鼠病程中可 見(jiàn)局限性視網(wǎng)膜脫離并迅速發(fā)生全視網(wǎng)膜脫離。對(duì)于出現(xiàn)明顯EAU臨床表現(xiàn)的大鼠，10% 水合氯醛過(guò)量腹腔注射處死，其它大鼠免疫后第23天同樣方法處死。處死后立即摘除眼 球，2. 5%戊二醛固定24h以上，將眼球按子午線(xiàn)方向切開(kāi)，分成兩部分，除去晶狀體，常規(guī) 梯度酒精固定脫水，石蠟包埋，3~4μm切片，HE染色，光學(xué)顯微鏡觀(guān)察，進(jìn)行組織學(xué)炎癥反 應(yīng)評(píng)分。
[0071] 5遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)
[0072] 為了評(píng)價(jià)遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（DTH)，大鼠免疫后第15天，將20ygS-Ag溶于 10μ10. 01mol/L磷酸鹽緩沖液（phosphatebuffersaline,PBS)，注入右耳緣；左耳緣注 入10μ1PBS作為對(duì)照。分別于注射前和注射后24、48、72、96h，使用微米尺測(cè)量雙側(cè)耳緣增 厚度。其中每組各有6只大鼠左耳同時(shí)在另一部位注射含有20μg牛血清白蛋白的10μ1 PBS作為對(duì)照。耳腫脹反應(yīng)程度用以下公式計(jì)算：注射后24h特異性耳腫脹=(注射后24h 右耳量測(cè)值-注射前右耳測(cè)量值）八注射后24h左耳測(cè)量值-注射前左耳測(cè)量值），48、72、 96h特異性耳腫脹測(cè)量計(jì)算方法類(lèi)推。
[0073] 6結(jié)果
[0074] 6· 1組織學(xué)改變
[0075]S-Ag免疫后，2組大鼠大部分均有光感受器外段（receptoroutersegment,R0S) 破壞，正常梳狀紋理消失，甚者R0S變薄、表現(xiàn)為結(jié)膜充血，前房混濁，虹膜后粘連，眼底視 網(wǎng)膜水腫充血。病理切片見(jiàn)玻璃體腔炎癥細(xì)胞，視網(wǎng)膜水腫，各層結(jié)構(gòu)紊亂，炎癥浸潤(rùn)，血 管周?chē)?，網(wǎng)膜內(nèi)肉芽腫等。其中，輕者視網(wǎng)膜內(nèi)界膜增厚，炎癥反應(yīng)性均質(zhì)樣粉染物質(zhì)沉 積和（或）伴有局部空泡形成；神經(jīng)節(jié)細(xì)胞和視網(wǎng)膜內(nèi)叢狀層空泡樣變；視網(wǎng)膜色素上皮 (retinalpigmentepithelium,RPE)細(xì)胞腫脹、空泡樣變性，結(jié)構(gòu)紊亂；虹膜或睫狀體充 血，脈絡(luò)膜增厚（類(lèi)上皮細(xì)胞浸潤(rùn)），偶見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)（主要為淋巴細(xì)胞）。中度者在上 述改變基礎(chǔ)上可見(jiàn)虹膜、睫狀體或玻璃體腔內(nèi)少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；內(nèi)界膜、內(nèi)叢狀層、內(nèi)核 層可見(jiàn)局限性炎癥灶（炎性細(xì)胞聚集）；脈絡(luò)膜血管管壁增厚，血管炎樣反應(yīng)。重度者在上 述改變基礎(chǔ)上，虹膜、睫狀體、脈絡(luò)膜和視網(wǎng)膜各層組織中炎性細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)量增多，玻璃體 彌漫性炎性細(xì)胞滲出；有的眼脈絡(luò)膜明顯炎癥性增厚，以淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)為主；眼組織結(jié)構(gòu) 可見(jiàn)破壞。