一種用于治療糖尿病的增效藥物組合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，具體涉及一種用于治療糖尿病的增效藥物組合物，該組合 物以知母總皂苷與四角蛤蜊多糖為主要有效成分。
【背景技術(shù)】
[0002] 糖尿病，古稱消渴癥，即消瘦煩渴之意，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)發(fā)現(xiàn)它是一種常見的內(nèi)分泌疾 病，是由于人體內(nèi)胰島素絕對(duì)或相對(duì)缺乏而引起的血中葡萄糖濃度升高，進(jìn)而糖大量從尿 中排出，并出現(xiàn)多飲、多尿、多食、消瘦、頭暈、乏力等癥狀。進(jìn)一步發(fā)展則引起全身各種嚴(yán)重 的急、慢性并發(fā)癥，威脅身體健康。糖尿病通常分為1型糖尿病和2型糖尿病兩種。在糖尿 病患者中，II型糖尿病占了大多數(shù)。糖尿病患者如得不到很好地控制，進(jìn)一步發(fā)展則引起 全身各種嚴(yán)重的急、慢性并發(fā)癥，可導(dǎo)致眼、腎、神經(jīng)、皮膚、血管和心臟等組織、器官的慢性 并發(fā)癥，以致最終發(fā)生失明、下肢壞疽、尿毒癥、腦中風(fēng)或心肌梗死，嚴(yán)重威脅身體健康。
[0003] 糖尿病是一種常見病，隨著人們生活水平的提高，糖尿病的發(fā)病率在逐年增加。近 年來，我國(guó)糖尿病患病率顯著升高，患者人數(shù)達(dá)9000多萬(wàn)。
[0004] 糖尿病的治療是一個(gè)漫長(zhǎng)的過程，其治療方法有很多種，包括糖尿病中醫(yī)治療， 西醫(yī)治療，胰島素治療等。目前國(guó)內(nèi)常用的口服降糖藥物分為促胰島素分泌劑類、胰島素 增敏劑、α-糖苷酶抑制劑和高糖損傷修復(fù)劑等，如格列本脲、二甲雙胍類、阿卡波糖和羥苯 磺酸鈣等。合成的各類型藥物或療效有限，或毒副作用明顯，近年來，中藥在糖尿病的臨床 治療中顯示出很大優(yōu)勢(shì)。但現(xiàn)有中成藥或大多有效成分不清，或作用機(jī)理不明了，急待開發(fā) 出有效成分明確、作用機(jī)理清楚、質(zhì)量穩(wěn)定可控的中藥制劑。
[0005] 知母總皂苷、四角蛤蜊多糖均有降糖的研究報(bào)道。但知母總皂苷與四角蛤蜊多糖 組合物降糖的研究報(bào)道尚未見到。知母總皂苷與四角蛤蜊多糖組合物增效作用的研究報(bào)道 尚未見到。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種用于治療糖尿病的增效藥物組合物。該組合物以知母 總皂苷與四角蛤蜊多糖為主要有效成分。本發(fā)明所涉及的知母總皂苷中單體成分（芒果 苷、新芒果苷、知母皂苷ΒΙΙ)含量彡50%。四角蛤蜊多糖的純度彡50%。
[0007] 本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
[0008] -種用于治療糖尿病的增效藥物組合物，該組合物以知母總皂苷和四角蛤蜊多糖 為主要有效成分。
[0009] 優(yōu)選的，所述知母總皂苷和四角蛤蜊多糖的質(zhì)量比為1~10:1~10。
[0010] 進(jìn)一步優(yōu)選的，所述知母總阜苷和四角蛤蜊多糖的質(zhì)量比為1~4:1~4。
[0011] 所述知母總皂苷中單體成分芒果苷、新芒果苷和知母皂苷ΒΙΙ的總含量多50%， 所述四角蛤蜊多糖的純度多50%。
[0012] -種用于治療糖尿病的藥物，由上述的增效藥物組合物和藥學(xué)上可接受的輔料制 成。
[0013] 上述藥物的劑型為口服劑型，所述的劑型為片劑、散劑、顆粒劑、口服液或注射液。
[0014] 所述知母總皂苷的制備方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的常規(guī)技術(shù)方案，所述的四角 蛤蜊多糖參考專利CN101548989A公開的方法制備。所述知母總皂苷和四角蛤蜊多糖均可 以采用現(xiàn)有技術(shù)中已經(jīng)公開的方法進(jìn)行制備。
[0015] 將知母總皂苷和四角蛤蜊多糖以不同比例關(guān)系組合，共得13份組合物，它們的組 成比例和樣品的序號(hào)命名如下：
