Nootkatone在制備治療動(dòng)脈粥樣硬化藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及化合物Nootkatone的新用途，尤其涉及Nootkatone在制備治療動(dòng)脈 粥樣硬化藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 心腦血管疾病是當(dāng)代危害人體健康和生命的最嚴(yán)重病癥，是中、老年人的常 見(jiàn)病和多發(fā)病，在許多國(guó)家和地區(qū)的發(fā)病率和死亡率皆位于重病之首。動(dòng)脈粥樣硬化 (atherosclerosis，AS)是心腦血管疾病的主要病理基礎(chǔ)，迄今為止其病因和發(fā)病機(jī)理尚未 完全闡明，故目前沒(méi)有簡(jiǎn)明有效地防治措施和治療藥物。
[0003] 本發(fā)明涉及的化合物Nootkatone是一個(gè)2014年發(fā)表（Kishor L, et al.，Total Synthesis of (±)-Nardoaristolone B and Its Analogues. Organic Letters， 2014, 16,4252-4255.)的新化合物，該化合物擁有全新的骨架類(lèi)型，具有驅(qū)蟲(chóng)作用（Kishor L, et al. , Total Synthesis of(±)-Nardoaristolone B and Its Analogues. Organic Letters，2014, 16, 4252-4255.)，對(duì)于本發(fā)明涉及的Nootkatone在制備治療動(dòng)脈粥樣硬化 藥物中的用途屬于首次公開(kāi)，由于屬于全新的結(jié)構(gòu)類(lèi)型，而且其對(duì)于動(dòng)脈粥樣硬化的抑制 活性強(qiáng)得意想不到，不存在由其他化合物給出任何啟示的可能，具備突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)，同 時(shí)用于動(dòng)脈粥樣硬化的防治顯然具有顯著的進(jìn)步。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明就是針對(duì)上述問(wèn)題提供Nootkatone在制備抗動(dòng)脈粥樣硬化藥物中的應(yīng) 用，用Nootkatone制備的抗動(dòng)脈粥樣硬化的藥物，具有較好的療效。
[0005] 本發(fā)明提供的技術(shù)方案是：Nootkatone在制備抗動(dòng)脈粥樣硬化藥物中的作用。
[0006] 本發(fā)明可用作抗人或動(dòng)物的動(dòng)脈粥樣硬化。本發(fā)明所述藥物可通過(guò)口服或靜脈注 射給予。本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)實(shí)際情況容易地確定給藥劑量。
[0007] 所述化合物Nootkatone,結(jié)構(gòu)如式（I )所示：
[0009] 對(duì)于本發(fā)明涉及的Nootkatone在制備治療動(dòng)脈粥樣硬化藥物中的用途屬于首次 公開(kāi)，由于骨架類(lèi)型屬于全新的骨架類(lèi)型，而且其對(duì)于動(dòng)脈粥樣硬化細(xì)胞的抑制活性強(qiáng)得 意想不到，不存在由其他化合物給出任何啟示的可能，具備突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)，同時(shí)用于動(dòng) 脈粥樣硬化的防治顯然具有顯著的進(jìn)步。
[0010] 以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí) 施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。
【具體實(shí)施方式】
[0011] 本發(fā)明所涉及化合物Nootkatone的制備方法參見(jiàn)文獻(xiàn)（Kishor L, et al.，Total Synthesis of (±)-Nardoaristolone B and Its Analogues. Organic Letters， 2014, 16, 4252-4255.)