極重度者眼內(nèi)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)（中性白細(xì)胞為主），浸潤(rùn)部位廣泛，甚至累及 結(jié)膜、角膜、鞏膜、眼肌；眼組織結(jié)構(gòu)完全破壞：尤其視網(wǎng)膜各層組織彌漫性炎性細(xì)胞、炎性 滲出物質(zhì)、壞死組織，可見(jiàn)神經(jīng)上皮層視網(wǎng)膜脫離、全視網(wǎng)膜脫離或脈絡(luò)膜脫離。此外，許 多無(wú)臨床表現(xiàn)者組織學(xué)檢查可見(jiàn)輕度異常，證明實(shí)際發(fā)生了EAU。緩釋型西羅莫司滴眼劑 組EAU組織學(xué)炎癥反應(yīng)評(píng)分低于普通型西羅莫司滴眼劑組，二者差異具有顯著性的意義（P < 0.001)(見(jiàn)下表）。
[0076] 2組大鼠EAU組織學(xué)及DTΗ評(píng)分
[0077]
[0078] 6. 2DTH反應(yīng)
[0079] 2組大鼠右耳均發(fā)生了S-Ag誘導(dǎo)的DTΗ反應(yīng)，全耳明顯紅腫；左耳沒(méi)有DTΗ反 應(yīng)，局部輕度腫脹，不累及全耳，不發(fā)紅，且消退迅速。以PBS為對(duì)照的2組大鼠特異性耳腫 脹值差異無(wú)顯著性的意義（Ρ> 0.05)。各時(shí)間點(diǎn)比較，24h特異性耳腫脹最明顯，48h開(kāi)始 消退，至96h基本恢復(fù)正常。
[0080] 加用牛血清白蛋白作對(duì)照者，緩釋型西羅莫司滴眼劑組特異性耳腫脹值均低于普 通型西羅莫司滴眼劑組，但差異無(wú)顯著性的意義（P> 0. 05)，各時(shí)間點(diǎn)耳腫脹規(guī)律與PBS作 對(duì)照時(shí)相同（見(jiàn)下表）。
[0081]2組大鼠牛血清白蛋白對(duì)照DTΗ評(píng)分
[0082]
[0083] 7結(jié)論
[0084] 在整體水平上，緩釋型西羅莫司滴眼劑（每天給藥1次）和普通型西羅莫司滴眼 劑（每天給藥3次）均能夠抑制大鼠EAU的發(fā)生和減輕EAU的病情，但緩釋型西羅莫司滴 眼劑每日給藥次數(shù)較少，而且療效明顯優(yōu)于普通型西羅莫司滴眼劑。
[0085] 本發(fā)明人還對(duì)緩釋型西羅莫司眼用凝膠和緩釋型西羅莫司眼膏進(jìn)行了穩(wěn)定性、釋 放度、藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)驗(yàn)證，其穩(wěn)定性、釋放度、在眼部的藥代動(dòng)力學(xué)特征和參數(shù)，以及 對(duì)葡萄膜炎等眼部免疫性疾病的治療效果與緩釋型西羅莫司滴眼液相比無(wú)顯著性差異。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種緩釋型西羅莫司眼用制劑及其制備方法，其特征在于，它是以西羅莫司為藥效 原料，以丹參和聚卡波非作為粘膜粘附性聚合物釋藥系統(tǒng)，配以眼局部可以接受的藥劑學(xué) 上所說(shuō)的制劑輔料所制備成的緩釋型制劑，每100重量份藥劑西羅莫司的含量為0. 01~ 1.0重量份，西羅莫司與丹參和聚卡波非的用量按其重量比為：西羅莫司：丹參：聚卡波 非=1 : 0· 5 ~5. 0 : 0· 5 ~2〇2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的緩釋型西羅莫司眼用制劑，其特征在于，其劑型為滴眼液、眼 用凝膠、眼藥膏或藥劑學(xué)上所說(shuō)的任何一種適于眼局部外用的劑型。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的緩釋型西羅莫司眼用制劑，其特征在于，當(dāng)所制作的劑型為 眼藥膏時(shí)，原料組分與輔料用量重量比例為：西羅莫司：丹參：無(wú)水羊毛脂：液狀石蠟： 黃凡士林=1 : 0.5 ~5.0 : 8 ~15 : 2 ~10 : 75 ~95。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的緩釋型西羅莫司眼用制劑，其特征在于，當(dāng)所制作的劑型為 滴眼液或眼用凝膠時(shí)，原料組分還包括硫柳汞、季銨鹽類(lèi)、杜米芬、冼必泰、三氯叔丁醇、尼 泊金類(lèi)、三梨酸中任何一種抑菌劑或所述抑菌劑的任意組合；抑菌劑的用量以與西羅莫司 的重量比表示為，西羅莫司：抑菌劑= 1.0 : 0.002~0.5。