治療糖尿病腦病的玉液湯藥物及其制法與檢測(cè)方法及用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，具體涉及一種治療糖尿病腦病的藥物組合物。
【背景技術(shù)】
[0002] -、糖尿病（diabetes mellitus，簡稱DM) 糖尿病(diabetes mellitus，簡稱DM)是由于胰島素分泌和(或)胰島素作用不足引起 的以高血糖為主要特征的代謝性綜合征，流行病學(xué)研究顯示，隨著社會(huì)的發(fā)展和生活方式 的改變，DM的發(fā)病率在全球范圍內(nèi)呈上升趨勢(shì)。目前，全球共有1.5億DM患者，到2025年，這 個(gè)數(shù)字將會(huì)上升到3.3億。我國目前患病人數(shù)約4000萬，占全球約1/5。糖尿病是一種系統(tǒng)性 代謝疾病，可引起多系統(tǒng)損害導(dǎo)致心腦血管疾病、視網(wǎng)膜病變、腎病、糖尿病足、周圍神經(jīng)病 變等并發(fā)癥，目前大量糖尿病動(dòng)物與臨床研究均證實(shí)，持續(xù)高血糖還可導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng) (Central nervous system，CNS)認(rèn)知功能障礙（mild cognitive impairment，MCI)--糖 尿病腦病，即中樞神經(jīng)系統(tǒng)造成腦組織結(jié)構(gòu)和功能的損害，MCI認(rèn)知功能障礙又稱認(rèn)知功能 衰退、認(rèn)知功能缺損或認(rèn)知?dú)埣?，泛指各種程度的認(rèn)知功能受損，從MCI直到癡呆。多項(xiàng)研 究均表明，Π 型糖尿病認(rèn)知功能障礙與性別、年齡、受教育程度、生活方式、血糖水平、代謝 紊亂、胰島素抵抗、下丘腦-垂體 -腎上腺(hypothalamic-pituitary-adrenal，HPA)軸功 能失調(diào)、炎性介質(zhì)等有關(guān)，對(duì)糖尿病認(rèn)知功能障礙的研究為目前研究熱點(diǎn)之一。
[0003] 二、中樞膽堿能系統(tǒng) 中樞膽堿能系統(tǒng)被認(rèn)為是構(gòu)成學(xué)習(xí)記憶的重要通路，乙酰膽堿(acetylch〇line，ACh) 是其中重要的神經(jīng)遞質(zhì)，膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(Chol ine acety 1-transferase，ChAT)作為Ach合 成的限速酶，常作為研究膽堿能神經(jīng)元的標(biāo)志或估計(jì)Ach含量(釋放量)的間接標(biāo)志。腦內(nèi)膽 堿能神經(jīng)遞質(zhì)Ach含量和ChAT活性的變化，均可反映膽堿能神經(jīng)的活動(dòng)，已作為當(dāng)前研究人 類腦功能衰老的主要指標(biāo)之一。隨著"膽堿能損傷學(xué)說"的提出，膽堿能系統(tǒng)在糖尿病腦病 發(fā)病中的作用日益受到人們重視。多項(xiàng)研究證實(shí)STZ所致糖尿病大鼠的紋狀體和海馬區(qū)內(nèi) 乙酰膽堿代謝異常，也有發(fā)現(xiàn)糖尿病大鼠腦組織(隔閡、杏仁核、海馬等)膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)酶 活性下降，膽堿能神經(jīng)傳導(dǎo)降低。因此有學(xué)者認(rèn)為，糖尿病腦病早期為認(rèn)知功能有關(guān)的基底 前腦、海馬和皮層等膽堿能神經(jīng)元退行性病變。
[0004] 研究表明，葡萄糖與蛋白質(zhì)或脂質(zhì)的游離基發(fā)生非酶糖基化反應(yīng)及氧化反應(yīng)所形 成的產(chǎn)物，即晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)，晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)可引起體內(nèi)組織一 系列病理生理改變，是導(dǎo)致糖尿病慢性并發(fā)癥的重要致病因素。AGE受體(RAGE)存在于很 多細(xì)胞表面，其與AGE的結(jié)合可導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激和NF-kB通路的激活。30歲以后，人 腦內(nèi)海馬及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中AGEs開始積聚。AGEs在細(xì)胞外與β淀粉樣斑塊共沉積，在細(xì)胞內(nèi) 則積聚在神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞中。AGEs與其受體RAGE結(jié)合，可激活氧化應(yīng)激，引起一系列 損傷，并最終激活如NF-kB等對(duì)氧化還原反應(yīng)敏感的轉(zhuǎn)錄因子，導(dǎo)致細(xì)胞因子的上調(diào)，如IL-1β和TNF-α。本實(shí)驗(yàn)評(píng)估了玉液湯對(duì)AGE誘導(dǎo)的認(rèn)知損傷的保護(hù)作用，包括行為學(xué)測(cè)試及潛 在的機(jī)制探究。
