聯(lián)氨基姜黃素在制備抗皮膚鱗狀細胞癌藥物中的應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，具體設及一種聯(lián)氨基姜黃素在制備抗皮膚鱗狀細胞癌 藥物中的應用。
【背景技術】
[0002] 近30年來，我國癌癥發(fā)病率及死亡率一直呈持續(xù)增長的趨勢。皮膚鱗狀細胞癌是 發(fā)病率較高的皮膚惡性腫瘤，其在皮膚惡性腫瘤中占有較大比例，一般為80%至90%，其發(fā) 病率有逐年增高趨勢，在老年人中尤其明顯。該類癌癥因其惡性程度高，西醫(yī)治療目前無有 效且經(jīng)濟的手段。
[0003] 信號傳導和轉錄激活因子3(signal transducer and activator oftranscription3，STAT3)是多種致癌性信號通路的關鍵分子，其下游調控著許多與腫瘤 細胞生長、調亡、血管生成和轉移有關的關鍵分子，如切ClinDl ,Survivin,Bcl-2等。STAT3 參與細胞生長、分化、分裂及發(fā)育等多種生理過程，并在細胞惡性轉化中起重要作用。STAT3 是轉錄信號傳導子與激活子家族(STAT)的重要成員。STAT3作為轉錄因子在沒有特異性的 刺激時定位于胞質內，當細胞受到刺激時，STAT3上的SH2結構域與受體上被憐酸化的酪氨 酸的殘基結合，同時自身被JAK憐酸化。STAT3是EGFR，IL-6/JAK等多個致癌性酪氨酸激酶信 號通道的匯聚焦點，STAT3激活后誘導與細胞增殖、分化、生存、調亡密切相關的關鍵基因的 異常表達，通過各種途徑促進細胞增殖，惡性轉化，阻礙細胞調亡表達出致癌作用，目前被 定義為一種癌基因。
[0004] 其中，姜黃素作為一種中藥在抗癌應用中被廣泛應用。姜黃素是一種天然植物多 酪類色素，從姜科植物姜黃中提取，也存在其它姜科植物中。姜黃素廣泛存在于我國傳統(tǒng)中 藥姜黃的根莖中。近年來研究表明，姜黃素在抗腫瘤、抑制炎癥反應、抗氧化、抗類風濕等方 面具有很好的藥理作用。姜黃素在動物模型上對皮膚癌、肝細胞癌、結腸癌、肺癌、卵巢癌、 乳腺癌、胃癌等多種腫瘤細胞具有明顯地抑制作用，并可誘導腫瘤細胞調亡，但是姜黃素水 溶性差，生物利用度低等缺點嚴重制約了臨床的應用。

【發(fā)明內容】

[0005] 為了解決現(xiàn)有技術中姜黃素不能在臨床上廣泛應用的缺陷，本發(fā)明提供了聯(lián)氨基 姜黃素在制備抗皮膚鱗狀細胞癌藥物中的應用。
[0006] 本發(fā)明提供了一種聯(lián)氨基姜黃素在制備抗皮膚鱗狀細胞癌藥物中的應用。
[0007] 其中，質量濃度大于15WH01/L的聯(lián)氨基姜黃素能明顯抑制人皮膚鱗狀細胞癌A431 細胞的生長。
[000引其中，聯(lián)氨基姜黃素通過抑制STAT3信號通路及STAT3基因表達來降低人皮膚鱗狀 細胞癌A431細胞的侵襲性。
[0009]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明首次提出了聯(lián)氨基姜黃素在制備抗皮膚鱗狀細胞癌藥 物中的應用。聯(lián)氨基姜黃素通過抑制STAT3信號通路的活化及該信號通路祀基因STAT3的表 達來降低皮膚鱗狀細胞癌A431細胞的侵襲性。聯(lián)氨基姜黃素易溶于水，生物利用度高，能替 代姜黃素在臨床上廣泛地應用。
【附圖說明】
[0010]圖1是聯(lián)氨基姜黃素對A431細胞體外侵襲能力的影響，A:陰性對照組;B: 5皿01/L 聯(lián)氨基姜黃素處理組;CaOwnol/L聯(lián)氨基姜黃素處理組;D:15wiiol/L聯(lián)氨基姜黃素處理組；
[0011] 圖2是Western blot檢測聯(lián)氨基姜黃素處理后A431細胞中STAT3和P-STAT3蛋白的 相對表達量；
