示纖維血球凝集素（FHA)，百日咳博代氏桿菌產(chǎn)生的主要粘附素，能刺激IL-10生產(chǎn) 和抑制化R-誘導(dǎo)的巨隧細(xì)胞和DC中的比-12的生產(chǎn)，導(dǎo)致分泌比-10的1型T調(diào)控細(xì) 胞（Trl)的發(fā)展（McGuirkP等人，叩athogen-specificTregulatoiyIcellsinduced intherespiratorytractby曰bacterialmoleculethatstimulatesinterleukin lOproductionbydendriticcells:anovelstrategyforevasionofprotectiveT helpertypeIresponsesbyBordetellapertussis"，JExpMed195:221-231，2002)。 有趣的是，近期發(fā)現(xiàn)FHA的全身給藥能在一個(gè)T細(xì)胞介導(dǎo)的結(jié)腸炎模型中減少腸道發(fā)炎， 運(yùn)支持了FHA的抗炎性作用度raatΗ等人，"Preventionofexperimentalcolitisby parenteraladministrationofapathogen-derivedimmunomodulatorymolecule"，Gut 56:351-357, 2007)。然而，在此未發(fā)現(xiàn)保護(hù)和未保護(hù)的小鼠中IL-10和TGF-的生產(chǎn)有任何 不同，運(yùn)排除了在百日咳博代氏桿菌給予的針對(duì)甲型流感病毒的交叉保護(hù)中設(shè)及FHA介導(dǎo) 的Trl誘導(dǎo)的潛在可能性。
[0230] 我們?cè)诖藞?bào)道了在嚴(yán)重肺炎的Ba化/c小鼠模型中，百日咳病原劑一一百日咳博代 氏桿菌的減毒菌株度PZE1)的鼻腔給藥提供了針對(duì)小鼠適應(yīng)性H3N2甲型流感病毒的致死 性攻擊的有效和持續(xù)性的保護(hù)，并對(duì)人H1N1 (A/PR/8/34)甲型流感病毒提供了較低程度的 保護(hù)。雖然在此交叉保護(hù)中設(shè)及的細(xì)胞和分子仍然有待鑒定，但是我們的數(shù)據(jù)表明百日咳 博代氏桿菌特異性適配免疫和Trl介導(dǎo)的下調(diào)可能與此無關(guān)。重要的是，我們發(fā)現(xiàn)該交叉 保護(hù)沒有導(dǎo)致病毒載量的降低。相反，受保護(hù)的BPZE1處理的小鼠表現(xiàn)出最低的肺部免疫 病理，運(yùn)與其BALF中降低的嗜中性粒細(xì)胞浸潤和減少的各種主要的促炎性細(xì)胞因子和趨 化因子的產(chǎn)生相一致。從而我們的發(fā)現(xiàn)強(qiáng)烈地表明針對(duì)甲型流感病毒誘導(dǎo)的致死性肺炎的 保護(hù)可W通過減緩炎癥和抑制細(xì)胞因子風(fēng)暴來獲得，并且證明了BPZE1細(xì)菌作為針對(duì)病毒 性甲型流感病毒感染提供保護(hù)的有效的預(yù)防性手段的潛在應(yīng)用。 陽231] 所有在此說明書中引用的出版物和專利申請(qǐng)?jiān)诖司鶠榱烁鞣N目的而整體引入作 為參考，好像特殊地和單獨(dú)地指明每種出版物或?qū)＠暾?qǐng)被為了各種目的而引入作為參考 一樣。 陽232] 雖然前述發(fā)明已經(jīng)用說明和實(shí)施例的方式進(jìn)行了細(xì)節(jié)描述，但其目的在于理解方 便，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員顯然可W對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作出的各種變形和改進(jìn)，而不會(huì)偏 離附加的權(quán)利要求的精神或范圍。 陽233] 參考文獻(xiàn)
[0234] 1.CarratF和FlahaultA，"Influenzavaccine:thechallengeofantigenic drift",Vaccine25:6852-6862,2007。 陽23引 2.化cholsonKG等人，"Influenza"，Lancet362:1733-1745, 2003。
[0236] 3.KashJC等人，"Genomicanalysisofincreasedhostimmuneandcelldeath responsesinducedby1918influenzavirus"，Nature443:578-581，2006。 陽237] 4.SimonAK等人，"Tumornecrosisf過ctor-rel過ted過poptosis-inducing ligandinTcelldevelopment:sensitivityofhumanthymocytes"，ProcNatlAcad SciUSA98:5158-5163,2001。
[0238] 5.KobasaD^A/^Aberrantinnateimmuneresponseinlethalinfectionof macaqueswith化e1918influenzavirus",Na化re445:319-323,2007〇
[0239] 6.TumpeyTM等人，"化aracterizationof化ereconstructed1918Spanish influenzapandemicvirus''，Science310:77-80, 2005。
[0240] 7.deJongMD等人，"FataloutcomeofhumaninfluenzaAisassociated withhi組viralloadandhypercytokinemia"，NatMed12:1203-1207,2006。
[0241] 8. Beigel JH等人，"Avian influenza A(}15N1) infection in humans:，N Engl J Med353:1374-1385,2005。
[0242] 9.UiprasertkulM等人，"ApoptosisandPathogenesisofAvianInfluenza A(}15N1)VirusinHumans"，EmergInfectDis13:708-712, 2007〇
[024引10.PeirisJS等人，"Re-emergenceoffatalhumaninfluenzaAsubtype服N1 disease"，Lancet363:617 - 619, 2004。
[0244] 11.Salomon民等人，"Inhibitionofthecytokineresponsedoesnot protectagainstlethalH5Nlinfluenzainfection"，ProcNatlAcadSciUSA 104:12479-12481，2007。
[0245] 12.deJongMD等人，"Oseltamivirresistanceduringtreatmentof influenzaA(服Nl)infection"，NEnglJMed353:2667-2672,2005。
[0246] 13.CookDN等人，"民equirementofMlP-lalphaforaninflammatoryresponse toviralinfection",Science269:1583-1585,1995。