[0005] 三、玉液湯的相關(guān)介紹 中醫(yī)藥治療糖尿病已有幾千年的歷史，六味地黃丸、補(bǔ)中益氣湯、逍遙散、玉液湯、復(fù)方 丹參、石斛合劑等中藥復(fù)方有預(yù)防、治療糖尿病或減輕慢性并發(fā)癥的作用。其中玉液湯出自 張錫純的《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》，為中醫(yī)治療消渴名方，原書中即記載"治消渴。消渴，即西醫(yī)所 謂糖尿病，忌食甜物。" 本發(fā)明在玉液湯的基礎(chǔ)上，提供了一種藥物組合物及其制備方法，該藥物在防治T2DM 及改善認(rèn)知功能方面，療效確切，本發(fā)明的藥物不僅可改善糖尿病的癥狀，還可改善胰島素 抵抗，并具有一定的改善認(rèn)知功能作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種治療糖尿病腦病的藥物組合物。
[0007] 本發(fā)明的另一目的是提供該藥物組合物的制備方法。
[0008] 本發(fā)明的目的是通過以下方式實(shí)現(xiàn)的。
[0009] 一種治療糖尿病腦病的藥物組合物是由以下重量份的原料制成的：山藥30重量 份，黃苗15重量份、知母15重量份、葛根15重量份、五味子15重量份、天花粉15重量份、雞內(nèi) 金10重量份。
[0010] 該藥物組合物采用如下方法制備：藥材飲片按處方劑量稱取，以5~15倍量40~ 60%乙醇回流提取3次，每次提取時(shí)間0.5~1.5h，合并提取液，回收乙醇，濃縮，干燥，粉碎， 即得。
[0011] 該藥物組合物優(yōu)選采用如下方法制備:藥材飲片按處方劑量稱取，分別以10倍量、 8倍量、6倍量50%乙醇回流提取3次，每次提取時(shí)間Ih，合并提取液，回收乙醇，濃縮，干燥，粉 碎，即得。
[0012] 該藥物組合物按照藥學(xué)中常規(guī)的制備方法制成硬膠囊劑、片劑、顆粒劑。
[0013] 所述的藥物，采用如下方法檢測(cè):采用高效液相色譜法進(jìn)行薯蕷皂苷元的含量測(cè) 定： (1) 色譜條件:采用Hypersi IDs色譜柱;流動(dòng)相:比例為20~40:60~80的乙腈-水;檢測(cè) 波長：190~210nm;柱溫：15~25°C;流速:0 · 5~1 · 5mL · min-1;進(jìn)樣量：5~20yL; (2) 對(duì)照品溶液制備:精密稱取干燥至恒重的薯蕷皂苷元對(duì)照品適量，加甲醇溶解制成 對(duì)照品溶液； (3) 供試品溶液的制備:精密稱取本發(fā)明藥物，加甲醇，加熱回流，提取液回流溶劑并濃 縮至干，殘?jiān)铀芙?，用水飽和的正丁醇振搖提取，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌，正 丁醇提取液回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既芙?，搖勻，濾過，取濾液，即得供試品溶液； (4 )測(cè)定：分別精密量取上述供試品溶液、對(duì)照品溶液各5~20yL，注入高效液相色譜 儀，進(jìn)行檢測(cè)。
[0014] 上述采用高效液相色譜法對(duì)薯蕷皂苷元進(jìn)行含量測(cè)定的檢測(cè)方法，優(yōu)選的方法如 下： (1) 色譜條件：采用Hypersi IDs色譜柱；流動(dòng)相：比例為30 :70的乙腈-水；檢測(cè)波長： 200nm;柱溫：20°C;流速：1 · OmL · min-1;進(jìn)樣量：IOyL; (2) 對(duì)照品溶液制備:精密稱取80°C干燥至恒重的薯蕷皂苷元對(duì)照品適量，加甲醇溶解 制成每Ig含0.2mg的對(duì)照品溶液； (3) 供試品溶液的制備:精密稱取本發(fā)明藥物IOmU加甲醇40mL，加熱回流4h，提取液回 流溶劑并濃縮至干，殘?jiān)铀甀OmL溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取5次，每次20mL，合并正 丁醇提取液，用氨試液洗滌3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既芙獠?轉(zhuǎn)移至IOmL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取濾液，即得供試品溶液； (4) 測(cè)定:分別精密量取上述供試品溶液、對(duì)照品溶液各IOyU注入高效液相色譜儀，進(jìn) 行檢測(cè)。
