[0048]lOOnmol of mPEG-PLGA、lOOnmol 二氣卩卜吩 e6、50nmol 1-(3- 二甲基氛基丙基)-3-乙基碳二亞胺、25nmol 4_( 二甲氨基)吡啶和50 μ L三乙胺在10mL無水二氯甲烷中混合，氬氣保護(hù)下室溫反應(yīng)48h，產(chǎn)物透析48h，冷凍干燥，獲得mPEG-PLGA- 二氫卟吩e6。
[0049]將7.5mg mPEG-PLGA-二氫卩卜吩e6溶于1.5mL丙酮中，超聲15min至完全溶解。在磁力攪拌下將上述溶液以30 μ L/min的速度滴加到10mL的去離子水中。繼續(xù)攪拌30min，固化納米顆粒。利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓蒸發(fā)、除去溶液中的有機(jī)溶劑，得到所述納米光熱治療試劑。
[0050]實(shí)施例3:
[0051]—種納米光熱治療試劑，其為由聚乙二醇-聚乳酸-乙醇酸嵌段共聚物(PEG-PLGA)與卟啉類化合物共價(jià)鍵連接的聚合物形成的納米顆粒。
[0052]該納米光熱治療試劑的制備方法包括:
[0053]lOOnmol of PEG-PLGA、lOOnmol 血P卜啉、300nmol N_ 輕基琥?白酰亞胺、300nmol 二環(huán)己基碳二亞胺，室溫反應(yīng)48h，過濾后產(chǎn)物透析48h，冷凍干燥，獲得PEG-PLGA-卟啉。
[0054]將20mg PEG-PLGA-卟啉溶于lmL 二氯甲烷中，超聲15min至完全溶解。加入10mLPVA(l % )溶液，渦旋震蕩使其混合均勻，利用高速剪切機(jī)乳化5min，乳化功率6，OOOrmp，得到水包油乳狀液。利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓蒸發(fā)、除去溶液中的有機(jī)溶劑，得到所述納米光熱治療試劑。
[0055]實(shí)施例4
[0056]一種納米光熱治療試劑，其為由單甲氧基聚乙二醇-聚乳酸-乙醇酸嵌段共聚物(mPEG-PLGA)與卟啉類化合物共價(jià)鍵連接的聚合物形成的納米顆粒。
[0057]該納米光熱治療試劑的制備方法包括:
[0058]lOOnmol of mPEG_PLGA、50nmol 原P卜啉、50nmol 1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺、25nmol 4_( 二甲氨基)吡啶和50 μ L Ν，Ν-二異丙基乙胺在10mL無水二氯甲烷中混合，氬氣保護(hù)下室溫反應(yīng)48h，產(chǎn)物透析24h，冷凍干燥，獲得mPEG-PLGA-卟啉。
[0059]將mPEG-PLGA-卟啉溶于二氯甲烷中，濃度為20mg/mL，超聲15min至完全溶解。取0.2mL去離子水與1.0mLmPEG-PLGA-卟啉溶液，用細(xì)胞超聲破碎機(jī)乳化3min，得油包水初乳。將初乳加入到3mLPVA水溶液中，渦旋震蕩混合均勻，然后超聲乳化5min得到水包油包水復(fù)乳。利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓蒸發(fā)、除去溶液中的二氯甲烷，得到所述納米光熱治療試劑。
[0060]實(shí)施例5
[0061]一種納米光熱治療試劑，其為由單甲氧基聚乙二醇-聚乳酸-乙醇酸嵌段共聚物(mPEG-PLGA)和聚乙二醇-聚乳酸-乙醇酸嵌段共聚物(PEG-PLGA)與卟啉類化合物共價(jià)鍵連接的聚合物形成的納米顆粒。
[0062]該納米光熱治療試劑的制備方法包括:
[0063]I)將120nmol的mPEG-PLGA和PEG-PLGA溶于15mL無水二氯甲烷中，得聚合物溶液；其中，mPEG-PLGA與PEG-PLGA的比例為1:1;
[0064]2)向所得聚合物溶液中加入60nmol的原卟啉、60nmol的1_(3_ 二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺、30nmol的4_( 二甲氨基)吡啶和60 μ L的N，N- 二異丙基乙胺在氬氣保護(hù)下室溫反應(yīng)48h ;將所得產(chǎn)物過濾、透析24h，冷凍干燥，獲得mPEG-PLGA-卟啉和PEG-PLGA-卟啉；
