一種藥用組合物的新用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明公開中藥復(fù)方苦參注射液(商標(biāo)名：巖舒）的一種新用途。所述的新用途是 在制備治療結(jié)直腸癌，特別涉及晚期結(jié)直腸癌疾病藥物的新用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 結(jié)腸癌和直腸癌的總稱為大腸癌，即所謂的結(jié)直腸癌，是指大腸粘膜上皮在環(huán)境 或遺傳等多種致癌因素作用下發(fā)生的惡性病變，即大腸粘膜上皮起源的惡性腫瘤，是最常 見的消化道惡性腫瘤之一，處于全球惡性腫瘤的第三位，且隨著生活水平的提高，飲食結(jié)構(gòu) 的變化，大腸癌的發(fā)病率在持續(xù)上升。手術(shù)治療是大腸癌治療的首選方法，5年生存率僅在 50%左右。目前西醫(yī)治療結(jié)直腸癌是以手術(shù)、放療、化療為首選。但直腸癌由于早期癥狀不 明顯，許多患者確診的時(shí)候多數(shù)已經(jīng)是中晚期患者了，進(jìn)行手術(shù)治療固然能切除癌腫，但還 有殘癌、或區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、或血管中癌栓存在，手術(shù)對(duì)于全身治療與機(jī)體防御反應(yīng)的提高 毫無作用。通過采用中藥治療配合放化療來控制晚期癥狀，可緩解癥狀、控制病情，且毒副 作用小。
[0003] 結(jié)直腸癌在中醫(yī)學(xué)中多屬"腸覃"、"腸癖"等范疇。其病因多為飲食不節(jié)，恣食肥 甘、燥熱或不潔之物，導(dǎo)致脾不健運(yùn)，濕熱蘊(yùn)毒下迫大腸，熱傷腸絡(luò)，毒邪成癰而逐漸發(fā)生癌 瘤。根據(jù)中醫(yī)理論，針對(duì)直腸癌的發(fā)病機(jī)理，宜清腸解毒、補(bǔ)益脾腎、清熱散結(jié)，進(jìn)行辯證配 伍組方，以達(dá)到標(biāo)本兼治的目的。
[0004] 復(fù)方苦參注射液是由苦參、白土苓在傳統(tǒng)中醫(yī)理論指導(dǎo)下，科學(xué)組方，在現(xiàn)代中藥 注射液技術(shù)指導(dǎo)下制備而成，具有清熱利濕，涼血解毒，散結(jié)止痛之功效。復(fù)方苦參注射液 是國(guó)家二級(jí)中藥保護(hù)品種，臨床上多年應(yīng)用于癌腫疼痛、出血。CN1062181C公開了復(fù)方苦參 注射液用于肺癌、肝癌、胃癌的治療及緩解癌性疼痛的作用；CN1876016A公開了復(fù)方苦參 注射液抗實(shí)體腫瘤、輔助化療藥增效減毒、鎮(zhèn)痛、止血、升白細(xì)胞、提高免疫力、抗肝炎等作 用。我們對(duì)該藥在結(jié)直腸癌方面的治療作用進(jìn)行了體內(nèi)外探索和臨床研究。結(jié)果表明：復(fù) 方苦參注射液對(duì)人結(jié)直腸癌細(xì)胞株SW480和HT29的生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，對(duì)L0V0細(xì) 胞體外增殖具有不同程度的抑制和殺傷作用，對(duì)人結(jié)直腸癌SW480移植瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的 具有明顯的抑制作用。臨床實(shí)驗(yàn)表明：?jiǎn)斡没蚺c化療藥物聯(lián)用治療直腸癌，復(fù)方苦參注射液 療效顯著，可延緩病情進(jìn)展，改善癥狀，且毒副作用較輕，病死率、生存期、中位生存期、疾病 進(jìn)展期、及生活質(zhì)量等指標(biāo)均有較明顯的改善。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明公開復(fù)方苦參注射液的一種新用途。
[0006] 本發(fā)明涉及的新用途是在制備治療結(jié)直腸癌，特別涉及晚期結(jié)直腸癌疾病藥物的 新用途。
