3) 種子罐發(fā)酵：將步驟（1)種子罐發(fā)酵培養(yǎng)基放入種子罐中，在種子罐內(nèi)進行蒸汽高 溫滅菌并冷卻后，按接種量0. 5~1%接入步驟（2)的搖瓶菌種；每隔1h間歇攪拌3min 混勻，溫度30 °C，罐壓0. 06MPa，自然pH的條件下培養(yǎng)24h后備用； (4) 批量產(chǎn)品的制備：將步驟（1)固體培養(yǎng)基滅菌并冷卻，按制備菌劑重量的3~5 %的 比例稱取步驟（3)種子罐液體菌種，按菌種與水1 :6的比例放入無菌水中，而后接入固體培 養(yǎng)基中并混勻；移入發(fā)酵槽中，料厚90~100cm，表層覆蓋塑料薄膜密封，室溫控制在30~ 32 °C，培養(yǎng)72h后在低于50 °C的條件下烘干、粉碎、裝袋，備用，所獲干酪乳桿菌LCZ-1制 劑活菌數(shù)量不低于40X10sCFU/g。 toon] 所述用于防控雛禽腸道病原，促進腸道菌群發(fā)育的復合微生態(tài)制劑，在制備完成 后，真空封裝，常溫保存；該制劑用于初生雛禽開口飼喂時，直接水溶飼喂，或與不含抗生素 的營養(yǎng)物質(zhì)或飼料混合使用，用量為：每公斤水或飼料添加復合微生態(tài)制劑5-10g，且需連 續(xù)飼喂4-6d;該制劑用于多日齡雛禽由沙門氏菌和大腸桿菌引起的疾病防控，以及腸道菌 群調(diào)控時，直接水溶飼喂，或與不含抗生素的飼料混合使用，用量為：每公斤水或飼料添加 復合微生態(tài)制劑3-5g，連續(xù)服用6-10d，或在幼齡期持續(xù)服用；該制劑用于患由沙門氏菌 和大腸桿菌引起的疾病雛禽的治療時，直接水溶飼喂，或與不含抗生素的飼料混合使用，用 量為：每公斤水或飼料添加復合微生態(tài)制劑10-15g，連續(xù)服用4-6d。
[0012]與現(xiàn)有的技術相比，本發(fā)明具有以下突出優(yōu)點和效果：（1)本發(fā)明是專用于雛禽 易感染的沙門氏菌、大腸桿菌等腸道病原防控，促進腸道菌群發(fā)育，促進雛禽免疫系統(tǒng)發(fā)育 的高效、復合微生態(tài)制劑；（2)所用多粘芽孢桿菌BPZ-1生長過程中對沙門氏菌和大腸桿菌 的抑菌活性強，所用干酪乳桿菌LCZ-1除具有較強的抑菌活性外，也具備乳酸菌固有的益 生、調(diào)控腸道菌群作用，這使得制備的復合微生態(tài)制劑可有效替代雛禽養(yǎng)殖過程中用于疾 病控制的抗生素或其它化學藥物；（3)相較現(xiàn)有大多數(shù)用于雛禽的微生態(tài)制劑，本發(fā)明所 述的的復合微生態(tài)制劑以雛禽常見疾病防控為首要目標，針對性強，病原防控效果顯著，其 益生、促生長作用也較明顯，在禽類養(yǎng)殖過程中有著廣泛、長期的適用性。
【具體實施方式】
[0013] 通過以下實施例對本發(fā)明作更詳細說明，但以下實施例僅是說明性的，本發(fā)明并不受 這些實施例的限制?；诒景l(fā)明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動 前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。
[0014] 實施例1 :多粘芽孢桿菌BPZ-1及其培養(yǎng)液對沙門氏菌和大腸桿菌的作用 配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基及其固體培養(yǎng)基，備用，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的成分如下： 每升培養(yǎng)基中含牛肉浸膏5.0g，蛋白胨10.0g，氯化鈉5.0g，pH值7. 2-7.4,121°C滅 菌30min，其固體培養(yǎng)基加入1.5%的瓊脂粉。用牛肉膏蛋白胨斜面活化多粘芽孢桿菌 BPZ_1，CGMCC保藏號：11255,隨后接種于100 mL的牛肉膏蛋白 胨培養(yǎng)基中，在30°C，培養(yǎng)24 h后備用。將活化后的沙門氏菌和大腸桿菌分別用無菌水混 勻后涂布于牛肉膏蛋白胨固體平板，用鑷子將3只無菌的牛津杯分別均勻放入培養(yǎng)皿中， 分別吸取〇. 2 ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、多粘芽孢桿菌BPZ-1培養(yǎng)液和過濾去除菌體的多 粘芽孢桿菌BPZ-1培養(yǎng)液，置于牛津杯中，在30 °C條件下培養(yǎng)12 h，觀察抑菌圈，結果發(fā)現(xiàn) 牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基對沙門氏菌和大腸桿菌沒有抑菌效果，多粘芽孢桿菌BPZ-1培養(yǎng) 液在沙門氏菌平板和大腸桿菌平板上分別形成直徑4. 6 cm、4. 8 cm的抑菌圈，過濾去除菌 體的多粘芽孢桿菌BPZ-1培養(yǎng)液在沙門氏菌平板和大腸桿菌平板上分別形成直徑3. 3 cm、 3. 7 cm的抑菌圈。結果表明多粘芽孢桿菌BPZ-1及其培養(yǎng)液對沙門氏菌和大腸桿菌均有較 好的抑制效果。
