儲備液混勻備用。取銅試劑儲備液50mU加水50mU混勻后 加入固體無水硫酸鋼12. 5g并使其溶解。臨用時配制。
[0033] 2. 2對照品溶液的制備
[0034] 精密稱取經(jīng)減壓干燥至恒重的葡聚糖對照品適量，加水溶解配制成1血含有Img 葡聚糖的溶液作為對照品溶液。
[0035] 2. 3供試品溶液的制備
[0036] 供試品溶液1的制備：精密量取本發(fā)明注射劑2ml，置25ml棟色量瓶中，加甲醇至 刻度，搖勻，即得。
[0037] 供試品溶液2的制備：精密量取現(xiàn)有注射劑2ml，置25ml棟色量瓶中，加甲醇至刻 度，搖勻，即得。
[0038] 2. 4測定波長的選擇
[0039] 參照紫外-可見分光光度法（《中國藥典》2005年版一部附錄VA)，在340-550皿 波長范圍內(nèi)分別對對照品溶液和供試品溶液進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果表明，兩者在490nm左右 均有一個吸收峰，因此，將490nm作為測定波長。 W40] 2. 5線性關(guān)系的考察
[0041] 精密量取對照品溶液0. 2、0. 4、0. 6、0. 8、1. 0、1. 2ml，分別置25ml量瓶中，加70% 乙醇稀釋至刻度，搖勻。W70%乙醇為空白，照紫外-可見分光光度法（《中國藥典》2005 年版一部附錄VA)，在490nm的波長處測定吸光度，W葡聚糖濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱 坐標(biāo)，得線性回歸方程為y= 0. 00514X+0. 00571，相關(guān)系數(shù)r= 0. 9996,結(jié)果表明，葡萄 糖在21. 76μg/ml~217. 6μg/ml濃度范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。 柳42] 2. 6精密度試驗(yàn)
[0043]取對照品溶液（C:0.0241mg/ml)，在490皿處測定吸光度，連續(xù)測定6次，結(jié)果 表明6次測定的RSD為0. 90%，儀器精密度良好。 W44] 2. 7穩(wěn)定性試驗(yàn)
[0045] 取對照品溶液（C:0. 0241mg/ml)、供試品溶液1和供試品溶液2,分別于0、15、20、 60、90、120min，在490nm處測定多糖含量，結(jié)果表明，對照品溶液、供試品溶液1和供試品 溶液2在120111111內(nèi)穩(wěn)定，其尺50分別為0.63%、0.61%和0.71%，穩(wěn)定性良好。
[0046] 2. 8重復(fù)性試驗(yàn)
[0047] 取同一批的本發(fā)明注射劑6份，每份約2ml，精密稱定，按供試品溶液1制備方 法制備，依法測定，計(jì)算樣品中多糖的含量，結(jié)果表明，RSD為1. 15%，該方法重復(fù)性良 好。
[0048] 取同一批的現(xiàn)有注射劑6份，每份約2ml，精密稱定，按供試品溶液2制備方法 制備，依法測定，計(jì)算樣品中多糖的含量，結(jié)果表明，RSD為1.52%,該方法重復(fù)性良好。
[0049] 2. 9加樣回收試驗(yàn)
[0050] 分別取已知含量的本發(fā)明注射劑和現(xiàn)有注射劑2ml，精密稱定，平行9份，分別 精密加入對照品溶液適量，按供試品制備方法制備供試品溶液1，依法測定，計(jì)算回收率。 最后結(jié)果為平均回收率分別為99. 87%和99. 58%，RSD= 0. 65%和RSD= 0. 89%。故本 方法可靠性良好。