[0065]3)將所得mPEG-PLGA-卟啉和PEG-PLGA-卟啉溶于二氯甲烷中，mPEG-PLGA-卟啉和PEG-PLGA-卟啉濃度分別為12mg/mL，超聲15min至完全溶解；取0.2mL去離子水與1.0mL的mPEG-PLGA-卟啉和PEG-PLGA-卟啉溶液，用細(xì)胞超聲破碎機(jī)乳化3min，得油包水初乳；將初乳加入到3mL的PVA (聚乙烯醇)水溶液中，渦旋震蕩混合均勻，然后超聲乳化5min得到水包油包水復(fù)乳；利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓蒸發(fā)、除去溶液中的二氯甲烷，得到所述納米光熱治療試劑。
[0066]實(shí)施例6
[0067]一種納米光熱治療試劑，其為由單甲氧基聚乙二醇-聚乳酸-乙醇酸嵌段共聚物(mPEG-PLGA)和聚乙二醇-聚乳酸-乙醇酸嵌段共聚物(PEG-PLGA)與卟啉類化合物共價(jià)鍵連接的聚合物形成的納米顆粒。
[0068]該納米光熱治療試劑的制備方法包括:
[0069]I)將120nmol的mPEG-PLGA和PEG-PLGA溶于15mL無水二氯甲烷中，得聚合物溶液；其中，mPEG-PLGA與PEG-PLGA的比例為1:1;
[0070]2)向所得聚合物溶液中加入60nmol的二氫卟吩e6、60nmol的1-(3- 二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺、30nmol的4_( 二甲氨基)吡啶和60 μ L的N，N-二異丙基乙胺在氬氣保護(hù)下室溫反應(yīng)48h ;將所得產(chǎn)物過濾、透析24h，冷凍干燥，獲得mPEG-PLGA-卟啉和PEG-PLGA-卟啉；
[0071]3)將所得mPEG-PLGA-卟啉和PEG-PLGA-卟啉溶于二氯甲烷中，mPEG-PLGA-卟啉和PEG-PLGA-卟啉濃度分別為12mg/mL，超聲15min至完全溶解；取0.2mL去離子水與1.0mL的mPEG-PLGA-卟啉和PEG-PLGA-卟啉溶液，用細(xì)胞超聲破碎機(jī)乳化3min，得油包水初乳；將初乳加入到3mL的PVA (聚乙烯醇)和F68(聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物)的混合水溶液中，渦旋震蕩混合均勻，然后超聲乳化5min得到水包油包水復(fù)乳；利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓蒸發(fā)、除去溶液中的二氯甲烷，得到所述納米光熱治療試劑。
[0072]實(shí)驗(yàn)例I
[0073]圖1是實(shí)施例1制備的納米光熱治療試劑的透射電鏡圖，從電鏡圖上可以看出，納米顆粒的尺寸在lOOnm左右，近似球形。利用激光粒度儀測定實(shí)施例1獲得的納米光熱治療試劑的粒徑分布，如圖2所示，納米顆粒的平均粒徑為150nm左右，也進(jìn)一步證實(shí)所述納米光熱治療試劑具有良好的分散性。對實(shí)施例1獲得的納米光熱治療試劑和單純的原卟啉進(jìn)行熒光分析，如圖3，結(jié)果顯示納米光熱治療試劑熒光猝滅非常嚴(yán)重，說明原卟啉在納米光熱治療試劑中高度聚集，這也是其具有良好光熱性能的原因。
[0074]此外，對實(shí)施例2制備的納米光熱治療試劑以及二氫卟吩e6和PBS緩沖溶液進(jìn)行光熱效應(yīng)測定，在680nm的激光器(鐳志威，北京)下，利用lW/cm2的激光對其照射，并利用熱成像儀(Ti27，F(xiàn)luke)進(jìn)行溫度測評，結(jié)果顯示如圖4所示，由圖4可知該所述納米光熱治療試劑具有良好的光熱性能。利用紫外分光光度計(jì)對實(shí)施例1獲得的納米光熱治療試劑和修飾卟啉的聚合物進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果如圖5所示，納米光熱治療試劑相比修飾卟啉的聚合物發(fā)生紅移，因此，所述納米光熱治療試劑能夠有效的吸收近紅外光以用于光熱治療。
[0075]雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實(shí)施方案對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對之作一些修改或改進(jìn)，這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種納米光熱治療試劑，其特征在于，其為由單甲氧基聚乙二醇-聚乳酸-乙醇酸嵌段共聚物和/或聚乙二醇-聚乳酸-乙醇酸嵌段共聚物與卟啉類化合物共價(jià)鍵連接的聚合物形成的納米顆粒；優(yōu)選地，所述納米顆粒尺寸為50?100nm ;進(jìn)一步優(yōu)選地，所述納米顆粒尺寸為50nm?300nm。