液小劑量組小鼠睪丸中曲細(xì)精管內(nèi)的各級(jí)精原細(xì)胞正常,精子正常,見圖5-10; 4.7對(duì)前列腺增生模型小鼠附睪組織形態(tài)的影響 各組小鼠附睪組織的病理觀察結(jié)果:空白組小鼠附睪中管狀上皮細(xì)胞基本正常,管腔 內(nèi)有大量的精子,見圖6-1;模型組小鼠附睪中管狀上皮細(xì)胞基本正常,管腔內(nèi)有大量的精 子,見圖6-2;非那雄胺組小鼠附睪中管狀上皮細(xì)胞基本正常,管腔內(nèi)有大量的精子,見圖6-3;癃閉舒組小鼠附睪中管狀上皮細(xì)胞基基本正常,管腔內(nèi)有大量的精子,見圖6-4;金花葵 總黃酮大劑量組小鼠附睪中管狀上皮細(xì)胞基本正常,管腔內(nèi)有精子,見圖6-5;金花葵總黃 酮中劑量組小鼠附睪中管狀上皮細(xì)胞基本正常,管腔內(nèi)有大量的精子,見圖6-6;金花葵總 黃酮小劑量組小鼠附睪中管狀上皮細(xì)胞基本正常,管腔內(nèi)有大量的精子,見圖6-7;金花葵 水煎液大劑量組小鼠附睪中管狀上皮細(xì)胞基本正常,管腔內(nèi)有精子,見圖6-8;金花葵水煎 液中劑量組小鼠附睪中管狀上皮細(xì)胞基本正常,管腔內(nèi)有大量的精子,見圖6-9;金花葵水 煎液小劑量組小鼠附睪中管狀上皮細(xì)胞基本正常,管腔內(nèi)有大量的精子,見圖6-10。
[0040] 小結(jié) 采用丙酸睪酮皮下注射造小鼠前列腺增生模型成功,模型組前列腺指數(shù)和血清T、DHT 水平顯著升高,血清E2水平顯著降低;前列腺組織出現(xiàn)顯著增生;胸腺皮質(zhì)和脾臟皮質(zhì)出現(xiàn) 顯著萎縮。
[0041] 金花葵水煎液組及各劑量金花葵總黃酮組均可降低動(dòng)物前列腺增生指數(shù),降低血 清DHT,T水平,升高E2水平,減輕前列腺組織的相關(guān)病理變化。大、中、小劑量金花葵總黃酮 組和大、中劑量金花葵水煎液組均可顯著降低動(dòng)物前列腺指數(shù)和顯著降低血清DHT及T水 平,顯著升高血清E2水平,小劑量金花葵總黃酮組可顯著降低動(dòng)物前列腺指數(shù)和血清DHT水 平,明顯降低血清T水平,顯著升高血清E2水平;大劑量金花葵總黃酮組可顯著減輕模型小 鼠前列腺增生病理變化,中、小劑量金花葵總黃酮組和大、中、小劑量金花葵水煎液組可明 顯減輕模型前列腺增生及附睪病理變化;大、中、小劑量金花葵總黃酮組和大、中、小劑量金 花葵水煎液組均可顯著升高模型小鼠胸腺皮質(zhì)厚度;大、中、小劑量金花葵總黃酮組和大、 中、小劑量金花葵水煎液組均可顯著升高動(dòng)物脾小結(jié)厚度。提示金花葵及金花葵總黃酮均 可顯著改善小鼠前列腺增生病理變化。
[0042] 二、金花葵花對(duì)小鼠前列腺炎模型的影響 1實(shí)驗(yàn)材料 1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 小鼠,昆明種,雄性,25~30g,動(dòng)物合格證編號(hào)0021890,購于山東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中 心,飼養(yǎng)在河南中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(許可證號(hào)SYXK (豫)2015-0005 );飼料為消毒飼料, 墊料為消毒墊料,均由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供;飲水為消毒蒸餾水;飼養(yǎng)條件:溫度20~ 25°C,相對(duì)濕度40%~60%,自然光照,每籠10只,常規(guī)飼養(yǎng),隔天更換墊料。
[0043] 1.2實(shí)驗(yàn)藥物和試劑 金花葵花,有平頂山銀地集團(tuán)提供。前列康片(每片含油菜花花粉〇.5g),浙江康恩貝制 藥股份有限公司,批號(hào)140522;消痔靈注射液(每支10ml),吉林省集安益盛藥業(yè)股份有限公 司,批號(hào)13102402;水合氯醛,天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所,批號(hào)20130606;注射用青霉素 鈉,華北制藥股份有限公司,批號(hào)F4013504;氯化鈉注射液,河南科倫藥業(yè)有限公司,批號(hào) C114092201-2;甲醛,中國萊陽市雙雙化工有限公司,批號(hào)20140519。
[0044] 1.3實(shí)驗(yàn)儀器 JY601電子秤,上海民橋醫(yī)療器械有限公司;FA(N)/JA(N)系列電子天平,上海民橋精密 儀器有限公司;可調(diào)式移液器,上海雷勃分析儀器有限公司;OLYMPUS光學(xué)顯微鏡;BL-2000 醫(yī)用圖像分析系統(tǒng),成都泰盟科技有限公司。
