h〇
[0165] 4、硫酸頭孢喹肟乳房注入劑對奶牛乳房炎的藥效學試驗
[0166] 試驗選取只有一個乳區(qū)患有乳房炎的奶牛，共計80個病例（80個患病乳區(qū)），隨機 分為4組，每組20個患病乳區(qū)。硫酸頭孢喹肟乳房注入劑設定3個受試藥物組，分別為高 劑量組（A組，2瓶/乳區(qū)）、中劑量組（B組，1瓶/乳區(qū)）、低劑量組（C組，0. 5瓶/乳區(qū)）， 以及設定1個對照藥物組（D組，氨芐西林鈉乳房注入劑1瓶/乳區(qū)）。上述硫酸頭孢喹肟 乳房注入劑為實施例1所制備樣品，規(guī)格為2. 5g/100ml。
[0167] 所有試驗組動物均每日給藥1次（間隔24h)，連續(xù)給藥3次。在給藥前以及最后 一次給藥后第7天，分別采集各試驗組給藥乳區(qū)的奶樣20ml進行細菌學檢測和牛奶體細胞 測定。觀察并記錄奶牛用藥前后的乳房局部臨床癥狀、泌乳能力、乳汁性狀以及精神食欲狀 態(tài)，綜合評價硫酸頭孢喹肟乳房注入劑對奶牛乳房炎的療效。
[0168] 試驗結果經(jīng)統(tǒng)計分析后的結論如下：
[0169] (1)病原菌檢測結果見表1，該結果表明乳房炎奶牛的感染乳區(qū)灌注硫酸頭孢喹 肟乳房注入劑，每天1次，連續(xù)用藥3次后，高（2倍推薦劑量）、中（推薦劑量）劑量組牛 乳中細菌分別從給藥前的22株和25株降低到給藥后的2株和5株；而低（1/2推薦劑量） 劑量組和對照藥物組牛乳中細菌分別從給藥前的24株和23株降低到給藥后的14株和16 株。說明硫酸頭孢喹肟乳房注入劑高劑量組和中劑量組對奶牛乳房炎主要致病菌有良好的 消除作用，更優(yōu)于低劑量組和對照藥物組。
[0170] 表1、各試驗組奶牛乳區(qū)用藥前后主要病原菌的分離鑒定結果統(tǒng)計
[0171]
[0172] (2)硫酸頭孢喹肟乳房注入劑和對照藥物氨芐西林鈉乳房注入劑對牛奶體細胞數(shù) 的降低有顯著的治療效果，各組內(nèi)體細胞數(shù)明顯減少（P < 〇. 05)，各組之間結果比較無顯 著性差異（P > 0.05)，見表2。
[0173] 各試驗組內(nèi)臨床癥狀評分數(shù)值給藥后明顯優(yōu)于給藥前（P < 0.05)，高、中劑量組 顯著優(yōu)于低劑量組和對照藥物組（P < 0. 05)。高（2倍推薦劑量）、中（推薦劑量）劑量組 硫酸頭孢喹肟乳房注入劑治療后奶牛的乳房局部癥狀、乳汁性狀以及精神食欲狀態(tài)等乳房 炎臨床癥狀都得到明顯改善，臨床療效顯著優(yōu)于低劑量組和對照藥物組（P < 〇. 05)。見表 3〇
[0174] 高、中、低劑量硫酸頭孢喹肟乳房注入劑對奶牛乳房炎的有效率分別為95%、 80 %、60 %，治愈率分別為85 %、70 %、45 %，對照藥物氨芐西林鈉乳房注入劑組隊奶牛乳房 炎的有效率為65%，治愈率為55%，見表4。其中，高劑量組和中劑量組兩組之間差異比較 無統(tǒng)計學意義（P > 0. 05);低劑量組和對照藥物組兩組之間差異比較無統(tǒng)計學意義（P > 0. 05);而高、中劑量組與低劑量組、對照藥物組之間結果比較具有顯著性差異（P < 0. 05)。
[0175] 表2、各治療組乳區(qū)奶樣給藥前后體細胞計數(shù)結果
[0177] 表3、奶牛乳房炎給藥乳區(qū)癥狀評分結果
[0179] 表4、受試藥物和對照藥物對奶牛乳房炎的有效率和治愈率
[0181] 考慮到高（2倍推薦劑量）、中（推薦劑量）劑量組硫酸頭孢喹肟乳房注入劑 對奶牛乳房炎的臨床療效比較無顯著性差異（P >0.05)，均更優(yōu)于低劑量組和對照藥 物組，因此建議硫酸頭孢喹肟乳房注入劑用于防治奶牛乳房炎的臨床用藥方案為1瓶 (2. 5g/100ml)/乳區(qū)/次，間隔24h/次，連續(xù)3次。
[0182] 按照本實施例的體內(nèi)效果試驗方法對實施例2至5的產(chǎn)品進行相同的測試，其結 果與實施例1的效果幾乎相同。表明本發(fā)明所闡述的硫酸頭孢喹肟乳房注入劑效果良好， 安全性高，生物利用度高，對局部組織刺激性小，臨床療效顯著，具有極高的推廣價值。
[0183] 除上述實施例外，本發(fā)明還可以有其他實施方式。凡采用等同替換或等效變換形 成的技術方案，均落在本發(fā)明要求的保護范圍。