[0007] 本發(fā)明所述的復(fù)方苦參注射液的原料藥組成為： 苦參1000~1500重量份白土苓400~800重量份。
[0008] 本發(fā)明所述的復(fù)方苦參注射液的原料藥優(yōu)選組成為： 苦參1400重量份白土苳600重量份。
[0009] 本發(fā)明所述的復(fù)方苦參注射液的制備方法包括如下步驟： 將二味原料藥粉碎成粗粉，混勻，置滲漉缸中，加相當(dāng)于藥量3~8倍的0. 5~3%醋酸 浸漬30~50小時(shí)，而后進(jìn)行滲漉，收集漉液，減壓75°C以下濃縮至適量，另器存放，藥渣加 3~8倍量注射用水，煎煮二次，每次0. 5~2小時(shí)，合并濾液，濃縮至適量，放冷，離心，上清 液與酸濃縮液合并，調(diào)整至800~1200體積份，加乙醇沉淀2次，先使溶液醇含量達(dá)50~ 70%，靜置過夜，離心，上清液減壓回收乙醇，濃縮至300~600體積份，再加乙醇使醇含量 達(dá)80~95%，同上處理，加注射用活性炭適量，加熱處理，濾過，用氫氧化鈉調(diào)pH值至6~ 8,放置過液，濾過，再調(diào)pH至9~11，同法處理，以醋酸調(diào)pH至4~6,同法處理，再以氫氧 化鈉調(diào)pH至7~9,加注射用水調(diào)至1000體積份，微孔薄膜抽濾，灌封，滅菌，即得。
[0010] 本發(fā)明所述的復(fù)方苦參注射液的制備方法優(yōu)選包括如下步驟： 將二味原料藥粉碎成粗粉，混勻，置滲漉缸中，加相當(dāng)于藥量5倍的1 %醋酸浸漬48小 時(shí)，而后進(jìn)行滲漉，收集漉液，減壓75°C以下濃縮至適量，另器存放，藥渣加5倍量注射用 水，煎煮二次，每次1小時(shí)，合并濾液，濃縮至適量，放冷，離心，上清液與酸濃縮液合并，調(diào) 整至1000體積份，加乙醇沉淀2次，先使溶液醇含量達(dá)65 %，靜置過夜，離心，上清液減壓回 收乙醇，濃縮至500體積份，再加乙醇使醇含量達(dá)90%，同上處理，加注射用活性炭適量，加 熱處理，濾過，用氫氧化鈉調(diào)pH值至7,放置過液，濾過，再調(diào)pH至11，同法處理，以醋酸調(diào) pH至5,同法處理，再以氫氧化鈉調(diào)pH至8,加注射用水調(diào)至1000體積份，微孔薄膜抽濾，灌 封，滅菌，即得。
[0011] 本發(fā)明所述的重量份與體積份的比例為克/_升。
[0012] 下述實(shí)驗(yàn)例和實(shí)施例用于進(jìn)一步說明但不限于本發(fā)明。
[0013] 藥效學(xué)實(shí)驗(yàn) 藥效學(xué)研究試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明藥物組合物對(duì)人結(jié)腸直腸癌細(xì)胞株SW480和HT29具 有明顯的抑制作用，對(duì)L0V0細(xì)胞的體外增殖具有不同程度的抑制和殺傷作用，對(duì)人結(jié)直腸 癌SW480移植瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)有明顯抑制作用。
[0014] 實(shí)驗(yàn)例1. 本發(fā)明藥物組合物對(duì)人結(jié)腸直腸癌細(xì)胞株SW480和HT29的影響研究 采用噻唑藍(lán)比色法（MTT法）測(cè)定本發(fā)明藥物組合物制劑（按實(shí)施例1方法制備）對(duì) 人結(jié)直腸癌細(xì)胞株SW480和HT29的生長(zhǎng)抑制作用，以培養(yǎng)液作為對(duì)照。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì) 胞，接種于96孔培養(yǎng)板，每孔加100微升細(xì)胞懸液（每孔5000個(gè)細(xì)胞）。藥物組梯度稀釋 為不同濃度后加入到培養(yǎng)板中，每孔加藥液100微升，每種濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔，輕輕混勻后將 培養(yǎng)板置于〇) 2培養(yǎng)箱中，在37°C、體積分?jǐn)?shù)為5%的C0 2條件下連續(xù)培養(yǎng)48h后，每孔加 10微升MTT溶液（5g/L，生理鹽水配制），繼續(xù)培養(yǎng)4h。測(cè)定前小心吸出培養(yǎng)液，每孔加 入DMS0150微升，緩慢振蕩，待結(jié)晶完全溶解后用酶標(biāo)儀于波長(zhǎng)570nm下測(cè)定0D值并計(jì) 算其抑制率。
