泰瑞米特鈉在制備治療自身免疫病藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種具有低肝臟毒性的來(lái)氟米特活性代謝物鈉鹽一泰瑞米特鈉在制 備治療自身免疫病藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 來(lái)氟米特(leflunomide,LEF)是一種小分子免疫抑制劑,該產(chǎn)品于1999年獲得國(guó) 家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)上市,適應(yīng)癥為成人類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。來(lái)氟米特的療效穩(wěn)定,但是 該藥的起效時(shí)間相對(duì)較慢,個(gè)體差異性較大;在臨床應(yīng)用過(guò)程中,特別是與甲氨蝶呤聯(lián)合使 用時(shí),胃腸道反應(yīng)、肝功能異常、脫發(fā)等藥物不良反應(yīng)較為常見(jiàn)。其中,肝臟毒性是制約來(lái)氟 米特臨床應(yīng)用最重要的原因。
[0003] 泰瑞米特(Teriflunomide,TER)是Sanofi-Aventis公司研制的產(chǎn)品。該產(chǎn)品于 2012年獲FDA批準(zhǔn)上市。泰瑞米特鈉是來(lái)氟米特(Leflunomide)的有效活性成分,其藥理作 用包括:抑制嘧啶的從頭合成途徑;抑制酪氨酸激酶的活性,阻斷細(xì)胞炎癥信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程; 抑制NF-κB的活化及所調(diào)控基因的表達(dá),如IL-1、TNF-α的表達(dá);抑制淋巴細(xì)胞增殖及抗 體產(chǎn)生;抑制細(xì)胞黏附分子的表達(dá)及外周血單核細(xì)胞的跨內(nèi)皮游走;抑制樹(shù)突細(xì)胞(DC)的 功能;抑制病毒復(fù)制等。目前泰瑞米特于2012年獲FDA批準(zhǔn)上市,臨床適應(yīng)癥為多發(fā)性硬 化癥,尚沒(méi)有泰瑞米特鈉用于治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡等自身免疫病的報(bào)道。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種泰瑞米特鈉的新用途。
[0005] 本發(fā)明的第一方面,提供一種泰瑞米特鈉的應(yīng)用,用于制備預(yù)防和/或治療自身 免疫病的藥物。
[0006] 在另一優(yōu)選例中,所述自身免疫疾病為系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病 關(guān)節(jié)炎或多發(fā)性硬化癥。
[0007] 在另一優(yōu)選例中,所述自身免疫疾病為系統(tǒng)性紅斑狼瘡。
[0008] 在另一優(yōu)選例中,所述泰瑞米特鈉或所述藥物通過(guò)口服或非經(jīng)腸道給予對(duì)象。
[0009] 在另一優(yōu)選例中,所述泰瑞米特鈉或所述藥物給予對(duì)象1-3次/天,10-100mg/天。 [0010] 在另一優(yōu)選例中,所述藥物的制劑形式為片劑、膠囊、丸劑、錠劑、顆粒劑、微顆粒 劑、懸浮液、粉末、糖錠、酏劑、注射劑、液劑、油膏劑、栓劑或貼膏劑。
[0011] 在另一優(yōu)選例中,所述藥物的制劑形式為片劑、膠囊、丸劑、錠劑、懸浮液、粉末、糖 錠或酏劑。
[0012] 在另一優(yōu)選例中,所述泰瑞米特鈉的給藥劑量在不超過(guò)200mg/d的情況下,在人 體不會(huì)產(chǎn)生肝臟毒性或僅產(chǎn)生較低的肝臟毒性,所述產(chǎn)生較低的肝臟毒性是指肝轉(zhuǎn)氨酶 (ALT和/或AST)升高不超過(guò)正常值上限的1. 5倍。
[0013]藥物的肝臟毒性是指藥物作用于肝臟細(xì)胞,若引起肝臟細(xì)胞損傷,臨床可以觀察 到肝功能異常一轉(zhuǎn)氨酶升高超過(guò)正常值上限。較低的肝臟毒性是指ALT和/或AST升高不 超過(guò)正常值上限的1. 5倍;低肝毒性(輕度肝功能異常):ALT和/或AST升高不超過(guò)正常 值上限2倍;中度肝毒性(中度肝功能異常):ALT和/或AST升高不超過(guò)正常值上限2-3 倍;高度肝毒性(重度肝功能異常):ALT和/或AST升高不超過(guò)正常值上限3倍。
[0014] 本發(fā)明的第二方面,提供一種藥物組合物的用途,所述藥物組合物包含泰瑞米特 鈉和藥學(xué)上可接受的載體,用于預(yù)防和/或治療自身免疫病的藥物。
