4次，提取液合并后濃縮干燥得到提取物，提取物中黃酮重量含量為4%。上述提取物經(jīng)蒸餾水超聲溶解后采用大孔吸附樹脂AB-8動態(tài)上樣進行純化；
[0116](3)分別采用9倍柱床體積的蒸餾水和20%乙醇洗脫，充分洗凈多糖、蛋白等大量水溶性雜質；
[0117](4)采用32 %的乙醇對大孔樹脂進行洗脫；
[0118](5) 32%乙醇洗脫液經(jīng)濃縮、真空減壓干燥、粉碎、混合均勻后得到粉末，粉末中槲皮素-3-0- β -D-葡萄糖醛酸苷的重量含量為64%。
[0119](6)上述粉末經(jīng)蒸餾水超聲溶解，混懸液離心后，采用制備型高效液相色譜儀進行分離純化，流速為18mL/min，檢測波長360nm，柱溫25°C，乙腈-水(20-80體積比)等度洗脫，即得到黃色晶體，經(jīng)結構檢測確認，該晶體中槲皮素-3-0- β -D-葡萄糖醛酸苷的重量含量為96%。
[0120]實施例4
[0121]一種荷葉黃酮的組合物，含有重量含量為40-98%黃酮，黃酮的HPLC分析方法是:檢測波長360nm，柱溫25°C，流速0.4mL/min，乙腈-水(20-80體積比)等度洗脫。
[0122]實施例5
[0123]一種荷葉黃酮的組合物，含有重量含量為40-98 %黃酮，其中主峰槲皮素-3-0-β -D-葡萄糖醛酸苷的重量含量為30-65%，黃酮的HPLC分析方法是:檢測波長360nm，柱溫25 °C，流速0.5mL/min，乙腈-水(20-80體積比)等度洗脫。
[0124]實施例6
[0125]一種荷葉黃酮的組合物，含有重量含量為65-70%黃酮。黃酮的HPLC分析方法是:檢測波長360nm，柱溫25°C，流速0.5mL/min，乙腈-水(20-80體積比)等度洗脫。
[0126]實施例7
[0127]一種荷葉黃酮的組合物，含有重量含量為65-70 %黃酮，其中主峰槲皮素-3-0- β -D-葡萄糖醛酸苷的重量含量為60-65%。槲皮素-3-0- β -D-葡萄糖醛酸苷的HPLC分析方法是:檢測波長360nm，柱溫25°C，流速0.6mL/min，流動相乙腈-0.3%甲酸水(20-80體積比)等度洗脫。
[0128]實施例8
[0129]一種荷葉黃酮的組合物，含有重量含量為90-98%黃酮。黃酮的HPLC分析方法是:檢測波長360nm，柱溫25°C，流速0.6mL/min，流動相乙腈-0.05%甲酸水(20-80體積比)等度洗脫。
[0130]實施例9
[0131]—種荷葉黃酮的組合物，含有重量含量為90-98 %黃酮，其中主峰槲皮素-3-0- β -D-葡萄糖醛酸苷的重量含量為90-98%。槲皮素-3-0- β -D-葡萄糖醛酸苷的HPLC分析方法是:檢測波長360nm，柱溫25°C，流速0.6mL/min，流動相乙腈-0.24%甲酸水(20-80體積比)等度洗脫。
[0132]實施例10
[0133]一種荷葉黃酮的組合物，荷葉黃酮的組合物經(jīng)HPLC液相分析，22-23min出現(xiàn)的為主峰槲皮素-3-0- β -D-葡萄糖醛酸苷；
[0134]HPLC液相分析的條件是:檢測波長360nm，柱溫25°C，流速0.6mL/min，流動相乙腈-0.14%甲酸水(20-80體積比)ο
[0135]實施例11