【主權項】
1. 一種硫酸頭孢喹肟乳房注入劑制備方法，其特征是，包括以下步驟： 第一步、將預定量的油性溶媒按體積比（1. 5 - 2. 5) : (5. 5 - 6. 5)分成第一溶媒和第 二溶媒； 第二步、將第一溶媒、預定量的主藥硫酸頭孢喹肟、預定量的潤濕劑置研磨裝置內(nèi)進行 研磨，研磨后混合物呈白色或類白色且顆粒分散均勻； 第三步、將第二溶媒、預定量的助懸劑、預定量的抗氧劑在混合器皿中混合，攪拌并加 熱使助懸劑和抗氧劑熔融于第二溶媒，之后降溫至預設溫度； 第四步、將第二步所得混合物轉移至第三步混合器皿中，并在混合器皿中將混合物攪 拌均勻，攪拌后混合物呈類白色混懸液； 第五步、將第四步所得混合物轉移至膠體磨中，研磨混合物，之后即得硫酸頭孢喹肟乳 房注入劑； 每100ml硫酸頭孢喹肟乳房注入劑由以下組分組成：硫酸頭孢喹肟1. 5 - 3. 5g，硫酸 頭孢喹肟的質(zhì)量按頭孢喹肟計，助懸劑0. 1 - 0. 5g，潤濕劑0. 5 - 0. 8g，抗氧劑0. 01 - 0. 02g，余量為油性溶媒。2. 根據(jù)權利要求1所述制備方法，其特征是，第一步中，將預定量的油性溶媒按體積比 (1. 5 - 2. 5) : (5. 5 - 6. 5) : (0· 5 - 1. 5) : (0· 5 - 1. 5)分成第一、第二、第三、第四溶媒； 第四步中，研磨裝置中混合物轉移至混合器皿后，用第三溶媒清洗研磨裝置、并將所得 含第三溶媒的混合物也轉移至混合器皿中； 第五步中，混合器皿中混合物轉移至膠體磨后，用第四溶媒清洗混合器皿、并將所得含 第四溶媒的混合物也轉移至膠體磨中。3. 根據(jù)權利要求1或2所述制備方法，其特征是，所述主藥硫酸頭孢喹肟預先經(jīng)氣流粉 碎至粒徑為D90 = 13 - 17μπι。4. 根據(jù)權利要求1或2所述制備方法，其特征是，所述助懸劑選自單硬脂酸甘油酯、單 硬脂酸鋁、硬脂酸；所述潤濕劑選自司盤80、吐溫80、甘油；所述抗氧劑選自BHT、BHA、TBHQ ; 所述油性溶媒選自大豆油、油酸乙酯、中鏈甘油三酸酯、茶籽油之一或其組合。5. 根據(jù)權利要求1或2所述制備方法，其特征是，每100ml硫酸頭孢喹肟乳房注入劑由 以下組分組成：硫酸頭孢喹肟2. 5g，助懸劑0. 2g，潤濕劑0. 6g，抗氧劑0.Olg，余量為油性溶 媒。6. 根據(jù)權利要求1或2所述制備方法，其特征是，所述助懸劑為單硬脂酸甘油酯；所述 潤濕劑為司盤80 ;所述抗氧劑為BHT;所述油性溶媒由大豆油與油酸乙酯按預定體積比混 合而成，預定體積比為1 :8 - 7 :1。7. 根據(jù)權利要求1或2所述制備方法，其特征是，第二步中，研磨裝置為球磨機，且至少 研磨10分鐘；第三步中，攪拌時加熱至65°C- 75°C，降溫至預設溫度35°C- 45°C;第四步 中，攪拌時于25°C±5°C下攪拌至少10分鐘；第五步中，膠體磨研磨至少15分鐘。8. 根據(jù)權利要求1或2所述制備方法，其特征是，還包括：第六步、將硫酸頭孢喹肟乳 房注入劑按預定規(guī)格灌裝于玻璃瓶中，以鈷60射線進行輻照滅菌，之后進行包裝。9. 根據(jù)權利要求8所述制備方法，其特征是，輻照滅菌時的輻照劑量為至少3KGY。10. -種由權利要求1至9任一項所述制備方法制成的硫酸頭孢喹肟乳房注入劑。
【專利摘要】本發(fā)明涉及硫酸頭孢喹肟乳房注入劑制備方法及所得制劑。該方法包括：將油性溶媒分成第一、第二溶媒；將第一溶媒、主藥、潤濕劑進行研磨；將第二溶媒、助懸劑、抗氧劑混合，攪拌并加熱使助懸劑和抗氧劑熔融于第二溶媒；將前兩者混合，攪拌均勻；將混合物轉移至膠體磨中，研磨混合物，之后即得硫酸頭孢喹肟乳房注入劑。本發(fā)明所制硫酸頭孢喹肟乳房注入劑適于奶牛乳房局部使用，能有效治療乳房炎。
【IPC分類】A61P15/14, A61K9/10, A61P31/04, A61K31/546
【公開號】CN105287374
【申請?zhí)枴緾N201510891563
【發(fā)明人】徐瑞華, 馬小平
【申請人】中牧南京動物藥業(yè)有限公司
【公開日】2016年2月3日
【申請日】2015年12月7日