，15. 20 (s) ·
[0023] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for C42H69N2O6： 697. 5156 ；found:697. 5151 〇
[0024]
[0025] 實施例4 Schiglautone A的0-(哌嗪基）乙基衍生物（IV)的合成
[0026] 將化合物II (358mg，0. 5mmol)溶于30mL乙腈當中，向其中加入無水碳酸鉀 (1380mg，10.0 mmol)，鵬化鉀（336mg，2. Ommol)和無水哌嗪（3446mg，40mmol)，混合物加熱 回流6h。反應結(jié)束后將反應液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取3次，合并有機相。依次用 水和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn) 物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化（流動相為：石油醚/丙酮=100:0. 5, v/v)，收集淡 棕色集中洗脫帶即得到化合物IV的淡棕色固體（261. 4mg，72% )。
[0027] 1H NMR (500MHz，DMS0-d6) δ 13. 14 (s，1H)，6. 14 (s，1H)，5. 57 (d，J = 21. 3Hz, 2H), 3. 59 (s, 2H), 3. 52 (s, 2H), 3. 01 (s, 1H), 2. 68 (s, 8H), 2. 57 (d, J = 3. 3Hz, 4H), 2. 39 (s, 2H), 2. 34 (d, J = 4. 3Hz, 8H), 2. 33 (s, 1H), 2. 22 (s, 1H), L 88 (d, J = 11. 7Hz, 4H), I. 79 (s, 1H), I. 73 (s, 1H), I. 66 (s, 1H), I. 60 - I. 53 (m, 3H), I. 50 (s, 1H), I. 37 (s, 1H), I. 28 (dd, J = 21. 3, 8. 7Hz, 4H), I. 07 (d, J = 6. 6Hz, 2H), I. 06 (s, 1H), 0. 99 (t, J = 12. 0Hz, 3H), 0. 96 (t, J = 12. 5Hz, 6H), 0. 94 (t, J = 12. 5Hz, 3H), 0. 88 (d, J = 20. 0Hz, 6H).
[0028] 13C NMR (125MHz, DMS0-d6) δ 211. 55 (s)，209. 25 (s)，170. 19 (s)，161. 22 (s)，143. 6 2 (s)，132. 14 (s)，127. 86 (s)，86. 08 (s)，82. 53 (s)，67. 07 (s)，66. 22 (s)，57. 27 (s)，54. 54 (s )，54. 24 (s)，52. 84 (s)，52. 00 (s)，45. 88 (s)，45. 35 (s)，40. 76 (s)，38. 67 (s)，38. 45 (s)，35. 12 (s)，33. 65 (s)，29. 96 (s)，29. 07 (s)，26. 83 (s)，25. 61 (s)，24. 15 (s)，22. 43 (s)，21. 16 (s) ，20. 68 (s)，20. 11 (s)，18. 76 (s)，18. 23 (s)，15. 18 (s) ·
[0029] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for C42H71N406:727. 5374 ;found:727. 5379。
[0030]
[0031] 實施例5組合物對單側(cè)輸尿管結(jié)扎大鼠腎間質(zhì)纖維化的影響
[0032] I. 1 材料
[0033] 貝那普利，北京諾華制藥有限公司生產(chǎn)；羥脯氨酸（HYP)試劑盒，南京建成生物公 司；纖維連結(jié)蛋白（FN)試劑盒購自上海生物制品所。
[0034] 組合物的制備：將研磨之后過200目網(wǎng)的80mg化合物III的粉末和研磨之后過 200目網(wǎng)的20mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到IOOmg組 合物，使用時用水溶解這IOOmg的組合物即得到組合物的溶液。
[0035] 實驗動物：普通級Wistar大鼠，雄性，體重150-200g，SD大鼠。
[0036] 1. 2試驗方法與結(jié)果
