用于在有此需要的受試者中抑制淋巴細(xì)胞增殖的方法和藥物組合物的制作方法
【專(zhuān)利說(shuō)明】用于在有此需要的受試者中抑制淋巴細(xì)胞増殖的方法和藥物 組合物 發(fā)明領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及用于在有此需要的受試者中抑制淋巴細(xì)胞增殖的方法和組合物。
[0002] 發(fā)明背景
[0003] 淋巴細(xì)胞增殖是針對(duì)抗原（例如，病原抗原）的免疫反應(yīng)的正常組成部分。然而在 特定條件下，淋巴細(xì)胞增殖似乎是有害的。例如，器官移植引起復(fù)雜的系列免疫過(guò)程，其一 般被歸類(lèi)為炎癥、免疫、損傷組織的組織修復(fù)和結(jié)構(gòu)強(qiáng)化。典型地，T細(xì)胞增殖通過(guò)分泌促炎 癥細(xì)胞因子，例如，白介素-2(IL_2)和IFN-g導(dǎo)致炎癥。因此，本領(lǐng)域的技術(shù)人員已經(jīng)嘗試開(kāi) 發(fā)免疫抑制劑。免疫抑制藥物分為五組：（i)基因表達(dá)調(diào)節(jié)因子；（ii)烷化劑；（iii)嘌呤從 頭合成的抑制劑；（iV)啼啶從頭合成的抑制劑;和(V)激酶和磷酸酶的抑制劑。例如，糖皮質(zhì) 激素主要通過(guò)抑制IL-2和其它介導(dǎo)物基因表達(dá)發(fā)揮免疫抑制和抗炎癥活性。氨甲蝶呤和其 聚谷氨酸衍生物通過(guò)釋放腺苷抑制炎癥性反應(yīng)。霉酸酸和咪唑立賓(mizoribine)抑制肌苷 單磷酸脫氫酶。霉酚酸誘導(dǎo)活化的T淋巴細(xì)胞的凋亡。環(huán)孢霉素和FK-506/他克莫司 (Tacrolimus)抑制|丐調(diào)神經(jīng)磷酸酶(calcineurin)的磷酸酶活性。雷帕霉素抑制來(lái)自IL-2， 表皮生長(zhǎng)因子和其它細(xì)胞因子受體的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。開(kāi)發(fā)中的免疫抑制和抗炎癥化合物包括 P38激酶和環(huán)AMP磷酸二酯酶IV型同等型(其在T細(xì)胞中表達(dá))的抑制劑。然而，免疫抑制劑由 于它們的非特異性免疫抑制效果與毒性相關(guān)。減少免疫抑制能夠防止與過(guò)度免疫抑制相關(guān) 的副作用。然而，由于對(duì)于每對(duì)供體受體對(duì)，固有免疫抑制的要求未知，免疫抑制最小化帶 有免疫抑制不足和隨之而來(lái)的急性排斥，移植物的過(guò)早丟失和死亡的潛在風(fēng)險(xiǎn)。免疫抑制 藥物一種有前景的應(yīng)用是搜索通過(guò)新的機(jī)制抑制淋巴細(xì)胞增殖的試劑，因?yàn)槟壳笆褂玫脑?劑都擁有非特異性的廣泛免疫抑制效果。
[0004] 發(fā)明簡(jiǎn)述
[0005] 本發(fā)明涉及用于在有此需要的受試者中抑制淋巴細(xì)胞增殖的方法和組合物。
[0006] 發(fā)明詳述
[0007] 由抗原識(shí)別和共信號(hào)觸發(fā)的淋巴細(xì)胞功能意味著快速和強(qiáng)烈的細(xì)胞分裂，因此代 謝適應(yīng)1。胞苷核苷酸三磷酸(CTP)是一種DNA，RNA和磷脂代謝所需的前體 2_4。CTP源自兩種 來(lái)源:補(bǔ)救途徑和從頭合成途徑，所述從頭合成途徑依賴(lài)于兩種酶，CTP合酶(或合成酶)1和 2(〇1^1和〇1^2)，雖然它們各自的功能未知 5-7。(^合酶活性是淋巴細(xì)胞中對(duì)于0嫩合成潛 在的重要步驟8' 9。這里，發(fā)明人報(bào)道了對(duì)人類(lèi)CTPSl中缺失功能突變(rsl45092287)的鑒定， 其引起新的，威脅生命的免疫缺陷，其特征在于活化的T和B細(xì)胞增殖能力的受損。在CTPSl 缺陷受試者T和B細(xì)胞或使用shRNA敲低CTPSl的正常T細(xì)胞中，響應(yīng)抗原受體介導(dǎo)的活化的 增殖是缺陷性的。相反，近端和遠(yuǎn)端TCR信號(hào)傳導(dǎo)事件和響應(yīng)僅受到CTPSl缺乏的微弱影響。 通過(guò)表達(dá)野生型CTPSl或通過(guò)添加外源性CTP或其核苷前體，胞苷，在CTPSl缺陷細(xì)胞中恢復(fù) 了正常的T細(xì)胞增殖。在靜息T細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)CTPSl表達(dá)低，但在TCR活化后快速上調(diào)。這些結(jié)果 突出了 CTPS1通過(guò)免疫應(yīng)答期間其維持活化的淋巴細(xì)胞增殖的能力，在免疫系統(tǒng)中關(guān)鍵且 特異的作用。因此，CTPSl可能代表了能夠特異性地抑制淋巴細(xì)胞活化的免疫抑制藥物的治 療靶標(biāo)。