[0051] 2. 9樣品的測定
[0052] 分別量取本發(fā)明注射劑和現(xiàn)有注射劑2ml，精密稱定，按供試品溶液1和供試品 溶液2制備方法制備，平行量取6份，依法測定并計(jì)算多糖的含量。結(jié)果見表1。
[0053] 表1總香豆素的含量測定結(jié)果
[0054]
[0055] 從表1可知，本發(fā)明注射劑中多糖的平均含量為2. 55%，現(xiàn)有注射劑中多糖的平 均含量為1. 87%。
[0056] 結(jié)論：與現(xiàn)有注射劑相比，本發(fā)明注射劑中靈芝多糖多糖的含量更高。靈芝多糖 (Polysaccharideof GanodermLucidum)具有多種藥效.除了抗腫瘤例外.靈芝多糖還能提 高機(jī)體免疫力和耐缺氧能力，消除體內(nèi)自由基，抗放射，提高肝臟解毒功能，利膽清熱，活血 化疲等。因此，靈芝提取物中多糖含量提高，有助于增加舒肝寧制劑的藥效。同理，按照本 發(fā)明提取方法制成的其他劑型的制劑，靈芝多糖含量也應(yīng)增加。從而使藥效增加。
[0057] 實(shí)驗(yàn)例2.藥效實(shí)驗(yàn)
[0058] 1材料與方法
[0059] 1. 1試驗(yàn)藥物 W60] 1. 1. 1本發(fā)明注射劑，同實(shí)施例1。
[0061] 1. 1. 2現(xiàn)有注射劑：同實(shí)驗(yàn)例1。
[0062] 1.2動物昆明種小鼠，雄性，體重18-22g，四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物研究所提 供。 陽06引 1. 3試劑ALT腳T)、AST(GOT)試劑盒，美生實(shí)業(yè)有限公司生產(chǎn)。四氯化碳（分析 純），天津市博迪化工有限公司出品。硫代乙酷胺，北京化學(xué)試劑Ξ廠生產(chǎn)，。56度紅星二 鍋頭，北京紅星股份有限公司出品。
[0064] 1.4儀器TMS-1024i型全自動生化分析儀，日本東京貿(mào)易株式會社。Multiskan MK3型酶標(biāo)儀，Thermo L油systems公司。 W65] 2實(shí)驗(yàn)方法
[0066] 40只小鼠隨機(jī)分為4組，即正常對照組，模型組，本發(fā)明組和現(xiàn)有制劑組，每組10 只，各組尾靜脈注射給藥。本發(fā)明組注射本發(fā)明注射劑，濃度為0.Iml/lOg，臨用前用葡萄糖 氯化鋼注射液稀釋配制成40 %、20 %、10 %的藥液，注射?，F(xiàn)有制劑組注射現(xiàn)有注射劑，劑 量為0.Iml/lOg，臨用前用葡萄糖氯化鋼注射液稀釋配制成40%、20%、10%的藥液，注射。 正常對照組和模型組注射生理鹽水，每日給藥1次，連續(xù)8天。從給藥第4天起，每天給藥 0.化后，小鼠灌胃56度紅星二鍋頭白酒8mL/kg(正常組給同等體積蒸饋水），2次/天，兩 次間隔3-4h，小鼠給藥與灌酒之前均禁食。連續(xù)5天，末次灌胃白酒后比，摘除小鼠眼球取 血，分離血清，測定血清中ALT和AST水平，解剖分離肝臟，稱重，計(jì)算肝臟指數(shù)，另取相同部 位肝組織，10%甲醒固定，切片，肥染色后觀察肝臟病理組織學(xué)改變。結(jié)果見表2,表3。
[0067] 表2對急性酒精肝損傷模型小鼠肝臟指數(shù)與血清ALT、AST水平的影響
[0068]
W例與正常對照組比較，#P<0. 01，##P<0. 01;