5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的緩釋型西羅莫司眼用制劑，其特征在于，當(dāng)所制作的劑型為 滴眼液時(shí)，原料組分還包括羥丙甲纖維素、甲基纖維素、玻璃酸鈉、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷 酮、聚卡波非中的任何一種增稠劑或所述增稠劑的任意組合；增稠劑的用量以與西羅莫司 的重量比表示為，西羅莫司：增稠劑=1. 0 : 0. 1~1. 0。6. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的緩釋型西羅莫司眼用制劑，其特征在于，當(dāng)所制作的劑型為 眼用凝膠時(shí)，原料組分還包括羥丙甲纖維素、甲基纖維素、玻璃酸鈉、聚乙烯醇、聚乙烯吡 咯烷酮、羧甲基纖維素、卡波姆、硫酸軟骨素、聚卡波非中的一種增稠劑或所述增稠劑的任 意組合；增稠劑的用量以與西羅莫司的重量比表示為，西羅莫司：增稠劑=1.0 : 0.5~ 5. 0〇7. 根據(jù)權(quán)利要求4或5或6所述的緩釋型西羅莫司眼用制劑，其特征在于，當(dāng)所制作 的劑型為滴眼液或眼用凝膠時(shí)，使用pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)成品藥劑的pH值為5. 5~7. 5 ;所述pH 調(diào)節(jié)劑為氫氧化鈉、鹽酸、枸櫞酸鈉、枸掾酸、硼酸、硼砂中的任何一種或所述品種的任意組 合。8. 根據(jù)權(quán)利要求4或5或6所述的緩釋型西羅莫司眼用制劑，其特征在于，當(dāng)所制作的 劑型為滴眼液或眼用凝膠時(shí)，使用助溶劑促進(jìn)西莫羅司溶解，所述助溶劑為聚山梨酯-80、 氫化蓖麻油的一種或兩品種的任意組合。9. 根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的緩釋型西羅莫司眼用制劑，其特征在于，當(dāng)所制作的劑型 為滴眼液時(shí)，使用滲透壓調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)滴眼液的滲透壓摩爾濃度為250~350m0sm〇l/kg;所 述滲透壓調(diào)節(jié)劑為氯化鈉、甘露醇的一種或兩品種的任意組合。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種緩釋型西羅莫司眼用制劑及其制備方法，其特征是以西羅莫司為藥效原料，以丹參和聚卡波非作為粘膜粘附性聚合物釋藥系統(tǒng)，配以眼局部可以接受的輔料所制備成的緩釋型制劑，西羅莫司與丹參和聚卡波非的用量按其重量比表示為：西羅莫司∶丹參∶聚卡波非＝1∶0.5～5.0∶0.5～2。所涉及的劑型為滴眼液、眼用凝膠、眼藥膏或藥劑學(xué)上所說(shuō)的任何一種適于眼局部外用的劑型。本發(fā)明添加丹參和聚卡波非作為粘膜粘附性聚合物釋藥系統(tǒng)，解決西羅莫司在單純水溶液中溶解性和穩(wěn)定性差的問(wèn)題。同時(shí)，丹參的添加有助于增強(qiáng)西羅莫司的免疫抑制效果和眼組織穿透性，藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的眼用制劑能更好的治療眼部免疫性疾病。
【IPC分類(lèi)】A61K36/537, A61K47/46, A61K47/32, A61K31/436, A61P37/06, A61P27/02
【公開(kāi)號(hào)】CN105311641
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410369170
【發(fā)明人】王延?xùn)|, 王海英, 李曉純, 吳綺峰, 曹琛
【申請(qǐng)人】廣東宏盈科技有限公司
【公開(kāi)日】2016年2月10日
【申請(qǐng)日】2014年7月30日