[0015] 在另一優(yōu)選例中,所述自身免疫疾病為系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病 關(guān)節(jié)炎或多發(fā)性硬化癥。
[0016] 在另一優(yōu)選例中,所述藥物組合物通過(guò)口服或非經(jīng)腸道給予對(duì)象;和/或
[0017] 所述藥物組合物給予對(duì)象1-3次/天,10-100mg泰瑞米特鈉/天。
[0018] 在另一優(yōu)選例中,所述藥物組合物的制劑形式為片劑、膠囊、丸劑、錠劑、顆粒劑、 微顆粒劑、懸浮液、粉末、糖錠、酏劑、注射劑、液劑、油膏劑、栓劑或貼膏劑。
[0019] 在另一優(yōu)選例中,所述藥物組合物的制劑形式為片劑、膠囊、丸劑、錠劑、懸浮液、 粉末、糖錠或酏劑。
[0020] 泰瑞米特鈉對(duì)人原代肝細(xì)胞活性沒(méi)有抑制作用,對(duì)人原代肝細(xì)胞線粒體的損傷作 用低于來(lái)氟米特;與來(lái)氟米特和泰瑞米特相比,泰瑞米特鈉在藥物濃度>300μΜ時(shí)導(dǎo)致的 LDH釋放不會(huì)隨著藥物濃度的增加而增加。相同劑量泰瑞米特鈉在哺乳動(dòng)物體內(nèi)導(dǎo)致肝轉(zhuǎn) 氨酶升高的風(fēng)險(xiǎn)亦低于來(lái)氟米特。因此,泰瑞米特鈉在人體內(nèi)的應(yīng)用劑量范圍高于來(lái)氟米 特,與來(lái)氟米特相比,泰瑞米特鈉的起效劑量低,耐受劑量更高。根據(jù)體外研究結(jié)果推測(cè),泰 瑞米特鈉在人體不產(chǎn)生肝臟毒性或低肝臟毒性的最大劑量約為200mg/d,而來(lái)氟米特目前 臨床報(bào)道的人體最大耐受劑量為40-60mg/d。
[0021] 泰瑞米特鈉為水溶性物質(zhì),比來(lái)氟米特吸收更快,與相同劑量的來(lái)氟米特相比,生 物利用度高,其體內(nèi)暴露量大,因此服用較少劑量泰瑞米特鈉就能達(dá)到來(lái)氟米特相同的治 療效果;此外,泰瑞米特鈉為活性成分,無(wú)需肝腸的代謝而直接被吸收利用,個(gè)體差異小,避 免了首過(guò)效應(yīng)和體內(nèi)代謝過(guò)程。
[0022] 應(yīng)理解,在本發(fā)明范圍內(nèi)中,本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文(如實(shí)施例)中具 體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合,從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅,在 此不再一一累述。
【附圖說(shuō)明】
[0023] 圖1為人肝細(xì)胞毒性(MTT實(shí)驗(yàn))結(jié)果圖,其中,胺碘酮IC5。= 7. 837μM,來(lái)氟米 特IC5。= 769. 6μΜ,泰瑞米特IC5。=ΝΑ,泰瑞米特鈉IC5。=ΝΑ,"ΝΑ"表示無(wú)法計(jì)算。
[0024] 圖2為人肝細(xì)胞線粒體損傷檢測(cè)結(jié)果圖。
[0025] 圖3為人肝細(xì)胞LDH釋放檢測(cè)結(jié)果圖。
[0026] 圖4為泰瑞米特鈉口服干預(yù)治療對(duì)MRL/lpr小鼠體重的影響作用圖,10-11周齡雌 性MRL/lpr小鼠,口服治療8周,觀察小鼠體重變化情況,每周稱(chēng)重一次。各組小鼠給藥過(guò) 程體重變化情況比較。
[0027] *,Ρ〈0· 05 ;**,Ρ〈0· 01 ;***,Ρ〈0· 005,與空白對(duì)照組比較。
[0028] 圖5為泰瑞米特鈉口服給藥能顯著地降低MRL/lpr小鼠蛋白尿水平結(jié)果圖,其中 (A)為各組小鼠治療過(guò)程蛋白尿水平變化;(B)為治療過(guò)程中泰瑞米特鈉三個(gè)劑量組與模 型對(duì)照組蛋白尿水平變化;(C)為泰瑞米特鈉30mg/kg劑量組與來(lái)氟米特30mg/kg劑量組 終點(diǎn)蛋白尿檢測(cè);(D)為治療第4、8周各組嚴(yán)重蛋白尿癥小鼠比例。
[0029] *,Ρ〈0· 05 ;**,Ρ〈0· 01 ;***,Ρ〈0· 001,與空白對(duì)照組比較。
[0030] 圖6為泰瑞米特鈉口服給藥減輕MRL/lpr小鼠皮膚損傷結(jié)果圖,給藥8周,各組小 鼠皮膚損傷情況評(píng)分。**,P〈〇. 01,與空白對(duì)照組比較。
[0031] 圖7為泰瑞米特鈉口服給藥緩解MRL/lpr小鼠淋巴器官腫大結(jié)果圖,其中A為各 組小鼠淋巴結(jié)腫大評(píng)分,B為淋巴結(jié)稱(chēng)重,C為各組小鼠脾臟重量,D為各組小鼠外周淋巴結(jié) 拍照。
[0032] *,Ρ〈0· 05 ;**,Ρ〈0· 01 ;***,Ρ〈0· 001,與空白對(duì)照組比較。