[0070]與模型組比較，*P<0. 05,叮<0. 01 ; 陽07U與現(xiàn)有注射制劑組比較，中<0. 05 ;
[0072] 表3對急性酒精肝損傷模型小鼠肝臟病理組織學(xué)變化的影響
[0073]
[0074] 注：病變等級標(biāo)準(zhǔn)："一"，正常，無肝細(xì)胞疏松化、氣球樣變等病變；" + "，肝小葉不 至IJ1/3區(qū)域肝細(xì)胞輕度腫脹，胞漿疏松化。但肝細(xì)胞索基本清楚，肝竇尚可見。"++"，中度 胞漿疏松化，介于肝細(xì)胞輕度腫脹與氣球樣之間，肝索稍顯素亂，肝竇開始出現(xiàn)狹窄。
[0075] 由表可知，本發(fā)明舒肝寧制劑和現(xiàn)有舒肝寧制劑均有降低小鼠血清ALT和AST水 平的作用，且本發(fā)明舒肝寧制劑效果優(yōu)于現(xiàn)有舒肝寧制劑。病理組織學(xué)檢查表明，模型組小 鼠肝細(xì)胞出現(xiàn)不同程度的胞漿疏松化、細(xì)胞水腫、氣球樣變、溶解性壞死，肝索素亂、肝竇狹 窄等病理改變，舒肝寧注射液連續(xù)給藥8天，本發(fā)明舒肝寧制劑和現(xiàn)有舒肝寧制劑均呈現(xiàn) 不同程度的改善作用。其中，本發(fā)明舒肝寧制劑效果優(yōu)于現(xiàn)有舒肝寧制劑。
【具體實(shí)施方式】： 陽076] 實(shí)施例1:
[0077] 配方：茵陳提取物4g，檐子提取物3g、黃琴巧22g、板藍(lán)根提取物5g及靈芝提取物 3. 5邑。
[0078] 舒肝寧注射劑的制作方法：向黃琴巧加入注射用水，使其懸濁，再加10%氨氧化 鋼溶液使溶解；向茵陳提取物、檐子提取物、板藍(lán)根提取物和靈芝提取物中分別加注射用水 溶解，混勻，加0. 2 %活性炭，攬勻，煮沸15分鐘，濾過，用10 %氨氧化鋼溶液調(diào)節(jié)抑值至 7. 5~8. 0,加注射用水至1000ml，濾過，灌封，滅菌，即得注射液。
[00巧]靈芝提取物的提取工藝：
[0080] 1、取靈芝，洗凈，加入3倍量濃度為85%的乙醇在80°C下浸泡3小時，得A品；
[0081] 2、將A品打成漿液，向漿液中加入0. 2倍量0. 02mol/l的巧樣酸溶液和0. 1倍量 l-2mol/l的肥L溶液混勻，得B品；
[0082] 3、向B品中再加入藥材量5倍量85%的乙醇，進(jìn)行回流提取3小時，過濾，收集濾 液，回收乙醇，得C品；藥渣再加入6倍量水提取3次，每次1小時，合并提取液，與C品混 合，濃縮成濃縮液，得D品；
[0083] 4、將D品用無機(jī)陶瓷膜進(jìn)行過濾，過濾速度為12LA，過濾時分多次加入1. 5倍藥 液體積量的水洗涂有效成分，過濾后的藥液直接通過已處理好的樹脂柱進(jìn)行吸附，流出液 廢棄，W每秒1ml的速度，用抑值為4的2倍柱體積10%乙醇洗柱，再用抑值為5的80% 乙醇洗脫，收集顏色較深部分洗脫液，回收乙醇，用真空蒸發(fā)器濃縮，干燥，即得粗提取物； 將粗提取物加20 %乙醇，攬拌溶解，然后用卷式超濾膜進(jìn)行超濾，濾液回收乙醇，用真空蒸 發(fā)器濃縮，干燥，粉碎，即得靈芝提取物。
[0084] 用法用量：靜脈滴注，一次10~20ml，用10%葡萄糖注射液250~500ml稀釋后 靜脈滴注，一日1次；癥狀緩解后可改用肌內(nèi)注射，一日2~4ml，一日1次。 陽0化]注意事項(xiàng)：1、孕婦及過敏體質(zhì)者慎用；
[0086] 2、注射前嚴(yán)密觀察藥液性狀，有渾濁、沉淀、絮狀物時嚴(yán)禁使用。
[0087]規(guī)格：每支裝2ml、10ml或20ml。