一類倍半萜類抗?jié)兯幬铮苽浞椒坝脠D
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及倍半祗衍生物類抗胃癌藥物的合成方法、結(jié)構(gòu)鑒定及其H7IT-ATP酶 抑制活性，可作為抑酸藥物用于治療胃潰瘍和十二指腸潰瘍等相關(guān)疾病。
【背景技術(shù)】
[0002] 胃潰瘍是一種常見病、多發(fā)病、呈世界性分布，我國(guó)的發(fā)病率約占人口的10%W 上。目前認(rèn)為粘膜攻擊性因素與防御性因素失衡是消化性潰瘍的發(fā)病基礎(chǔ)，胃酸已被確認(rèn) 為消化性潰瘍的最主要致病因素之一。減少胃酸分泌已成為最常用的促進(jìn)潰瘍愈合的手段 于皆平.胃部疾病的診斷和治療[M].北京：人民衛(wèi)生出版社.2004, 14-35.。
[0003] 胃壁細(xì)胞的主要功能是分泌肥1使胃腔酸化，它是通過壁細(xì)胞頂部分泌小管膜 上的質(zhì)子累（即H7IT-ATP酶）的質(zhì)子轉(zhuǎn)運(yùn)而實(shí)現(xiàn)的。H7IT-ATP酶定位于胃粘膜壁細(xì) 胞（parietallell)上，屬于第二類質(zhì)子累，它通過自身的憐酸化（E1 -E2)與去憐酸化 脫一E1)完成的H7IT電中性跨膜離子轉(zhuǎn)運(yùn)，不斷將壁細(xì)胞內(nèi)的質(zhì)子運(yùn)輸?shù)侥ね庑惺姑谒?的功能，因此抑制H7IT-ATP酶，可發(fā)揮強(qiáng)大的抑制胃液分泌作用。H7IT-ATP酶是設(shè)及胃酸 分泌的一種重要的蛋白酶，也是調(diào)控胃酸分泌環(huán)節(jié)中的關(guān)鍵步驟和最后環(huán)節(jié)。由于質(zhì)子累 抑制劑是抑制胃酸分泌的最后步驟，因此它也是最強(qiáng)的抑酸藥。從1988年第一個(gè)質(zhì)子累抑 制劑"奧美拉挫"上市W來，質(zhì)子累抑制劑已成為治療胃酸分泌相關(guān)疾病的主要藥物，質(zhì) 子累抑制劑+阿莫西林+克拉霉素"的"Ξ聯(lián)療法"已成為中國(guó)消化性潰瘍病治療的常規(guī)療 法。W奧美拉挫為代表的質(zhì)子累抑制劑能特異性地作用于胃粘膜壁細(xì)胞，降低壁細(xì)胞中質(zhì) 子累（H7IT-ATP酶）的活性，從而顯著抑制因各種刺激導(dǎo)致的胃酸分泌，緩解并治療消化性 潰瘍。
[0004] 在胃潰瘍的西醫(yī)治療中，采用化學(xué)藥物的治愈率高，但停藥后復(fù)發(fā)率也較高，往往 潰瘍愈合越快，停藥后復(fù)發(fā)率越高。西米替下正規(guī)治療療程結(jié)束后，潰瘍于半年內(nèi)復(fù)發(fā)率達(dá) 30-50%，有報(bào)道甚至高60~90%。臨床常用的抗?jié)兯幬锶缃M胺受體掉抗劑，H7K+-ATP 酶抑制劑，雖然療效好，但因不良反應(yīng)嚴(yán)重而停止治療的病例也常有發(fā)生。而中藥治療不 僅控制癥狀較理想，藥后病情較易穩(wěn)定，而且復(fù)發(fā)率較化，后遺癥較少。鄧天魁，汪一平， 李春等.消化性潑瘍的藥物治療進(jìn)展[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào).2005, 24巧）：513.。同類研究表明， 一些天然來源的聰類化合物也對(duì)胃粘膜細(xì)胞具有較好的保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能與分子 中的α，β-不飽和鑛基有關(guān)。例如，從植物FabianaimbricataR.中分離的蘭聰類化合 物oleanolicacid【Tundis,民.；Loizzo，M.民.；Bonesi，M. ;Menichini,F. ;Conforti，F(xiàn).; Statti,G. ;Menichini,F.Naturalproductsasgastroprotectiveandantiulcer agents:recentdevelopments[J].Natu.Prod.Commun. 2008, 3, 2129-2144.】，從Araucaria araucana.中分離的二聰類化合物Imbricatolicacid和 15-Hydroxyimbricatolal，從 ArtemisiadouglasianaBesser中得到的內(nèi)醋型倍半聰Dehydroleucodine【Favier，L S. ;Maria,A. 0.M. ;Wendel,G.H. ;Borkowski，E.J. ;Giordano, 0.S. ;Pelzer,L.; Tonn,C.E.Anti-ulcerogenicactivityofxanthanolidesesquiterpenesfrom Xanthiumcavanillesiiinrats[J].J.Ethnopharm. 