[0015] 實施例2 :干酪乳桿菌LCZ-1及其培養(yǎng)液對沙門氏菌和大腸桿菌的作用 配制MRS瓊脂和MRS肉湯培養(yǎng)基，備用，MRS瓊脂培養(yǎng)基的成分如下：蛋白胨10g，牛肉 膏10g，酵母膏5g，葡萄糖20g，吐溫80ml，K2HP04 2g，乙酸鈉5g，梓檬酸二銨2g， MgS047H20 0. 2g，MnS044H20 0. 05g，瓊脂粉15g，加蒸餾水至1L，用高壓滅菌鍋在121°C 滅菌15min，調(diào)節(jié)pH值6. 2-6.4。MRS肉湯培養(yǎng)基成分為MRS瓊脂培養(yǎng)基去掉瓊脂粉。用 MRS斜面活化干酪乳桿菌（ZacioAaciWMcasei)LCZ-l，CGMCC保藏號：11256,隨后接種于 100ml的MRS肉湯培養(yǎng)基中，在30°C，培養(yǎng)24小時后備用。配制牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基： 牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl5g，加水至1L，調(diào)pH值7. 2-7. 4,用高壓滅菌鍋在121°C 滅菌20min，倒固體平板。將活化后的沙門氏菌和大腸桿菌分別用無菌水混勻后涂布于牛 肉膏蛋白胨固體平板，用鑷子將3只無菌的牛津杯分別均勻放入培養(yǎng)皿中，分別吸取0. 2ml MRS肉湯培養(yǎng)基、干酪乳桿菌LCZ-1培養(yǎng)液和過濾去除菌體的干酪乳桿菌LCZ-1培養(yǎng)液，置 于牛津杯中，在30°C條件下培養(yǎng)12h，觀察抑菌圈，結果發(fā)現(xiàn)MRS肉湯對沙門氏菌和大腸桿 菌沒有抑菌效果，干酪乳桿菌LCZ-1培養(yǎng)液在沙門氏菌平板和大腸桿菌平板上分別形成直 徑4. 1cm、4. 4cm的抑菌圈，過濾去除菌體的干酪乳桿菌LCZ-1培養(yǎng)液在沙門氏菌平板和 大腸桿菌平板上分別形成直徑2.1cm、2. 2cm的抑菌圈。結果表明干酪乳桿菌LCZ-1及其 培養(yǎng)液對沙門氏菌和大腸桿菌均有較好的抑制效果。
[0016] 隨后對過濾去除菌體的干酪乳桿菌LCZ-1培養(yǎng)液分別于60 °C、80 °C、100 °C加 熱處理15min，用牛津杯法檢測干酪乳桿菌LCZ-1無菌培養(yǎng)液對沙門氏菌和大腸桿菌的抑 菌效果。結果表明，在30 °C條件下培養(yǎng)12h后，三種處理條件下在沙門氏菌平板和大腸桿 菌平板上形成抑菌圈直徑分別為3.2〇11、3.1〇]1、1.5〇]1和2.3〇]1、2.1〇]1、1.1〇]1，說明干 酪乳桿菌LCZ-1無菌培養(yǎng)液中的抑菌活性物質(zhì)具有較好的熱穩(wěn)定性。
[0017] 實施例3 :多粘芽孢桿菌菌劑的制備 (1) 各級培養(yǎng)基的配置，其中： 斜面培養(yǎng)基：為牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基，備用； 搖瓶菌種培養(yǎng)基和種子罐發(fā)酵培養(yǎng)基：為牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基，備用； 批量生產(chǎn)培養(yǎng)基：玉米芯粉45%，麩皮40%，礱糠：10%，葡萄糖3%，酵母膏2%，按 料水比1 :〇. 8加入水分； (2) 搖瓶菌種擴增：將用斜面培養(yǎng)基活化的多粘芽孢桿菌BPZ-1，在無菌操作下，接入 100mL的搖瓶培養(yǎng)基中，在30°C，160rpm/min的搖床中，培養(yǎng)24h后備用； (3) 種子罐發(fā)酵：將步驟（1)種子罐發(fā)酵培養(yǎng)基放入種子罐中，在種子罐內(nèi)進行蒸汽高 溫滅菌并冷卻后，按接種量8%接入步驟（2)的搖瓶菌種；開動攪拌機在轉(zhuǎn)速180rpm/min， 溫度30°C，通氣量4m3/h，罐壓0. 1MPa，自然pH的條件下培養(yǎng)24h后備用； (4) 批量產(chǎn)品的制備：將步驟（1)固體培養(yǎng)基滅菌并冷卻，按制備菌劑重量的3%的比 例稱取步驟（3)種子罐液體菌種，按菌種與水1 :5的比例放入無菌水中，再接入固體培養(yǎng)基 中并混勻；移入培養(yǎng)室，料厚3. 5cm，室溫控制在30°C，培養(yǎng)72h后在低于60 °C的條件下 烘干、粉碎、裝袋，備用，所獲多粘芽孢桿菌BPZ-1制劑活菌數(shù)量不低于40億CFU。
[0018] 實施例4 :干酪乳桿菌菌劑的制備 (1) 各級培養(yǎng)基的配置，其中： 斜