[0008] 因而，本發(fā)明的第一個(gè)方面涉及用于在有此需要的受試者中降低或抑制淋巴細(xì)胞 增殖的方法，包含使用治療有效量的至少一種CTP合酶I (CTPS1)抑制劑施用給所述受試者。
[0009] 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法適合用于抑制或減少T細(xì)胞增殖。
[0010] 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法適合用于抑制或減少B細(xì)胞增殖。
[0011] 在一些實(shí)施方案中，所述受試者是移植的受試者。典型地，所述受試者可能已經(jīng)使 用選自下組的移植物移植:心臟，腎臟，肺，肝，胰腺，胰島，腦組織，胃，大腸，小腸，角膜，皮 膚，氣管，骨，骨髓，肌肉，或膀胱。本發(fā)明的方法確實(shí)特別適合用于防止或抑制與接受體受 試者對(duì)供體組織、細(xì)胞、移植物，或器官移植的排斥相關(guān)的免疫反應(yīng)。移植相關(guān)疾病或病癥 包括移植物抗宿主病(GVDH)，例如與骨髓移植相關(guān)，以及器官、組織，或細(xì)胞移植物移植(例 如，組織或細(xì)胞同種異體移植或異種移植)排斥導(dǎo)致的或與其相關(guān)的免疫病癥，包括，例如， 皮膚，肌肉，神經(jīng)元，胰島，器官，肝的實(shí)質(zhì)細(xì)胞移植物，等等。對(duì)于接受體受試者中的供體組 織，細(xì)胞，移植物或?qū)嶓w器官移植物，據(jù)信根據(jù)本發(fā)明的CTPSl抑制劑可以有效的防止所述 接受體中對(duì)這些移植物的急性排斥和/或用于長(zhǎng)期維持治療以防止所述接受體中這些移植 物的排斥(例如，抑制患有糖尿病的受試者接受體中對(duì)來(lái)自供體的產(chǎn)生胰島素的胰島細(xì)胞 移植物的排斥）。因此，本發(fā)明的方法對(duì)于防止宿主抗移植物病(HVGD)和移植物抗宿主病 (GVHD)是有用的。所述CTPSl抑制劑可以在移植之前和/或移植后施用到所述受試者(例如， 移植前至少一天，移植后一至五天，等等）。在一些實(shí)施方案中，所述CTPSl抑制劑可以在移 植之前和/或移植后定期施用到所述受試者。
[0012] 在一些實(shí)施方案中，所述受試者患有自身免疫疾病。如本文所使用的，"自身免疫 疾病"是起因于并針對(duì)個(gè)體的自身組織的疾病或病癥。自身免疫疾病的例子包括但不限于， 阿狄森氏病(Addison's Disease)，過(guò)敏，斑秀(Alopecia Areata)，阿爾茲海默病，抗中性 粒細(xì)胞胞漿抗體(ANCA)相關(guān)性血管炎，強(qiáng)直性脊柱炎，抗磷脂綜合征(休斯綜合癥(Hughes Syndrome ))，關(guān)節(jié)炎，哮喘，動(dòng)脈粥樣硬化，動(dòng)脈粥樣硬化斑塊，自身免疫性疾病（例如，狼 瘡，RA，MS，格雷夫斯病(Graves ' disease)等），自身免疫性溶血性貧血，自身免疫性肝炎，自 身免疫性內(nèi)耳病，自身免疫性淋巴增生綜合征，自身免疫性心肌炎，自身免疫性卵巢炎，自 身免疫性睪丸炎，無(wú)精子癥，貝切特氏?。˙ehcet's Disease)，貝格爾氏?。˙erger's Disease)，大皰性類(lèi)天皰瘡(BuiIous Pemphigoid)，心肌病，心血管疾病，乳糜瀉/腹腔疾病 (Celiac Sprue/Coeliac disease)，慢性疲勞免疫功能障礙綜合征(CFIDS)，慢性特發(fā)性多 發(fā)性神經(jīng)炎，慢性炎性脫髓鞘性，多發(fā)性神經(jīng)根性神經(jīng)?。≒olyradicalneuropathy) (CIPD)，慢性復(fù)發(fā)性多發(fā)性神經(jīng)病(格林-巴利綜合征(Guillain-Barrgsyndrome))，丘-斯 綜合征（Churg-Strauss Syndrome，CSS)，瘢痕性類(lèi)天皰瘡，冷凝集素疾?。