[0012] 圖3是Western blot檢測姜黃素處理后A431細胞中STAT3和P-STAT3蛋白的相對表 達量；
[OOK]圖4是聯(lián)氨基姜黃素對A431細胞中STAT3和P-STAT3蛋白表達的影響；
[0014] 圖5是聯(lián)氨基姜黃素對A431細胞中STAT3基因mRNA轉錄水平的影響。
【具體實施方式】
[0015] 下面結合實施例對本發(fā)明進行詳細地解釋說明。
[0016] 本發(fā)明中用到的主要儀器及試劑：
[0017] 人皮膚鱗癌細胞A431由中國科學院上海細胞生物研究所提供；STAT3鼠單克隆抗 體及P-STAT3鼠單克隆抗體由美國Cell Si即aling Technologies公司提供;聯(lián)氨基姜黃素 購自中國藥品生物制品檢定所;MTT購自美國Sigma公司;RPMI1640培養(yǎng)基購自美國GIBCO公 司；Transwe 11小室購自Mi Iliproe公司；PCR引物及BSA稀釋液由上海生工合成， ReverTraAce-Q-RT-PCR kit購自TOYOBO公司，蛋白干粉購自中國博±德公司。
[0018] 細胞培養(yǎng)方法:A431細胞在含10 % FBS的RPMI1640培養(yǎng)基，放置于細胞培養(yǎng)箱中 (37°C、5%C〇2)，當細胞生長至80 %融合時，用0.化％膜酶傳代。
[0019]實施例1
[0020] MTT法檢測聯(lián)氨基姜黃素對細胞的殺傷力：
[0021 ]取對數(shù)生長期細胞，按4 X IO3個/孔接種于96孔板中，邊緣孔加入無菌PBS，培養(yǎng) 2地后，分別加入濃度為5、10、15、20、25、30、35、40、50皿〇1/1聯(lián)氨基姜黃素，同時設陰性對 照組(0.1 %二甲基亞諷DMSO)和空白對照組，每組設3個復孔，0.1 % DMSO可抑制人皮膚鱗狀 細胞癌A431細胞的增殖。培養(yǎng)24、48、7化后，10(K)r/min離屯、，棄去培養(yǎng)液，每孔加入18化1無 血清RPMI1640培養(yǎng)基及20山MlT溶液(5mg/ml)，繼續(xù)培養(yǎng)地，lOOOr/min離屯、，棄去上清，每 孔加入10化1 DMSO，搖床振蕩IOmin。酶標儀49化m波長處測定光密度A值，并按W下公式計 算細胞生存率（％ )。實驗重復3次。
[0022] 細胞生存率（％ )=(實驗組A490-空白對照組A490)/實驗對照組A490 X 100%。
[0023] SPSS13.0統(tǒng)計學軟件處理，W均數(shù)±標準差表示數(shù)據(jù)，獨立樣本t檢驗用于各實驗 組組間均數(shù)分析，單因素方差分析多組數(shù)據(jù)，P<〇.05為在統(tǒng)計學有意義。
[0024] 結果如表1所示，聯(lián)氨基姜黃素濃度15皿ol/L，作用時間24h為臨界點，聯(lián)氨基姜黃 素濃度>15皿ol/L，作用時間>2地細胞的生長抑制呈時間和劑量依懶性，差異在統(tǒng)計學上 有意義(P<〇.〇〇l);聯(lián)氨基姜黃素濃度< 15皿ol/L，作用時間<24h時，聯(lián)氨基姜黃素對細 胞毒性作用無統(tǒng)計學意義，細胞存活率>85%。所W W聯(lián)氨基姜黃素濃度^ 15WH01/L，作用 時間為^ 24h時為侵襲和粘附試驗的條件。
[0025]表1不同濃度的聯(lián)氨基姜黃素對A431細胞的抑制率
[0027] 注：*VS 5、10、15 皿 〇1/L，P<0.05; AVS 5、10 皿 ol/L，P<0.0;〇VS 5、10、20、25y mol/L，P<0.05;#VS 5、15、20、25皿〇1/1，？<0.05;國￥5 2地，？<0.05;參￥5 4化，？<0.05
[0028] 實