[0045] 2實(shí)驗(yàn)方法 2.1造模與分組 實(shí)驗(yàn)室常規(guī)飼養(yǎng)1周后,挑選體重在28~30g的雄性小鼠用于實(shí)驗(yàn)。隨機(jī)選取10只作為 空白對(duì)照組,其余用于造前列腺炎模型。造模小鼠分別稱重,腹腔注射10%水合氯醛 (0.03ml/10g),麻醉成功后,用酒精消毒皮膚,進(jìn)行手術(shù);于下腹正中切口達(dá)腹腔,提出膀胱 及兩側(cè)精囊,暴露膀胱背側(cè)前列腺(背側(cè)葉),用微量注射器準(zhǔn)確注入25%消痔靈注射液 0.02ml,送回腹腔;分層縫合肌肉、皮膚,用酒精消毒手術(shù)傷口,待小鼠清醒后放回鼠籠常規(guī) 飼養(yǎng);術(shù)后肌內(nèi)注射青霉素20萬u/kg,連用3天,以預(yù)防感染。術(shù)后第8天,挑選恢復(fù)情況好的 造模小鼠50只,按體重隨機(jī)分為5組,每組10只,即模型組,前列康組,高、中、低劑量金花葵 花組。
[0046] 2.2給藥方法 2.2.1實(shí)驗(yàn)用藥的配制 金花葵花高、中、低劑量組小鼠每日給藥劑量分別為3g/kg、1.5 g/kg、0.75g/kg,用生 理鹽水分別配制成濃度為150、75、37.5 11^/1111的溶液;前列康片:前列康按成人臨床用量的 15倍給藥。小鼠每日劑量為1.5g/kg,臨用前用生理鹽水配成濃度為0.075g/ml的混懸液;消 痔靈注射液:臨用前用滅菌注射用水配制成25%的濃度。
[0047] 2.2.2給藥劑量和方法 空白對(duì)照組與模型組,從造模第8天起,按0.2ml/10g體重給予蒸餾水灌胃,每日1次,連 續(xù)3周。陽性對(duì)照組從造模第8天起,按0.2ml/10g體重給予前列康膠囊混懸液灌胃,每日1 次,連續(xù)3周。金花葵花高、中、低劑量組按0.2ml/10g體重給予相應(yīng)的藥物灌胃。
[0048] 2.3指標(biāo)測定 小鼠24h內(nèi)飲水量:于造模后的第14天和第28天分別測定每組小鼠24h內(nèi)的飲水量。 [0049] 末次給藥Ih后(禁食12小時(shí)),稱重,之后處死小鼠,迅速取出前列腺組織,取IOmg 左右前列腺組織,剪碎,加20倍蒸餾水,充分振搖,進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)以及卵磷脂小體密度評(píng) 分(滿視野為4分,3/4視野為3分,1/2視野為2分,1/4視野為1分)。另取一部分前列腺組織以 及睪丸、附睪、胸腺、脾臟固定于10%福爾馬林溶液中,石蠟包埋,切片,HE染色,光鏡下觀察 各組前列腺、睪丸、附睪、胸腺、脾臟的組織形態(tài)學(xué)變化。
[0050] 2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法 數(shù)據(jù)分析用SPSS 13.0 for windows統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)資料的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,計(jì)量資 料用平均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差土s)表示,組間比較用單因素方差分析,計(jì)數(shù)資料采用Ridit分析。 [0051 ] 3實(shí)驗(yàn)結(jié)果 3.1對(duì)前列腺炎模型小鼠飲水量的影響 分別在造模后的第14天和第28天,分別測定每組小鼠在24h內(nèi)的飲水量,結(jié)果見表5。
[0052]表5金花葵花對(duì)前列腺炎模型小鼠飲水量的影響(ml)
從上表可看出,模型組小鼠在造模后第14天和第28天飲水量均比空白對(duì)照組少,分別 減少6.52%和17.02%,提示隨著造模時(shí)間的延長,模型小鼠前列腺炎癥狀加重。與模型組 比,高、中、低劑量金花葵花組在第14天和第28天可使模型小鼠飲水量分別增加3.48%、 13.48%,2.17%、12.29%,1.96%、7.57%,說明隨著給藥時(shí)間延長,對(duì)前列腺炎癥狀改善越明 顯。
[0053] 3.2對(duì)前列腺炎模型小鼠前列腺組織中白細(xì)胞數(shù)及卵磷脂小體密度的影響 按相應(yīng)實(shí)驗(yàn)方法及標(biāo)準(zhǔn),觀察并記錄前列腺組織中白細(xì)胞總數(shù)及卵磷脂小體密度積 分,結(jié)果見表6。
[0054] 表6金花葵花對(duì)前列腺炎模型小鼠前列腺組織中白細(xì)胞數(shù)及卵磷脂小體密度的 影響(:.?:± s)
★★表示與模型組相比,Ρ<〇. 01 從上表可看出,與空白對(duì)照組比,模型組前列腺組織中白細(xì)胞數(shù)顯著增加(Ρ<〇.01)、卵 磷脂小體密度積分顯著減少(Ρ<〇.01),說明造前列腺炎模型成功。與模型組相比,高、中、低 劑量金花葵花組和前列康組前列腺中白細(xì)胞數(shù)均顯著減少(ρ<0.01),前列腺卵磷脂小體密 度積分均顯著增加(Ρ<〇. 01 ),且以金花葵花高、中劑量效果明顯。金花葵花具有改善前列腺 炎模型小鼠前列腺炎癥狀的作用。
[0055] 3.3對(duì)前列腺炎模型小鼠前列腺、睪丸、附睪、腎臟、胸腺和脾臟組織形態(tài)的影響 3.3.1對(duì)小鼠前列腺組織形態(tài)的影響(如圖7 ) 各組前列腺組織形態(tài)觀察:空白對(duì)照組前列腺腺體正常