2005, 100, 260-267.】、從Xanthium cavanillesiiSchouw中分離得到的黃原膠內(nèi)醋型倍半祗Xanthatin【化nissi,A.B.; Vera,Μ.E. ;Mariani,Μ.L. ；Rudolph,M.I. ；Cenal,J.P. ；Rosas,J.C. ；Fogal,T.H. ；Tonn,C. E. ;Favier,L.S. ；Giordano, 0.S. ；Piezzi,R.S.Novelanti-ulcera,β-unsaturated lactonesinhibitcompound48/8〇-inducedmastcelldegranulation[J].Eur. J.化arm. 2009, 612, 122-130.】等都對(duì)腸胃粘膜細(xì)胞都具有較好的保護(hù)作用。
[0005] 紫金砂為傘形科當(dāng)歸屬植物拐芹（Angelicapolymo巧haMaxim.)的根。民間應(yīng)用 療效確切，在我省應(yīng)用范圍較廣，已被《湖北省中藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》(2009年版）收錄為正式品 種，但是國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)其藥理活性和所含有化學(xué)成分僅進(jìn)行了初步研究，所獲得科學(xué)資料 較少，不足W支撐紫金砂藥用資源的開發(fā)利用和保護(hù)。本實(shí)驗(yàn)室前期研究表明，紫金砂乙酸 乙醋部位具有較強(qiáng)的抗胃潰瘍作用【蔡正軍，但飛君，程凡，汪塞植，鄒坤.白根獨(dú)活抗菌 有效部位的化學(xué)成分研究.中藥材.2008, 31，1160-1162.】，而從乙酸乙醋部位分離得到的 倍半祗類化合物沒藥燒吉酬具有很強(qiáng)的抗阿司匹林-乙醇所致的胃潰瘍作用【但飛君，蔡 正軍，朱烈彬，汪塞植等.中藥白根獨(dú)活抗胃潰瘍有效部位研究[J].Ξ峽大學(xué)學(xué)報(bào)（自然 科學(xué)版）.2008,30(3) :92.Wang，J. ;ZhuL. ;ZouK.;Chen評(píng).；DanF. ;GuoZ. ;CaiZ. ;YangJ. Theanti-ulceractivitiesofbisabolangelonefromAngelicapolymorpha[J].J.Eth no地arma. 2009, 123, ；343-；346.】。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本專利m十算化學(xué)為指導(dǎo)【國(guó)冬.抑制胃酸分泌藥物的設(shè)計(jì)和化/K+-ATP酶Ξ維 結(jié)構(gòu)的模建巧].沈陽(yáng)藥科大學(xué)博±學(xué)位論文2004年】，根據(jù)沒藥燒吉酬與Η7ΙΤ-ΑΤΡ酶的 作用特點(diǎn)對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，制備并分離了系列沒藥燒吉酬衍生物，通過體外藥理實(shí)驗(yàn)測(cè) 定產(chǎn)物的Η7ΙΤ-ΑΤΡ酶抑制活性，利用計(jì)算化學(xué)手段研究了活性化合物的抗?jié)冏饔脵C(jī)制， 為研發(fā)新型高效低毒的抗胃潰瘍藥物奠定基礎(chǔ)，為紫金砂的倍半祗活性成分的開發(fā)研究提 供依據(jù)，并為抑酸藥物的開發(fā)提供了新型參考藥物。
[0007] 1沒藥燒吉酬的快速提取與分離純化
[0008] 將拐芹干燥根莖20kg用大粉碎機(jī)粉碎，得到的藥渣用滲漉提取罐提?。ㄌ崛∫海?無(wú)水乙醇50以提取溫度：70°C，提取次數(shù)：Ξ次，每次提取時(shí)間：2小時(shí)），合并提取液，減壓 濃縮得到浸膏，經(jīng)快速柱層析分離（色譜柱直徑20畑1，吸附劑：硅膠200~300目2. 0kg，浸 膏上樣量：500g，洗脫劑：乙酸乙醋/石油酸=1:1)，得到的流分合并，濃縮得到粗產(chǎn)品。將 粗產(chǎn)品用乙酸乙醋重結(jié)晶，得到?jīng)]藥燒吉酬72. 2g，狀態(tài)為白色固體，提取率0.361%。
[0009] 2沒藥燒吉酬衍生物的制備
[0010] 2.1儀器及藥品
[0011] 實(shí)驗(yàn)儀器
[0012]
[0015]
[0016] 2. 2合成部分