[0015] 所述的藥物采用氣相色譜法對(duì)花側(cè)柏烯、羅漢柏烯進(jìn)行含量測(cè)定： (1) 色譜條件:色譜柱:ZB-WAX彈性石英毛細(xì)管柱;載氣:N2，0.5~1.5mL · ml/1;氫氣，30 ~50mL · mL-S空氣，300~500mL · min-S分流比：5~15:1;進(jìn)樣口溫度：240~260°C，檢測(cè) 器溫度:290~310°C;程序升溫:初始80°C，每分鐘5°C升至120°C，每分鐘10°C升至180°C，保 持3.5min;內(nèi)標(biāo)法； (2) 內(nèi)標(biāo)溶液的制備:取環(huán)己酮適量，加無水乙醇溶解并稀釋制成溶液，搖勻，作為內(nèi)標(biāo) 溶液； (3) 供試品溶液的制備:精密量取本品，置容量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，再精密量 取，置容量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻； (4) 對(duì)照品溶液的制備:精密稱取花側(cè)柏烯對(duì)照品、羅漢柏烯對(duì)照品適量，加無水乙醇 溶解并稀釋制成含花側(cè)柏烯及羅漢柏烯的對(duì)照品儲(chǔ)備溶液，備用； (5) 測(cè)定:分別精密量取上述供試品溶液、對(duì)照品溶液各5~20yL，注入氣相色譜儀，進(jìn) 行檢測(cè)。
[0016] 上述采用氣相色譜法進(jìn)行花側(cè)柏烯、羅漢柏烯進(jìn)行含量測(cè)定，優(yōu)選采用如下方法： (1) 色譜條件:色譜柱:ZB-WAX彈性石英毛細(xì)管柱;載氣:N2，1. OmL · mL-S氫氣，40mL · mL-1;空氣，400mL · min-1;分流比：10:1;進(jìn)樣口溫度：250°C，檢測(cè)器溫度300°C ;程序升溫： 初始80°C，每分鐘5°C升至120°C，每分鐘10°C升至180°C，保持3.5min;內(nèi)標(biāo)法； (2) 內(nèi)標(biāo)溶液的制備:取環(huán)己酮適量，加無水乙醇溶解并稀釋制成每ImL含12.5mg的溶 液，搖勻，作為內(nèi)標(biāo)溶液； (3) 供試品溶液的制備：精密量取本品1.0 mL，置IOmL容量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻 度，再精密量取1.0 mL，置IOmL容量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1.0 mU加無水乙醇稀釋至刻度， 搖勻； (4) 對(duì)照品溶液的制備:精密稱取花側(cè)柏烯對(duì)照品、羅漢柏烯對(duì)照品適量，加無水乙醇 溶解并稀釋制成含花側(cè)柏稀〇.301mg · ml/1及羅漢柏稀0.901mg · ml/1的對(duì)照品儲(chǔ)備溶液， 備用； (5) 測(cè)定:分別精密量取上述供試品溶液、對(duì)照品溶液各IOyU注入氣相色譜儀，進(jìn)行檢 測(cè)。
[0017] 所述的藥物組合物在制備治療糖尿病腦病藥物中的應(yīng)用。
[0018] 所述的藥物組合物在制備治療糖尿病足以及哮喘藥物中的應(yīng)用。
[0019] 本發(fā)明藥物組合物中原料藥的基源如下： 山藥：為薯截科薯截屬植物山藥Dioscorea opposita Thunb. [D.batatas Decne.]的 塊莖。
[0020] 黃苗：為豆科黃苗屬植物蒙古黃苗Astragalus membranaceus Bunge var. Mongholius(Bunge)P.K.Hsiao和膜莢黃苗A. Membranaceus (Fisch.) Bunge的根。
[0021 ] 知母:為百合科知母屬植物知母Ane-marrhena asphodeloides Burge的根莖。
[0022] 葛根：為豆科葛屬植物野葛Pueraria lobata (Willd.) Ohwi [P.thunbergiana (Sieb. et Zucc.) Benth. ; P. hirsuta (Thunb . ) Schneid ·]或甘葛藤 P · Thomsonii Benth.的塊根。
[0023] 五味子：為五味子科五味子屬植物五味子Schisandra chinensis (Turca .) Baill. [Kadsura chinensis Turca.]或華中五味子S. sphenanthera Rehd. et Wils.的果 實(shí)。
[0024] 天花粉:為萌蘆科栝樓屬植物栝樓Trichosanthes kiriowii Maxim及中華栝樓的 根。
[0025] 雞內(nèi)金:為雉科雉屬動(dòng)物家雞Gallus gallus domesticus Brisson的砂囊內(nèi)膜。
[0026] 上述藥材均購于藥材均購自于咸陽天天樂醫(yī)藥超市。
[0027]通過如下實(shí)驗(yàn)研究驗(yàn)證本發(fā)明的技術(shù)效果： 實(shí)驗(yàn)一:本發(fā)明藥物組合物對(duì)糖尿病腦病模型大鼠神經(jīng)保護(hù)作用及機(jī)制研究 1.材料 1.1藥品與試劑 (1)藥品 本發(fā)明藥物:處方：山藥30g、黃苗15 g、知母15 g、葛根15 g、五味子15 g、天花粉15 g、 雞內(nèi)金10 g;制法:藥材飲片按處方劑量稱取，分別以10倍量、8倍量、6倍量50%乙醇回流提 取3次，每次提取時(shí)間I h，合并提取液，回收乙醇，濃縮，干燥，粉碎，即得。
[0028] 對(duì)比藥物A:處方：山藥30g、黃苗15 g、知母15 g、葛根15 g、五味子15 g、天花粉15 g、雞內(nèi)金10 g;制法:藥材飲片按處方劑量稱取，分別以10倍量、8倍量、6倍量的水回流提取 3次，每次提取時(shí)間Ih，合并提取液，濃縮，干燥，粉碎，即得。
[0029] 對(duì)比藥物B:處方：山藥