–old Agglutinin Disease)(CAD)，慢性阻塞性肺病(COPD)，CREST綜合征，克羅恩氏病(Crohn's disease)，皮炎，皰疹樣皮炎（Herpet if ormus )，皮肌炎，糖尿病，盤(pán)狀狼瘡（Di s co id Lupus)，濕疹，獲得性大皰性表皮松解癥(Epidermolysis bullosa acquisita)，原發(fā)性混 合型冷球蛋白血癥（Essential Mixed Cryoglobulinemia)，埃文氏綜合征（Evan's Syndrome)，眼球突出（Exopthalmos)，纖維肌痛，肺出血腎炎綜合征（Goodpasture ' s Syndrome)，橋本氏甲狀腺炎(Hashimoto's Thyroiditis)，特發(fā)性肺纖維化，特發(fā)性血小板 減少性紫癜(ITP)，IgA腎病，免疫增生性疾病或病癥(例如，銀肩?。?，炎性腸病（IBD)，包括 克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎，胰島素依賴(lài)型糖尿?。↖DDM)，間質(zhì)性肺病，幼年型糖尿病，幼年 型關(guān)節(jié)炎，幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎(JIA)，川崎氏病(Kawasaki 's Disease)，蘭伯特-伊頓肌無(wú)力 綜合征(Lambert-Eaton Myasthenic Syndrome)，扁平苔蘚，狼瘡，狼瘡性腎炎，淋巴細(xì)胞性 垂體炎(Lymphoscytic Lypophisitis)，梅尼埃病(M6nigre's Disease)，米勒費(fèi)希爾綜合 癥(MiIler Fisher Syndrome)/急性播散腦脊髓脊神經(jīng)根病，混合型結(jié)締組織病，多發(fā)性硬 化癥（MS)，肌肉風(fēng)濕，肌痛性腦脊髓炎（ME)，重癥肌無(wú)力，眼部炎癥，落葉型天皰瘡 (Pemphigus Foliaceus)，尋常型天皰瘡(Pemphigus Vulgaris)，惡性貧血，結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈 炎，多軟骨炎，多腺體綜合征（惠特克氏綜合征(Whitaker's syndrome))，風(fēng)濕性多肌痛，多 發(fā)性肌炎，原發(fā)性無(wú)丙種球蛋白血癥，原發(fā)性膽汁性肝硬化/自身免疫性膽管病 (Autoimmune chol angiopathy)，銀肩病，銀肩病關(guān)節(jié)炎，雷諾氏現(xiàn)象（Raynaud，s Phenomenon)，萊特爾氏綜合征（Reiter's Syndrome) /反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎，再狹窄 (Restenosis)，風(fēng)濕熱，風(fēng)濕性疾病，類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，結(jié)節(jié)病，施密特綜合征（Schmidt ' s syndrome)，硬皮病，Sjdrgen綜合癥，僵人綜合癥(Stiff-Man Syndrome)，系統(tǒng)性紅斑狼瘡 (SLE )，系統(tǒng)性硬皮病，大動(dòng)脈炎，顳動(dòng)脈炎/巨細(xì)胞動(dòng)脈炎，甲狀腺炎，1型糖尿病，2型糖尿 病，潰瘍性結(jié)腸炎，葡萄膜炎，血管炎，白癜風(fēng)和韋格納氏肉芽腫（Wegener ' s Granulomatosis)〇
[0013] 如本文所使用的術(shù)語(yǔ)"CTPS1"具有其在本領(lǐng)域的一般意義并指代CTP合酶I XTPSl 是一種67-kDa的蛋白，含有CTP合成酶結(jié)構(gòu)域和谷氨酰胺酰胺轉(zhuǎn)移結(jié)構(gòu)域，其從UTP和谷氨 酰胺代謝形成CTP(Kursula，P.等，Structure of the synthetase domain of human CTP synthetase,a target for anticancer therapy.Acta Crystallogr Sect F Struct Biol Cryst Commun 62,613-7(2006))。