[0017] 在50mlΞ頸瓶中，將沒藥燒吉酬（1. 00g，4.Ommol)于l〇-15°C溶于30ml絕對(duì)無(wú)水 甲醇中，加入Pd/"0. 10g，10%w/w)。先通入高純氮?dú)馀抛呃锩婵諝?，然后于劇烈攬拌條件 下通入99%氨氣，TLC監(jiān)測(cè)直至沒藥燒吉酬點(diǎn)消失。抽濾除去Pd/C，負(fù)壓條件下濃縮濾液 得混合物，經(jīng)柱層析石油酸：乙酸乙醋（l〇:l，V/V)至石油酸：乙酸乙醋巧：1，V/V)變梯度 洗脫，依次得到：B01 (白色固體，0.45g)、B53(白色固體，0.05g)、B02(白色固體，0. 15g)和 B15(白色固體，0. 30g)。
[0018]
[001引在50ml圓底瓶中，將化合物化253g，ImmoU和；水乙酸鋼（0. 163g，1. 2mm0U溶 于（20ml)無(wú)水乙醇中，向瓶里滴加蒸饋水至無(wú)固體顆粒，分批加入化084g，1. 2mmol)鹽酸 徑錠，攬拌直至TLC監(jiān)測(cè)無(wú)原料。將反應(yīng)液倒入50ml冰水中，攬拌析出白色固體，抽濾得B14(白色固體，0. 254g)。參照化合物B14合成方法，同理合成出化合物B20及B68。合成 路線如下：
[0020]
[0021] 在50mlS口瓶中，將B14(0. 268g，1.0mmol)溶于20ml二氯甲燒中，加入Ξ乙胺 (0. 202g，2.Ommol)，再在冰水?。?~5°C)下緩慢滴加乙酷氯化157g，2.Ommol)，冰水浴 中反應(yīng)化，再在25°C下反應(yīng)12h，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程。反應(yīng)完畢，減壓旋轉(zhuǎn)蒸出溶劑，粗品經(jīng) 硅膠柱層析分離石油酸：乙酸乙醋（4 :1，V/V)洗脫得B3U無(wú)色油，0. 163g)。參照化合物 B31合成方法，同理合成出化合物B62、B84、B85及B86。合成路線如下：
[0022]
[002引在50ml圓底瓶中，將B14(0. 268g，1.0mm0u溶于無(wú)水乙臘（20血）中，加入碳酸鐘 (0. 138g，1.Ommol)，在冰水?。?~5°C)下緩慢滴加氯乙酸乙醋（1.Ommol)，在60°C油浴 中攬拌反應(yīng)地，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程，反應(yīng)完畢，冷卻，過濾除去碳酸鐘固體，減壓旋轉(zhuǎn)蒸出溶 劑，粗品經(jīng)硅膠柱層析分離石油酸：乙酸乙醋（4 :1，V/V)洗脫得B33。參照化合物B33的 合成方法，同理合成得到B30、B34及B63。合成路線如下：
[0024]
[00巧]在50ml圓底瓶中加入B14(0. 268g，1.Ommol)，加入二氯甲燒20ml加熱至溶解， 室溫下緩慢滴加苯異氯酸醋化131g，l.Immol)，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程。反應(yīng)完畢，減壓旋轉(zhuǎn) 蒸出溶劑，粗品經(jīng)硅膠柱層析分離石油酸：乙酸乙醋（4:1，V/V)洗脫得B35(白色固體， 0. 317g)。參照化合物B35合成方法，同理合成出化合物B61。合成路線如下：
[0026]
[0027] 2. 3結(jié)構(gòu)表征
[0028] (3R, 3aR,6R, 7aS, Z)-3-hydroxy-3, 6-dimethyl-2-(3-methyl butylidene)hexahydrobenzofu ran-4 (2H)-one(BO 1) :white solids；Yield 45 94-95 °C;MS化SI)m/z:275.16 (M+Nar;IR:Vmax/cmi(K Br) 3393, 2959, 1688, 1455, 1408, 1382, 1359, 1271, 11 34, 1111, 1019, 950；'H NMR(CDCl3,400MHz) 5:4.69-4.56(m，lH，CH)，4.47(t，J = 14.8Hz，lH, = CH)，2.71(d，J =8. OHz, IH, CH)，2. 44-2. 39 (m, IH, CH)，2. 17-2. 09 (m, 2H, 2 X CH)，1. 99化rs, IH, OH)， l. 95(t，J = 7. 2Hz，2H，CH2)，1.82-1.56(m，3H，3XCH)，1.51(s，3H，CH3)，1.05(d，J = 6. OHz, 3H, C冊(cè)），0. 89(d, J =6. 4Hz,6H,2XCH3) ;1化NMR(CDCl3, lOOMHz) δ :209. 5, 159. 9, 9 5. 3, 79. 1，78. 1，58. 4, 49. 5, 37. 4, 33. 7, 28. 7, 26. 5, 26. 1，22. 3, 22. 2, 21.