[0037] 大鼠60只，隨機分6組，即假手術組、模型組、苯那普利灌胃10mg/kg組、組合物 灌胃lOmg/kg組、化合物III灌胃10mg/kg組、化合物IV灌胃10mg/kg組，動物喂養(yǎng)1周， 各大鼠以10%水合氯醛3. OmL/kg腹腔注射麻醉后，將大鼠右側(cè)臥位固定與手術臺上，剪毛 后用碘酒、75%酒精消毒手術區(qū)，行左側(cè)腹切口，逐層切開皮膚、肌肉及腹壁各層，暴露并分 離左側(cè)輸尿管，假手術組僅切開腹腔并游離左側(cè)輸尿管，但不結(jié)扎和剪斷，其他各組大鼠用 4-0絲線結(jié)扎兩道，上一道結(jié)扎點位于左腎下極水平，然后在兩道結(jié)扎點剪斷輸尿管，逐層 縫合，術后10天10%水合氯醛麻醉后處死各組動物，取血，按纖維連結(jié)蛋白測定說明測定 說明纖維聯(lián)接蛋白（FN)。生理鹽水反復灌洗后留取左側(cè)腎臟，腎組織經(jīng)4%的多聚甲醛緩 沖液固定。切取適量腎組織，按羥脯氨酸試劑盒測定說明測定羥脯氨酸。
[0038] 常規(guī)病理學檢①肉眼觀察：假手術組腎臟顏色鮮紅，表明光滑，包膜光澤，無粘連。 模型對照組腎臟體積增大，顏色蒼白，表明呈顆粒狀，類似人體大白腎，少數(shù)區(qū)域腎包膜粘 連。②光鏡檢查：假手術組腎單位結(jié)果清晰，腎小球囊無擴張或炎細胞浸潤。模型對照組大 片腎小管壞死，腎間質(zhì)纖維細胞增生，腎小管擴張，內(nèi)有大量棕黃色遮光物質(zhì)或壞死脫落的 上皮細胞，腎小球數(shù)目減少，部分腎小球纖維化并與包曼氏囊壁粘連，囊腔消失。組合物給 藥組病變與模型對照組類似，但均有不同程度的形態(tài)學改善，與模型對照組比較有明顯差 異。而化合物III給藥組和化合物IV給藥組與模型對照組無顯著性差異。
[0039] 表1組合物對單側(cè)輸尿管結(jié)扎大鼠腎間質(zhì)纖維化的影響
[0041] *ρ〈0· 05,與模型組相比較
[0042] 對各組FN、HYP進行T檢驗。結(jié)果見表1，組合物灌胃10mg/kg顯著降低FN、HYP 水平（與模型對照組比較，P〈〇. 05或0. 01);而化合物III和化合物IV灌胃10mg/kg未能 顯著降低FN、HYP水平。
[0043] 結(jié)論：組合物能夠顯著降低腎間質(zhì)纖維化FN、HYP水平的升高，抑制腎間質(zhì)纖維 化，可以用來制備抗腎纖維化藥物?；衔颕II和化合物IV不能夠顯著降低腎間質(zhì)纖維 化FN、HYP水平的升高，不能抑制腎間質(zhì)纖維化，不可以用來制備抗腎纖維化藥物。
[0044] 實施例6本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備
[0045] 取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機制成100片。
[0046] 實施例7本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備
[0047] 取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100 粒。
【主權(quán)項】
1. 一種組合物，其特征為該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物 III和化合物IV的質(zhì)量百分數(shù)分別為80%和20%，2. 如權(quán)利要求1所述的組合物的制備方法，其特征為：將化合物III的粉末和化合物 IV的粉末按照質(zhì)量百分數(shù)分別為80%和20%充分混合。3. -種如權(quán)利要求1所述的組合物在治療腎纖維化藥物中的應用。4. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療腎纖維化藥物中的應用，其特征為：所述腎纖維 化為腎間質(zhì)纖維化。5. 如權(quán)利要求4所述的組合物在治療腎纖維化藥物中的應用，其特征為：所述腎間質(zhì) 纖維化為單側(cè)輸尿管阻塞形成的腎間質(zhì)纖維化。6. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療腎纖維化藥物中的應用，其特征為：所述組合物 降低腎纖維化引起的纖維連結(jié)蛋白FN的升高。7. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療腎纖維化藥物中的應用，其特征為：所述組合物 降低腎纖維化引起的羥脯氨酸的升高。
【專利摘要】本發(fā)明涉及有機合成和藥物化學領域，具體涉及組合物、制備方法及其在制備預防或治療腎纖維化藥物上的用途。本發(fā)明公開了一種組合物及其制備方法。藥理學實驗表明，本發(fā)明的組合物具有預防或治療腎纖維化的作用，具有開發(fā)預防或治療腎纖維化藥物的價值。
【IPC分類】A61P13/12, C07D295/088, A61K31/496, A61K31/4025
【公開號】CN105326842
【申請?zhí)枴緾N201510665593
【發(fā)明人】吳俊華, 黃蓉, 王慧
【申請人】南京大學
【公開日】2016年2月17日
【申請日】2015年10月14日