一種能逆轉(zhuǎn)細(xì)菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗菌藥耐藥性的復(fù)方制劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及畜禽大腸桿菌治療技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種能逆轉(zhuǎn)細(xì)菌對(duì)0 -內(nèi)酷胺 類抗菌藥耐藥性的復(fù)方制劑。
【背景技術(shù)】
[0002] 大腸桿菌是常見的條件致病菌，也是常發(fā)的一種疾病，它可原發(fā)引起雞急性敗血 癥、腹膜炎、肝炎、肺炎、腸炎等多部位嚴(yán)重感染，亦可繼發(fā)或混發(fā)于病毒病，給養(yǎng)殖業(yè)造成 巨大的經(jīng)濟(jì)損失。
[0003] 長(zhǎng)期W來，人們習(xí)慣使用阿莫西林、氨節(jié)西林、頭抱嚷巧、頭抱曲松、阿莫西林/克 拉維酸、氨節(jié)西林/舒己坦等P-內(nèi)酷胺環(huán)類抗生素治療該病。雖然抗生素的廣泛使用對(duì)雞 大腸桿菌病的控制發(fā)揮了重要作用，但其持續(xù)使用或不當(dāng)使用將導(dǎo)致雞藥物敏感性降低、 細(xì)菌耐藥性增加和藥物殘留，嚴(yán)重影響了養(yǎng)雞業(yè)的可持續(xù)發(fā)展和動(dòng)物性食品的安全。
[0004] 研究證實(shí)，耐藥的主要機(jī)制之一是產(chǎn)生0 -內(nèi)酷胺酶，尤其是超廣譜0 -內(nèi)酷胺酶 巧Xtended-SpectrumP-lactamase,ESBLs),該酶能較強(qiáng)和快速地水解0-內(nèi)酷胺環(huán)，使運(yùn) 類抗生素喪失抗菌活性。ESBLs是0 -內(nèi)酷胺酶的最主要酶型，它不僅對(duì)頭抱=代和氨曲南 耐藥，而且對(duì)氨基糖巧類、哇諾酬類和橫胺類呈交叉耐藥，僅對(duì)碳青霉締類、頭霉締類藥物 敏感。許多文獻(xiàn)已經(jīng)報(bào)道大腸桿菌的多重耐藥性與產(chǎn)生ESBLs有密切關(guān)系，國(guó)內(nèi)外對(duì)之較 為關(guān)注。
[0005] 發(fā)明人最近開展了食品動(dòng)物源致病菌ES化S的檢測(cè)、提取、酶對(duì)抗生素的水解率 及舒己坦、他挫己坦W及中藥的抑酶保護(hù)作用等研究，對(duì)部分ESBLs大腸桿菌的藥敏試驗(yàn) 表明，其多重耐藥率明顯高于非ESBLs菌株。另外，結(jié)果還表明產(chǎn)ESBLs菌株不僅對(duì)頭抱嚷 巧等第=代頭抱菌素嚴(yán)重耐藥，而且亦對(duì)氣哇諾酬類、氨基糖巧類和橫胺類、憐霉素等多種 抗菌藥耐藥，呈嚴(yán)重的多重耐藥。。
[0006] 大腸桿菌的耐藥性造成養(yǎng)殖戶用藥成本增加，治療療程延長(zhǎng)，畜禽死亡率增加，給 生產(chǎn)帶來較大經(jīng)濟(jì)損失，并且增加畜禽藥物殘留風(fēng)險(xiǎn)。因此，實(shí)際生產(chǎn)中亟需一種對(duì)無論是 否耐藥的大腸桿菌都能有較好治療作用的藥物，并能縮短治療療程，減少死亡率，降低經(jīng)濟(jì) 損失且降低藥物殘留，為養(yǎng)殖戶創(chuàng)造更高的經(jīng)濟(jì)效益，也保障人類的健康安全。
[0007] 龍膽草，中藥名，為龍膽科植物龍膽、條葉龍膽、=花龍膽和濱龍膽的根和根莖。龍 膽草具有保肝、健胃、抗炎、抗菌等功效。開發(fā)和研究龍膽草更多更好的醫(yī)藥功效，是許多中 醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域的重要研究課題之一。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 針對(duì)【背景技術(shù)】所述面臨的種種問題，本發(fā)明的目的在于提供一種能逆轉(zhuǎn)細(xì)菌對(duì) 0-內(nèi)酷胺類抗菌藥耐藥性的復(fù)方制劑，通過在P-內(nèi)酷胺類抗菌藥中加入龍膽草中藥組 成復(fù)方制劑，所得的產(chǎn)品能夠明顯抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)，能夠逆轉(zhuǎn)細(xì)菌對(duì)P-內(nèi)酷胺類抗菌藥 的耐藥性，從而提高了 0-內(nèi)酷胺類抗菌藥的治療效果。
[0009] 為達(dá)到上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種能逆轉(zhuǎn)細(xì)菌對(duì)e-內(nèi)酷胺類 抗菌藥耐藥性的復(fù)方制劑，所述復(fù)方制劑包括W下原料：e-內(nèi)酷胺類抗菌藥、龍膽草中 藥。