[0015] 抑制率=(1-實(shí)驗(yàn)組0D值/對(duì)照組0D值）X 100 % 觀察藥物對(duì)人結(jié)腸直腸癌細(xì)胞株SW480和HCT-29的細(xì)胞毒作用 結(jié)果見表1 : 表1藥物對(duì)SW480和HT29細(xì)胞株的細(xì)胞毒作用（n= 3)
結(jié)果表明，本藥物在l〇〇mg/ml的劑量條件下對(duì)人結(jié)直腸癌細(xì)胞株SW480和HT29具有 明顯的抑制作用。
[0016] 實(shí)驗(yàn)例2 復(fù)方苦參注射液（按實(shí)施例1方法制備）對(duì)結(jié)腸癌LOVO細(xì)胞體外增殖的影響。
[0017] 用MTT比色法檢測(cè)不同濃度的復(fù)方苦參注射液作用后6h、24h、48h、72h、96h、 120hL0V0細(xì)胞的存活率，與空白對(duì)照細(xì)胞比較，計(jì)算細(xì)胞增殖的抑制率。
[0018] 結(jié)果顯示：不同濃度的復(fù)方苦參注射液對(duì)LOVO細(xì)胞的增殖具有不同程度的抑制 和殺傷作用，且呈現(xiàn)出明顯的劑量依賴關(guān)系。2mg/ml復(fù)方苦參注射液組有明顯的時(shí)間依賴 性，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞浮起、破碎、死亡等表現(xiàn)明顯增多；l、〇. 5、0. 25mg/ml復(fù)方苦參注 射液組作用從6h-72h，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用呈明顯增加態(tài)勢(shì)，但當(dāng)作用時(shí)間超過72h，對(duì) LOVO細(xì)胞增殖的抑制作用逐漸減弱。
[0019] 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)了不同濃度復(fù)方苦參注射液作用L0V0細(xì)胞后的凋亡率和細(xì)胞 周期分布情況。結(jié)果顯示當(dāng)藥物作用6h，各濃度復(fù)方苦參注射液與對(duì)照組比較均出現(xiàn)G1、 S期阻滯趨勢(shì)；lmg/ml、2mg/ml復(fù)方苦參注射液組作用24h，與對(duì)照組相比進(jìn)入G2/M期的細(xì) 胞增多；2、1、0. 5mg/ml加藥組作用48h進(jìn)入G2/M期的細(xì)胞較對(duì)照組均有增加。
[0020] 表2不同濃度、不同時(shí)間巖舒對(duì)結(jié)腸癌L0V0細(xì)胞作用后的增殖抑制率 (n=18, X土s)
注：與對(duì)照組相比，#P < 0. 01，*P < 0. 05 表3不同濃度巖舒對(duì)L0V0細(xì)胞周期分布的影響 (n=3, X土s)
注：與對(duì)照組相比，#P < 0. 01，*P < 0. 05 實(shí)驗(yàn)例3 復(fù)方苦參注射液（按實(shí)施例2方法制備）對(duì)人結(jié)腸癌SW480移植瘤E-cadherin表達(dá) 的影響。
[0021] 選健康SPF級(jí)BALB/c小鼠2只，雌性，年齡4-6周，體重20 ± 2g ;健康SD大鼠40 只，體重（180±15)g。接種人結(jié)腸癌SW480原位移植瘤，造模成功后，按隨機(jī)數(shù)字表分組 的方法將40只健康SD大鼠分為4組，每組10只：A組：模型對(duì)照組；B組：陽(yáng)性