[0136]一種荷葉黃酮的組合物，荷葉黃酮的組合物經(jīng)HPLC液相分析，22-23min出現(xiàn)的為主峰槲皮素-3-0-β -D葡萄糖醛酸苷，23-24min出現(xiàn)另一色譜峰；主峰與另一色譜峰的峰面積之比為12: 1。
[0137]HPLC液相分析的條件是:檢測波長360nm，柱溫25°C，流速0.6mL/min，流動相乙腈-0.14%甲酸水(20-80體積比)等度洗脫。
[0138]實施例12
[0139]通過抗氧化實驗，數(shù)據(jù)證明相同的給藥量，經(jīng)過提取純化的黃酮組合物的活性比藥材提取物好。
[0140]雖然已經(jīng)對本發(fā)明的【具體實施方式】進行了描述，但是本領域技術人員應認識到，在不偏離本發(fā)明的范圍或精神的前提下可以對本發(fā)明進行多種改變與修飾。因而，本發(fā)明意欲涵蓋落在權利要求書及其同等物范圍內的所有這些改變與修飾。
【主權項】
1.一種荷葉黃酮的組合物，其特征在于:組合物中黃酮的重量含量為40-98%。2.一種荷葉黃酮的組合物，其特征在于:組合物中黃酮的重量含量為40-98%，組合物中槲皮素-3-Ο-β -D-葡萄糖醛酸苷的重量含量為30-65%。3.一種荷葉黃酮的組合物，其特征在于:組合物中黃酮的重量含量為65-70%。4.一種荷葉黃酮的組合物，其特征在于:組合物中黃酮的重量含量為65-70%，組合物中槲皮素-3-Ο-β -D-葡萄糖醛酸苷的重量含量為60-65%。5.一種荷葉黃酮的組合物，其特征在于:組合物中黃酮的重量含量為90-98%。6.一種荷葉黃酮的組合物，其特征在于:組合物中黃酮的重量含量為90-98%，組合物中槲皮素-3-Ο-β -D-葡萄糖醛酸苷的重量含量為81-96%。7.一種荷葉黃酮的組合物，其特征在于:組合物中槲皮素-3-0- β -D-葡萄糖醛酸苷的重量含量為90-98%。8.根據(jù)權利要求1-7的一種荷葉黃酮的組合物，其特征在于: 荷葉黃酮的組合物經(jīng)HPLC液相分析，22-23min出現(xiàn)主峰槲皮素-3-0- β -D-葡萄糖醛酸苷，HPLC液相分析的條件是:檢測波長360nm，柱溫25°C，流速0.4-1.0mL/min, 流動相為:乙腈-0.1%甲酸水、甲醇-0.1%甲酸水、乙腈-水、甲醇-水四種流動相； 流動相優(yōu)選為:乙腈-水:20-80體積比等度洗脫。9.根據(jù)權利要求1-7的一種荷葉黃酮的組合物，其特征在于: 荷葉黃酮的組合物經(jīng)HPLC液相分析，22-23min出現(xiàn)主峰槲皮素-3-0- β -D-葡萄糖醛酸苷，23-24min出現(xiàn)另一色譜峰；主峰與另一色譜峰的峰面積之比為12: 1 ;HPLC液相分析的條件是:檢測波長360nm，柱溫25°C，流速0.4-1.0mL/min， 流動相為:乙腈-0.1%甲酸水、甲醇-0.1%甲酸水、乙腈-水、甲醇-水四種流動相； 流動相優(yōu)選為:乙腈-水:20-80體積比等度洗脫。10.