[0033] 圖8為泰瑞米特鈉口服給藥降低MRL/lpr小鼠血清中抗dsDNA抗體和IL-17水平 結(jié)果圖。*,Ρ〈0·05 ;**,Ρ〈0·01 ;***,Ρ〈0·001,與空白對(duì)照組比較。
[0034] 圖9為泰瑞米特鈉對(duì)ConA誘導(dǎo)的細(xì)胞因子生成的影響結(jié)果圖。泰瑞米特鈉對(duì)ConA 誘導(dǎo)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞分泌IFN-γ(A),IL-17(C),IL-6(E)的抑制作用;來(lái)氟米特對(duì)ConA 誘導(dǎo)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞分泌IFN-γ(B),IL-17(D),IL-6(F)的抑制作用,試驗(yàn)結(jié)果以均值 土標(biāo)準(zhǔn)差表示。*,P〈〇. 05 ;#,P〈0. 01 ;*#,P〈0. 001,與刺激對(duì)照相比較。
[0035] 圖10為泰瑞米特鈉抑制PBMC混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)結(jié)果圖。MLR反應(yīng)5天。刺激細(xì) 胞(Stimulatorcell):經(jīng)過(guò)γ射線照射異源的人PBMC,本試驗(yàn)將三位正常人PBMC細(xì)胞按 照1 :1 :1比例混合,經(jīng)Y射線照射后,作為刺激細(xì)胞;反應(yīng)細(xì)胞(RespondingCell):正常 人PBMC。(A)、(C)、(E)泰瑞米特鈉抑制混合淋巴細(xì)胞反應(yīng);(B)、(D)、(F)來(lái)氟米特抑制混 合淋巴細(xì)胞反應(yīng)。試驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差表示。*,P〈〇. 05 ;**,P〈0. 01 ;***,P〈0. 001, 與刺激對(duì)照組比較。
[0036] 圖11為泰瑞米特鈉、來(lái)氟米特抑制植物血凝素(PHA)誘導(dǎo)PBMC增殖結(jié)果圖。(A)、 (C)、(E)泰瑞米特鈉抑制PHA誘導(dǎo)的PBMC增殖;(B)、(D)、(F)來(lái)氟米特抑制PHA誘導(dǎo)的 PBMC增殖。試驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差表示。*,P〈0. 05 ;#,P〈0. 01 ;*#,P〈0. 001,與刺激 對(duì)照組比較。
[0037] 圖12為泰瑞米特鈉、來(lái)氟米特抑制PHA(植物血凝素)誘導(dǎo)PBMC分泌IFN-γ結(jié) 果圖。(A)、(C)、(E)泰瑞米特鈉抑制PHA誘導(dǎo)PBMC分泌IFN-γ,(B)、(D)、(F)來(lái)氟米特 抑制PHA誘導(dǎo)PBMC分泌IFN-γ。試驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差表示。*,P〈0. 05 ;#,P〈0. 01 ; ***,Ρ〈0· 001,與刺激對(duì)照組比較。
【具體實(shí)施方式】
[0038] 本申請(qǐng)的發(fā)明人經(jīng)過(guò)廣泛而深入地研究,首次意外發(fā)現(xiàn)泰瑞米特鈉的新應(yīng)用,用 于制備預(yù)防和/或治療自身免疫病的藥物,通過(guò)口服或非經(jīng)腸道給予對(duì)象,用于自身免疫 病治療的劑量最高為l〇〇mg/天。與來(lái)氟米特相比,泰瑞米特鈉的起效劑量低,耐受劑量更 高,泰瑞米特鈉在人體不產(chǎn)生肝臟毒性或低肝臟毒性的最大劑量約為200mg/d。在此基礎(chǔ) 上,完成了本發(fā)明。
[0039] 泰瑞米特鈉
[0040] 泰瑞米特鈉是來(lái)氟米特體內(nèi)活性代謝物泰瑞米特的鈉鹽。本試驗(yàn)所使用的泰瑞 米特鈉樣品通過(guò)來(lái)氟米特水解開(kāi)環(huán)、酸化,成鹽制得泰瑞米特鈉粗品,在經(jīng)精制得到純度 彡99. 5 %的泰瑞米特鈉純品。
[0041]泰瑞米特鈉的化學(xué)反應(yīng)路線如下:
[0042]
[0044] 實(shí)驗(yàn)表明,泰瑞米特鈉與來(lái)氟米特或泰瑞米特相比具有最小肝臟毒性,具體表現(xiàn) 為:泰瑞米特鈉對(duì)人原代肝細(xì)胞活性沒(méi)有抑制作用,對(duì)人原代肝細(xì)胞線粒體的損傷作用低 于來(lái)氟米特;與來(lái)氟米特和泰瑞米特相比,泰瑞米特鈉在藥物濃度>300μΜ時(shí)導(dǎo)致的LDH釋 放不會(huì)隨著藥物濃度的增