[0016] 1號(hào)樣品為知母總皂苷1:四角蛤蜊多糖1:1 ;
[0017] 2號(hào)樣品為知母總皂苷1:四角蛤蜊多糖2= 1:2;
[0018] 3號(hào)樣品為知母總皂苷1:四角蛤蜊多糖3= 1:3;
[0019] 4號(hào)樣品為知母總皂苷1:四角蛤蜊多糖4= 1:4;
[0020] 5號(hào)樣品為知母總皂苷2:四角蛤蜊多糖ι= 2:1 ;
[0021] 6號(hào)樣品為知母總皂苷2:四角蛤蜊多糖3= 2:3 ;
[0022] 7號(hào)樣品為知母總皂苷3:四角蛤蜊多糖1= 3:1 ;
[0023] 8號(hào)樣品為知母總皂苷3:四角蛤蜊多糖2=3:2;
[0024] 9號(hào)樣品為知母總皂苷3:四角蛤蜊多糖4= 3:4;
[0025] 10號(hào)樣品為知母總阜苷4:四角蛤蜊多糖4:1 ;
[0026] 11號(hào)樣品為知母總皂苷4:四角蛤蜊多糖2=4:2;
[0027] 12號(hào)樣品為知母總皂苷4:四角蛤蜊多糖3= 4:3;
[0028] 13號(hào)樣品為知母總皂苷。:四角蛤蜊多糖5=〇:5;
[0029] 14號(hào)樣品為知母總皂苷5:四角蛤蜊多糖。=5:0。
[0030] 本發(fā)明將知母總皂苷與四角蛤蜊多糖各組合物進(jìn)行體內(nèi)、體外藥效實(shí)驗(yàn)：知母總 皂苷與四角蛤蜊多糖組合物對(duì)高糖誘導(dǎo)的HUVEC損傷模型細(xì)胞活力和N0分泌量的影響實(shí) 驗(yàn)，結(jié)果表明知母總皂苷與四角蛤蜊多糖組合物對(duì)高糖誘導(dǎo)的HUVEC損傷模型細(xì)胞活力有 明顯的增強(qiáng)作用，對(duì)N0分泌量有顯著性的提高作用；知母總皂苷與四角蛤蜊多糖組合物對(duì) RIN細(xì)胞胰島素分泌的影響實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示知母總皂苷與四角蛤蜊多糖組合物能顯著增加 RIN細(xì)胞胰島素的分泌能力；知母總皂苷與四角蛤蜊多糖組合物對(duì)棕櫚酸誘導(dǎo)的HepG2細(xì) 胞胰島素抵抗模型葡萄糖消耗量的影響實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示知母總皂苷與四角蛤蜊多糖組合物 能顯著性地促進(jìn)Η印G2細(xì)胞對(duì)葡萄糖的消耗量，具有改善胰島素抵抗的作用。知母總皂苷 與四角蛤蜊多糖組合物在降糖的上述實(shí)驗(yàn)中，與知母總皂苷、四角蛤蜊多糖單獨(dú)使用比較， 具有顯著的增效作用。體內(nèi)試驗(yàn)：結(jié)果表明知母總皂苷與四角蛤蜊多糖的組合物對(duì)四氧嘧 啶誘導(dǎo)的糖尿病小鼠具有顯著性降糖作用，該降糖作用與知母總皂苷、四角蛤蜊多糖單獨(dú) 使用比較，具有顯著的增效作用。
[0031] 本發(fā)明的有益效果：
[0032] 該發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)知母總皂苷與四角蛤蜊多糖組合物與知母總皂苷、四角蛤蜊多糖 比較，在體內(nèi)外表現(xiàn)出了很好的降糖增效作用。
【附圖說明】
[0033] 圖1為大鼠胰島素ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0034] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但不限制本發(fā)明。
[0035] 實(shí)驗(yàn)材料
[0036] 細(xì)胞株：RIN-m5F大鼠胰島瘤細(xì)胞（購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所基礎(chǔ)醫(yī) 學(xué)細(xì)胞中心）；人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC，來源ATCC) ;!fepG2人肝癌細(xì)胞（來源ATCC)。