[0012] 以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí) 施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。
[0013] 實(shí)施例1 :本發(fā)明所涉及化合物Nootkatone片劑的制備：
[0014] 取20克化合物Nootkatone,加入制備片劑的常規(guī)輔料180克，混勻，常規(guī)壓片機(jī) 制成1000片。
[0015] 實(shí)施例2 :本發(fā)明所涉及化合物Nootkatone膠囊劑的制備：
[0016] 取20克化合物Nootkatone，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉180克，混勾，裝膠 囊制成1000粒。
[0017] 下面通過(guò)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明其藥物活性。
[0018] 本發(fā)明通過(guò)細(xì)胞水平的研究及建立動(dòng)脈粥樣硬化模型等技術(shù)揭示了 Nootkatone 對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的作用。
[0019] 本發(fā)明經(jīng)口及靜脈注射給予Nootkatone，可使動(dòng)脈粥樣硬化大鼠斑塊面積/內(nèi)膜 面積（％)、內(nèi)膜厚度（um)/中膜厚度（％)顯著降低；使血中甘油三酯、總膽固醇及低密度 脂蛋白含量下降，表明Nootkatone可治療動(dòng)脈粥樣硬化。
[0020] 材料與方法
[0021] 1.實(shí)驗(yàn)材料：
[0022] 1. 1動(dòng)物和飼料
[0023] 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：健康大鼠，雌雄各半，體重（200. 0± 20) g。
[0024] 伺料：基礎(chǔ)伺料由江蘇省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；尚脂伺料由2%的膽固醇、10%的豬 油和88%的基礎(chǔ)飼料組成，由江蘇省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心加工完成。
[0025] 1. 2藥品及試劑
[0026] 膽固醇試劑盒：南京建成生物工程研究所；
[0027] 甘油三酯試劑盒：南京建成生物工程研究所；
[0028] 高密度脂蛋白試劑盒：南京建成生物工程研究所；
[0029] 低密度脂蛋白試劑盒：南京建成生物工程研究所；
[0030] 考馬斯亮藍(lán)蛋白測(cè)定試劑盒：南京建成生物工程研究所；
[0031] MDA測(cè)定試劑盒：南京建成生物工程研究所；
[0032] S0D測(cè)定試劑盒：南京建成生物工程研究所；
[0033] 1. 3 器材
[0034] 美國(guó)雅培AER0SET全自動(dòng)生化分析儀；
[0035] JY601電子天平：上海海康電子儀器廠；
[0036] TN-100B型托盤(pán)扭力天平：上海上平儀器公司；
[0037] OLYMPUS倒置型系統(tǒng)顯微鏡；
[0038] WF10X-18MM光學(xué)顯微鏡：重慶光學(xué)儀器廠；
[0039] TGL-16G離心機(jī)：上海安亭科技儀器廠
[0040] L實(shí)驗(yàn)方法··
[0041] 2. 1內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)及Nootkatone作用研究
[0042] 2. 1. 1建立高脂血清損傷的內(nèi)皮細(xì)胞模型
[0043] 取健康日本大耳白兔6只，每日飼喂高脂飼料（2%膽固醇，10%豬油，88%基礎(chǔ)飼 料），4周后無(wú)菌條件下心臟取血5ml，分離血清，合并，56°C水浴30min滅活處理，再以0. 45 及0. 22雙層微孔濾膜過(guò)濾后，-30冷凍保存?zhèn)溆谩?br>[0044] 2. 1. 2細(xì)胞培養(yǎng)和傳代
[0045] 將傳代培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株ECV304培養(yǎng)于含20%小牛血清、2mmol/LL-谷 氨酰胺、1001]/1111青霉素和10(^/1鏈霉素的01^1培養(yǎng)基中。用0,25%胰蛋白酶液與0.02% EDTA(1:1)消化傳代。接種于100ml培養(yǎng)瓶中，送入5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。以備實(shí)驗(yàn)用。 Nootkatone，臨用前用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋。
[0046] 2. 1. 3 分組
[0047] 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞加處理因素前24h更換無(wú)血清培養(yǎng)基，使細(xì) 胞同步化至G1期，然后隨機(jī)分5組：對(duì)照組、高脂血清組、Aphanamixoid A組0· 4 μ g/ml組、 Aphanamixoid A 組 2 μ g/ml 組、Aphanamixoid A 組 10 μ g/ml 組。其中對(duì)照組：加無(wú)血清 01^1培養(yǎng)基；高脂血清組：加含5%高脂血清01^1培養(yǎng)基。
[0048] 2. 1. 4 MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率
[0049] 將生長(zhǎng)良好的EVC304細(xì)胞制備成5 X 107個(gè)*L-1的細(xì)胞懸液，按每孔0. 1ml接種 于96孔板，37°C，5% C02溫育24h