[0247] 14.DawsonTC等人，"ContrastingeffectsofCCR5andCCR2deficiency inthepulmonaryinflammatoryresponsetoinfluenzaAvirus*'，ΛιηJPathol 156:1951-1959,2000。
[0248] 15.SmithDJ等 人，"Mappingtheantigenicandgeneticevolutionof influenzavirus"，Science305:371-376,2004。
[0249] 16.民enauld-MongenieG等人，"Inductionofmucosalimmuneresponse againstaheterologousantigenfusedtofilamentoushemagglutininafter intranasalimmunizationwithrecombinantBordetellapertussis''，ProcNatlAcad SciUSA93:7944 - 7949,1996。
[0250] 17.Mielcarek，N等人，"Nasalvaccinationusinglivebacterialvectors"， AdvDrugDeliv民ev51:55 -70,2001d
[0251] 18.MielcarekN等人，"IntranasalprimingwithrecombinantBordetella pertussisfortheinductionofasystemicimmuneresponseagainsta heterologousantigen，，，Infectimmune65:544-550,1997。
[02己2] 19. Coppens I等人，"Pro due t i on of Neisseria meningitidis tr過nsf err in-binding protein B by recombinant Bordet ell過pertussis，，，Infect immune 69:5440-5446,200Id
[02己3] 20.民eveneauN等人，"TetanustoxinfragmentC-specificpriming byintranasalinfectionwithrecombinantBordetellapertussis"，Vaccine20:926-933,2002。
[02己4] 21.AlonsoS等人，"Productionofnontypeablehaemophilusinfluenzae HtrAbyrecombinantBordetellapertussisusingfilamentoushaemagglutininas carrier"，Infectimmune73:4295-4301,2005.
[02己己] 22.MielcarekN等人，"Liveatte打uatedB.pertussisasasingle-dosenasal vaccineagainstwhoopingcoughs，PLoSPathog2:e65,2006。
[0巧糾 23.HoSY等人，"化6hi組lyattenuatedBordetellapertussisBPZEl strainasapotentiallivevehicleforthedeliveryofheterologousvaccine candidates"，InfectImmune76:111-119,2008。
[02己7] 24.NarasarajuT等人，"AdaptationofhumaninfluenzaH3N2virusina mousepneumonitismodel:insightsintoviralvirulence，tissuetropismandhost pathogenesis''，MicrobesInfect11:2-11，2009。
[02己8] 25.LuX等人，"Amousemodelfortheevaluationofpathogenesisand immunitytoinfluenzaA(H5N1)virusesisolatedfromhumans''，JVirol73:5903 -5911,1999。
[02己9] 26.SchmitzN等人，"Interleukin-lisresponsibleforacutelung immunopatholoybutincreasessurvivalofrespiratoryinfluenzavirus infection",JVirol79:6441-6448,2005〇
[0260] 27.LaGrutaNL^A/^Aquestionofself-preservation:immunopathologyin influenzavirusinfection''，ImmunolCellBiol85:85-922007。
[0261] 28.KipsJC等人，"Tumornecrosisfactorcausesbronchial hyperresponsivenessinrats"，Am民ev民espirDis145:332 - 336,1992。
[0262] 29.HeadleyAS等人，"Infectionsandtheinflammatoryresponseinacute respiratorydistresssyndrome''，Chest111: 1306-1321，1997。
[0263] 30.EllisTN和BeamanBL，"Interferon-gammaactivationof polymorphonuclearneutrophilfunction''，Immunology112:2 - 11，2004。
[0264] 31.FarrarMA和SchreiberRD，"Themolecularcellbiologyof interferon-gammaanditsreceptor"，Annu民evImmunol11:571，1993。
[0265] 32.JakubzickC等人，"Modulationofdendriticcellstraffickingtoand from化eairways",JImmunol176:3578-3584,2006。
[0%糾 33.StricklandDH等人，"RegulationofT-cellfunctioninlungtissueby pulmonaryalveolarmacrophages，，，Immunology80:266-272, 1993d
[0267] 34.HoltPG等人，"Down-regulationoftheantigenpresentingfunction(s) ofpulmonarydendriticcellsinvivobyresidentalveolarmacrophages，，，JExp Med177:397-407,1993。
[0268] 35.BilykN和HoltPG，"Inhibitionof化eimmunosuppressiveactivity ofresidentpulmonaryalveolarmacrophagesbygranulocyte/macrophagecolony stimulatingfactor",JE邱Med177:1773-1777,1993。
[0269] 36.StumblesPA等人，"Airwaydendriticcells:co-ordinatorsof immunologicalhomeostasisandimmunityintherespiratorytract''，APMIS 111:741-755,2003.