[0037] 試藥：4_硝基酚-α-D吡喃葡萄糖苷（AlfaAesar，批號(hào)：110906) ;1640培養(yǎng) 基（GiBco,批號(hào)：1229728);高糖DMEM培養(yǎng)基（Gibco,批號(hào)：991030);格列本脲（天津太 平洋制藥有限公司，批號(hào)：110706);大鼠胰島素ELISA試劑盒（Merckmilipore，批號(hào)： 1311756);胰蛋白酶（Amresco,批號(hào)：27250018) ;FBS(ThermoFisher，批號(hào)：NVM0344); MTT(Ameresco,批號(hào)：M21128) ;DMS0(Solarbio,批號(hào)：302A034);青霉素（Solarbio,批號(hào)： 119八031);鏈霉素（3〇1&41〇，批號(hào)：4234054)似 2即04，12!120(南京化學(xué)試劑有限公司， 批號(hào)：090902) ;KH2P04(南京化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：090922);NaCl(南京化學(xué)試劑有 限公司，批號(hào)：09060310494) ;KC1 (南京化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：060960239);阿卡波糖 片（北京拜耳醫(yī)藥保健有限公司，批號(hào)：117893);羥苯磺酸鈣（利君制藥有限公司，批號(hào)： 1202023);鹽酸二甲雙胍（京豐制藥有限公司，批號(hào)：120915);知母（產(chǎn)地河北，購(gòu)于中國(guó) 中藥材配送網(wǎng)，經(jīng)鑒定為百合科植物知母AnemArrhenAAsphodeloidesBge.的干燥根莖）； 知母總皂苷（自制，純度為彡50% );四角蛤蜊多糖（自制，純度為彡50% )。
[0038]儀器：HERAK Ceil150 型細(xì)胞培養(yǎng)箱（ThermoElectronCorporAtion,USA); RT-6000型酶標(biāo)儀（深圳雷杜生命科技有限公司）；超凈工作臺(tái)（蘇州艾可林凈化設(shè)備有限 公司）；C0ICXDS-1B型倒置光學(xué)顯微鏡（重慶光電儀器有限公司）；BS124S型萬(wàn)分之一電 子天平（SArtorius，USA);YXQ·SG41 · 280型高壓滅菌鍋（上海華線醫(yī)用核子儀器有限公 司）；79-1型磁力攪拌器（深圳國(guó)華儀器有限公司）；0412-1型離心機(jī)（上海醫(yī)療器械有 限公司）；微量移液器（ThermoElectronCorporation，USA) ;96孔細(xì)胞培養(yǎng)板（Caster公 司）。
[0039] 主要相關(guān)誘導(dǎo)液和陽(yáng)性藥的配制：
[0040] 10%BSA的PBS溶液：稱取0. 5502g的BSA于10mL容量瓶中，加入自制PBS緩沖 溶液5mL，攪拌溶解lh，于超凈臺(tái)中過濾除菌，得11 %BSA的PBS母液。取455μL該母液加 45μL的PBS緩沖溶液混勻，即得10%BSA的PBS溶液0. 5mL。
[0041] 陽(yáng)性藥（鹽酸二甲雙胍）溶液：精密稱取0· 00190g鹽酸二甲雙胍粉末于10mL容 量瓶中，加高糖DMEM培養(yǎng)基溶解并定容至10mL，于超凈臺(tái)中用0. 22μL微孔濾膜過濾除菌， 即得濃度為150μg/mL的鹽酸二甲雙胍溶液。
[0042] 0·lmol/L棕櫚酸母液的配制：稱取0· 05128g棕櫚酸顆粒，加入2mL無水乙醇， 40 °C水浴溶解，于超凈臺(tái)中用0. 22μm微孔濾膜過濾除菌，即得。
[0043] 11%BSA溶液的配制：稱取0· 5501gBSA于10mL燒杯中，加入PBS緩沖溶液5mL， 磁力攪拌2h，于超凈臺(tái)中用0. 22μm微孔濾膜過濾除菌，即得含11 %BSA的PBS溶液。
[0044] 1 %FBS、10 %BSA，3. 5mmol/L棕櫚酸誘導(dǎo)液的配制：取 1. 82mL11 %BSA溶液，加 入20μLFBS，90μLPBS，混合均勻，逐滴加入70μL0.lmmol/L的棕櫚酸母液，渦旋使混合 均勻，即得2mL所