[0014] 如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)"CTPS1抑制劑"指代任意的天然或非天然化合物，其具有減 少或抑制CTPSl的活性或表達(dá)的能力。典型地所述CTPS抑制劑能夠通過(guò)結(jié)合所述蛋白直接 作用于活性，或通過(guò)減少或抑制所述酶的表達(dá)間接作用于活性。因此CTPSl抑制劑包含 CTPSl表達(dá)的抑制劑。例如，CTPSl抑制劑也包括能夠與CTPSl的底物（即CTP或谷氨酰胺）競(jìng) 爭(zhēng)對(duì)應(yīng)的催化結(jié)構(gòu)域的任意化合物。典型的，所述抑制劑是小的有機(jī)分子或生物分子(肽， 脂質(zhì)，適體）。
[0015] 在一些實(shí)施方案中，所述CTPSl抑制劑是氨基酸谷氨酰胺的任意功能性類(lèi)似物，衍 生物，取代產(chǎn)物，異構(gòu)體，或同源物，其保留了谷氨酰胺結(jié)合CTPSl抑制劑的特性。
[0016] 術(shù)語(yǔ)"谷氨酰胺類(lèi)似物"在本文中意圖包含上文提到的任意一個(gè)。根據(jù)本發(fā)明的谷 氨酰胺類(lèi)似物的制備通過(guò)本領(lǐng)域的技術(shù)人員公知的傳統(tǒng)方法制備，見(jiàn)例如以下具體實(shí)施方 案的上下文或標(biāo)準(zhǔn)參考文獻(xiàn)中提到的參考文獻(xiàn)。
[0017] 在一些實(shí)施方案中，所述CTPSl抑制劑是正亮氨酸衍生物，例如6-重氮-5-氧-L-正 亮氨酸(DON) 13DON是一種谷氨酰胺類(lèi)似物，其抑制許多各種不同的需要谷氨酰胺的反應(yīng)，雖 然主要的效果似乎在于哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的嘌呤的從頭合成和CTP合成酶（Lyons，S.D.， Sant，Μ·Ε·，Christopherson，R. I. (1990)J.Biol.Chem. 265,11377-11381)。其阻礙增殖并 已經(jīng)進(jìn)行了作為癌癥藥物的廣泛的臨床試驗(yàn)（綜述于Catane，R .，Von Hof f，D . D .， Glaubiger，D.和L.Muggia，F(xiàn).M·(1979)Cancer Treat.Rep.63,1033-1038;和Ahluwalia, G.S.，Grem，J.L. ,Hao，Ζ·，和Cooney，D.A. (1990)Pharmacol .Ther .46,243-271)。美國(guó)專(zhuān)利 號(hào)2 965 634涉及正亮氨酸衍生物，例如DON，以及其生產(chǎn)的方法。
[0018] 在一些實(shí)施方案中，所述CTPSl抑制劑是阿西維辛(acivicin)。阿西維辛已描述于 美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,489,562。
[0019]在一些實(shí)施方案中，所述CTPSl抑制劑是UTP的類(lèi)似物。這種類(lèi)似物的例子是去氮 尿苷（CAS 號(hào) 23205-42-7)。
[0020] 其它的例子包括環(huán)戊烯基胞嘧啶(CPEC)，吉西他濱(Gemcitabine)(2'，2'-二氟脫 氧胞苷，dFdC)，放線菌素 D，環(huán)己酰亞胺，聯(lián)丁?；h(huán)AMP，和6-氮雜尿苷。
[0021] "表達(dá)抑制劑"指代天然或合成的化合物，其具有抑制基因表達(dá)的生物效應(yīng)。
[0022] 在一些實(shí)施方案中，所述基因表達(dá)抑制劑是siRNA，反義寡核苷酸或核酶。
[0023] 用于本發(fā)明中的基因表達(dá)抑制劑可以基于反義寡核苷酸構(gòu)建物。反義寡核苷酸， 包括反義RNA分子和反義DNA分子，將通過(guò)結(jié)合目標(biāo)mRNA，作用以直接阻斷目標(biāo)mRNA的翻譯， 并從而防止蛋白翻譯或增加 mRNA降解，從而降低目標(biāo)蛋白（即CTPS1)在細(xì)胞中的水平，以及 活性。例如，可以合成至少約15個(gè)堿基且與編碼目標(biāo)蛋白的mRNA轉(zhuǎn)錄序列的特定區(qū)域互補(bǔ) 的反義寡核苷酸，例如，通過(guò)常規(guī)的磷酸二酯技術(shù)和通過(guò)，例如靜脈內(nèi)注射或輸注施用。使 用反義技術(shù)的方法特異性抑制其序