根據(jù)權利要求1-7的一種荷葉黃酮的組合物的提取方法，其特征在于: (1)將荷葉在60°c以下烘干、粉碎后制備得到荷葉粗粉； (2)在荷葉粗粉中加入30-80%的乙醇溶液進行熱回流提取，提取溫度為60-95°C，提取料液比以質量與體積之比計為1: 10_1: 50，提取時間2_4h，重復浸提2_4次，提取液濃縮干燥后得到黃酮重量含量為3-5%的提取物；上述提取物采用蒸餾水溶解，混懸液進一步采用大孔吸附樹脂純化； (3)采用8-12倍柱床體積的蒸餾水和15-25%乙醇洗脫，除去多糖、蛋白等水溶性雜質； (4)米用30-40%乙醇對大孔樹脂洗脫； (5)將30-40%乙醇洗脫液經(jīng)濃縮、干燥、粉碎、混合均勻，得到提取物，提取物中槲皮素-3-0-13-D-葡萄糖醛酸苷的重量含量為提取物的60-65% ;; (6)上述粉末經(jīng)蒸餾水溶解，離心后用制備型高效液相色譜儀進行分離制備，以乙腈-水為流動相，流速為10-30mL/min，揮干溶劑、真空干燥，得到組合物，組合物中黃酮的重量含量為90-98%，組合物中槲皮素-3-0-β -D-葡萄糖醛酸苷的重量含量為81-96% ; 一種荷葉黃酮的組合物的提取方法，其特征在于: (1)將荷葉在60°C以下烘干、粉碎后制備得到荷葉粗粉； (2)在荷葉粗粉中加入30-80%的乙醇溶液進行熱回流提取，提取溫度為60-95°C，提取料液比以質量與體積之比計為1: 10_1: 50，提取時間2_4h，重復浸提2_4次，提取液濃縮干燥后得到黃酮重量含量為3-5%的提取物；上述提取物采用蒸餾水溶解，混懸液進一步采用大孔吸附樹脂純化。 (3)采用8-12倍柱床體積的蒸餾水和15-25%乙醇洗脫，除去多糖、蛋白等水溶性雜質； (4)米用30-40%乙醇對大孔樹脂洗脫； (5)將30-40%乙醇洗脫液經(jīng)濃縮、干燥、粉碎、混合均勻，得到提取物，提取物中槲皮素-3-Ο-β -D-葡萄糖醛酸苷的重量含量為提取物的60-65% ; (6)上述粉末經(jīng)蒸餾水溶解，離心后用制備型高效液相色譜儀進行分離制備，以乙腈-水為流動相，流速為10-30mL/min，揮干溶劑、真空干燥，得到組合物，組合物中黃酮的重量含量為90-98%，組合物中槲皮素-3-Ο-β -D-葡萄糖醛酸苷的重量含量為81-96% ; 步驟2所述大孔吸附樹脂包括非極性大孔吸附樹脂，LX-60和Χ-5 ;弱極性大孔吸附樹脂，HPD722 和 LX-5 ； 中極性大孔吸附樹脂，HPD750和ΑΒ-8 ; 荷葉黃酮組合物中含有槲皮素-3-Ο-β -D-葡萄糖醛酸苷； 步驟5中荷葉黃酮的組合物經(jīng)HPLC液相分析，色譜圖上有兩個特征峰，22-23min出現(xiàn)的為主峰槲皮素-3_0-13-D-葡萄糖醛酸苷，23-24min出現(xiàn)另一色譜峰，主峰與另一色譜峰的峰面積之比為12: 1 ;HPLC液相分析的條件是:檢測波長360nm，柱溫25°C，流速.0.4-1.0mL/min,乙臆_水:20-80體積比等度洗脫。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種荷葉黃酮的組合物，荷葉粗粉加乙醇溶液取，提取物采用蒸餾水溶解，用大孔樹脂進行純化；得到黃酮粉末；粉末用高效液相色譜儀進行制備，獲得荷葉黃酮的重量含量為90-98％的組合物。本發(fā)明構思新穎、工藝簡單、生產成本低、所獲得的化合物純度高、工業(yè)化生產容易實現(xiàn)。
【IPC分類】C07H17/07, C07H1/08, A61K36/62, C07D311/30, C07D311/40
【公開號】CN105434539
【申請?zhí)枴緾N201510731265
【發(fā)明人】齊煉文, 孫曉月, 李飛, 范勇, 楊樂樂
【申請人】中國藥科大學
【公開日】2016年3月30日
【申請日】2015年10月29日