[0010] 進(jìn)一步地，所述復(fù)方制劑包括W下重量份的原料：e-內(nèi)酷胺類抗菌藥3-30份、龍 膽草中藥5-200份。
[0011] 進(jìn)一步地，所述0 -內(nèi)酷胺類抗菌藥為阿莫西林、頭抱曲松鋼或頭抱嚷巧鋼。
[0012] 更進(jìn)一步地，所述復(fù)方制劑包括W下重量份的原料：阿莫西林抗菌藥3-20份、龍 膽草中藥40-180份。
[0013] 更進(jìn)一步地，所述復(fù)方制劑包括W下重量份的原料：頭抱嚷巧鋼抗菌藥3-25份、 龍膽草中藥30-190份。
[0014] 進(jìn)一步地，所述復(fù)方制劑按照常規(guī)方法制備成散劑、片劑、口服液或顆粒劑。
[0015] 進(jìn)一步地，所述龍膽草中藥取其根和根莖。
[0016] 本發(fā)明復(fù)方制劑的制備方法為：將龍膽草中藥粉碎過60目篩，再與粉末狀的 0 -內(nèi)酷胺類抗菌藥混勻，按常規(guī)方法制備成散劑、片劑、口服液或顆粒劑。
[0017] 本發(fā)明復(fù)方制劑的飼喂方法：按照0.l-7g主藥Ag飼料的添加量添加到畜禽飼料 中進(jìn)行飼喂。
[0018] 本發(fā)明的有益效果是：發(fā)明人在0-內(nèi)酷胺類抗菌藥中加入廣西特色中藥龍膽 草，能夠明顯抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)，能夠逆轉(zhuǎn)細(xì)菌對(duì)0 -內(nèi)酷胺類抗菌藥的耐藥性，并且大幅度 地降低了用藥成本和藥物殘留，為養(yǎng)殖戶創(chuàng)造更高的經(jīng)濟(jì)效益，同時(shí)也確保了肉產(chǎn)品食用 安全。
【具體實(shí)施方式】
[0019] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明能逆轉(zhuǎn)細(xì)菌對(duì)0 -內(nèi)酷胺類抗菌藥耐藥性的復(fù)方制劑 作進(jìn)一步說明。
[0020] 一、龍膽草中藥對(duì)0 -內(nèi)酷胺類抗菌藥的耐藥逆轉(zhuǎn)作用研究
[0021] 0 -內(nèi)酷胺類抗菌藥本身具有治療大腸桿菌的效果，但由于產(chǎn)ESBLs耐藥基因的 大腸桿菌具有較強(qiáng)的耐藥性，致使0-內(nèi)酷胺類抗菌藥在正常的使用劑量情況下并未表現(xiàn) 出較好的治療效果。
[0022] 為了驗(yàn)證龍膽草中藥對(duì)0 -內(nèi)酷胺類抗菌藥的耐藥逆轉(zhuǎn)作用，在96孔板上采用微 量試管二倍稀釋法，先測(cè)定了P-內(nèi)酷胺類抗菌藥對(duì)產(chǎn)ESBLs耐藥基因的大腸桿菌株的最 小抑菌濃度和龍膽草中藥對(duì)產(chǎn)ESBLs耐藥基因大腸桿菌株的亞抑菌濃度，然后在培養(yǎng)基中 加入亞抑菌濃度的龍膽草中藥再次使用微量試管二倍稀釋法培養(yǎng)測(cè)定0-內(nèi)酷胺類抗菌 藥的最小抑菌濃度；利用連續(xù)傳代法在加有同樣亞抑菌濃度龍膽草中藥和同樣濃度0 -內(nèi) 酷胺類抗菌藥的培養(yǎng)基中對(duì)產(chǎn)ESBLs耐藥基因大腸桿菌株進(jìn)行傳代培養(yǎng)，直至觀測(cè)到的 0 -內(nèi)酷胺類抗菌藥最小抑菌濃度與傳代前相比變小4倍W上，即可判斷為龍膽草中藥對(duì) 0-內(nèi)酷胺類抗菌藥具有耐藥逆轉(zhuǎn)作用。試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)如表1所示：
[0023] 表1亞抑菌濃度化5g/mL)龍膽草中藥傳代引起產(chǎn)ESBLs大腸桿菌西藥MIC的變 化（yg/血)。
[0024]
[00巧]由上表可知，e-內(nèi)酷胺類抗菌藥對(duì)耐藥大腸桿菌的最小抑菌濃度均減小4倍W上，即可判斷是龍膽草中藥對(duì)產(chǎn)ESBLs耐藥基因大腸桿菌具有耐藥逆轉(zhuǎn)作用。 陽(yáng)0%] 二、本發(fā)明復(fù)方制劑的應(yīng)用實(shí)例
[0027] 本發(fā)明復(fù)方制劑按照W下方法制備實(shí)施例1-實(shí)施例4 :將龍膽草中藥粉碎過60 目篩后，作為基礎(chǔ)原料，再與粉末狀的P-內(nèi)酷胺類抗菌藥按重量份比例放入混合器中混 勻，按常規(guī)方法，將復(fù)方制劑制備成制劑產(chǎn)品。其中，頭抱曲松鋼和頭抱嚷巧鋼是同一種抗 菌藥，而頭抱嚷巧鋼是二代廣譜抗菌藥，頭抱曲松鋼是=代廣譜抗菌藥。實(shí)施例5-8中的頭 抱嚷巧鋼抗菌藥可W直接替換成頭抱曲松鋼抗菌藥。 陽(yáng)02引表2實(shí)施例1-8的配方及制備劑型
[0030] 發(fā)明人將上