[0270] 37.MainesT民等人，"Pathogenesisofemergingavianinfluenzavirusesin mammalsandthehostinnateimmuneresponse"，ImmunolRev225:68-84,2008。
[0271] 38.WangJ等人，"HiecriticalroleofLIG肌，aTNFfamilymember，inT celldevelopment"，]"Immunol167:5099 - 5105,2001。
[0272] 39.CarbonettiNH，"ImmunomodulationinthepathogenesisofBordetella pertussisinfectionanddisease"，CurrOpinPharmacol7:1-7,2007〇
[0273] 40. HigginsSC等人，"Toll-like receptor 4-mediated innate比-lOactivates antigen-specific regulatory T cells and confers resistance to Bordetella pertussis by inhibiting inflammatory pathology，，，J Immunol 171:3119-3127,2003。
[0274] 41. Me加irk P等人，"Pa化ogen-specific T regulatoiT Icells induced in the respiratory tract by a bacterial molecule that stimulates interleukin 10 production by dendritic cells:過novel strategy for evasion of protective T helper type Iresponses by Bordetella pertussis"，J Exp Med 195:221-231，2002。 [027己] 42. Braat H等人，"Prevention of experimental colitis by parenteral administration of a pathogen-derived immunomodulatory molecule"，Gut 56:351-357,2007。
[0276] 43.Menozzi FD等人，"Identification and purification of transferring-and 1actoferrin-binding proteins of Bordetella pertussis and Bordetella bronchiseptica"，Infect. Immun59:3982-3988,1991。
[0277] 44. WHO, "WHO Manual on Animals Influenza Diagnosis and Surveillance" (World Health Organization，Geneva)，2002。
[0278] 45. Kimman TG等人，"Development and antigen specificity of the lymphoproliferation response of pigs to pseudorabies virus: dichotomy between secondary B-and T-cell responses''，Immunology 86:372-378,1995。
[0279] 46.Bao Z等"Glycogen synthase kinase-3beta inhibition attenuates asthma in mice", Am J Respir Oit Care Med 176:431-438,2007〇
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種活的減毒的突變的博代氏桿菌菌株在制備用于誘發(fā)針對(duì)甲型流感病毒的保護(hù) 性免疫的藥物中的用途，其中所述菌株包含突變的百日咳毒素（Ptx)基因、缺失或突變的 皮膚壞死（dnt)基因和異源ampG基因，但是保留在哺乳動(dòng)物的肺部定殖的能力。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中野生型博代氏桿菌菌株ampG基因被替換為大腸桿 菌ampG基因。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其中ptx基因的所述突變包括對(duì)參與底物結(jié)合的氨基 酸和/或參與催化的氨基酸進(jìn)行替換。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其中所述參與底物結(jié)合的氨基酸的替換包括K9R，且所 述參與催化的氨基酸的替換包括E129G。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中所述博代氏桿菌菌株在流感病毒感染前給藥。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的用途，其中所述博代氏桿菌菌株在流感病毒感染前約6周或 更長時(shí)間進(jìn)行給藥。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的用途，其中所述博代氏桿菌菌株在流感病毒感染前約12周或 更長時(shí)間進(jìn)行給藥。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中所述藥物以多于一個(gè)劑量給藥。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的用途，其中所述藥物以兩個(gè)劑量給藥兩次。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其中所述兩個(gè)劑量約隔3周給藥。
【專利摘要】本發(fā)明涉及含有用于治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物流感病毒感染的突變的博代氏桿菌菌株的組合物和疫苗。另外，本發(fā)明進(jìn)一步提供了使用該組合物或疫苗來保護(hù)哺乳動(dòng)物免受流感病毒感染和/或在哺乳動(dòng)物中誘發(fā)針對(duì)流感病毒的免疫應(yīng)答的方法。
【IPC分類】A61K39/02, A61P11/00, A61P31/04, A61P31/16
【公開號(hào)】CN105412919
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510672958
【發(fā)明人】S·阿朗素, 李 瑞, V·喬, C·洛克特
【申請(qǐng)人】新加坡國立大學(xué), 里爾巴斯德研究所, 國家醫(yī)療保健研究所
【公開日】2016年3月23日
【申請(qǐng)日】2009年6月15日