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米光熱治療試劑，其特征在于，所述單甲氧基聚乙二醇-聚乳酸-乙醇酸嵌段共聚物或聚乙二醇-聚乳酸-乙醇酸嵌段共聚物的聚乙二醇段的重均分子量為1000?10000 ； 優(yōu)選地，所述聚乳酸-乙醇酸嵌段共聚物段的重均分子量為5000?50000 ; 優(yōu)選地，所述聚乳酸-乙醇酸嵌段共聚物段丙交酯和乙交酯的摩爾比例為50:50?90:10。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的納米光熱治療試劑，其特征在于，所述卟啉類化合物為含有羧基的卟啉；優(yōu)選為原卟啉、血卟啉、二氫卟吩e6中的一種或幾種。4.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述納米光熱治療試劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟: 501:將單甲氧基聚乙二醇-聚乳酸-乙醇酸嵌段共聚物和/或聚乙二醇-聚乳酸-乙醇酸嵌段共聚物溶于有機(jī)溶劑中，得聚合物溶液； 502:向所述聚合物溶液中加入能夠和聚合物上羥基反應(yīng)的卟啉類化合物；或者還加入催化劑，攪拌反應(yīng)，得修飾卟啉的聚合物； 503:將所述修飾卟啉的聚合物制備成納米顆粒。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟SOl中，所述有機(jī)溶劑為能溶解單甲氧基聚乙二醇-聚乳酸-乙醇酸嵌段共聚物或者聚乙二醇-聚乳酸-乙醇酸嵌段共聚物的有機(jī)溶劑；優(yōu)選為二氯甲烷、三氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、乙酸乙酯中的一種或幾種。6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟S02中，所述卟啉類化合物是已經(jīng)被活化羧基的卟啉化合物；或是通過加入催化劑活化的羧基卟啉化合物。7.根據(jù)權(quán)利要求4或6所述的制備方法，其特征在于，所述催化劑為1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺、4-( 二甲氨基)吡啶、N-羥基琥珀酰亞胺、二環(huán)己基碳二亞胺中的一種或幾種。8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟S02中，單甲氧基聚乙二醇-聚乳酸-乙醇酸嵌段共聚物或者聚乙二醇-聚乳酸-乙醇酸嵌段共聚物的羥基與所述卟啉類化合物進(jìn)行反應(yīng)時(shí)加入有機(jī)堿作為縛酸劑；所述縛酸劑優(yōu)選為三乙胺、N, N- 二異丙基乙胺中的一種或幾種。9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟S03中，將所述修飾卟啉的聚合物制備成納米顆粒的方法為乳化-固化法、納米沉淀法、乳化-溶劑蒸發(fā)法中的任意一種。10.根據(jù)權(quán)利要求4-9任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于，所述單甲氧基聚乙二醇-聚乳酸-乙醇酸嵌段共聚物或者聚乙二醇-聚乳酸-乙醇酸嵌段共聚物與卟啉類化合物的摩爾比為1: 10?10:1，所述催化劑與單甲氧基聚乙二醇-聚乳酸-乙醇酸嵌段共聚物或者聚乙二醇-聚乳酸-乙醇酸嵌段共聚物的摩爾比為5:1?1:5。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種納米光熱治療試劑及其制備方法，其為由mPEG-PLGA和/或PEG-PLGA與卟啉類化合物共價(jià)鍵連接的聚合物形成的納米顆粒，優(yōu)選所述納米顆粒尺寸為50～1000nm；所述制備方法包括先制備修飾卟啉的聚合物，再制備成納米顆粒。該納米光熱治療試劑在光熱治療試劑中具有一定的應(yīng)用潛力。
【IPC分類】A61K41/00, A61K9/14, A61P35/00, A61K47/48
【公開號】CN105327348
【申請?zhí)枴緾N201510757257
【發(fā)明人】吳雁, 聶廣軍, 蘇世帥, 邵磊厚
【申請人】國家納米科學(xué)中心
【公開日】2016年2月17日
【申請日】2015年11月9日