一種降血糖的藥物配方及其實(shí)驗(yàn)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及醫(yī)藥行業(yè)技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種降血糖的藥物配方及其實(shí)驗(yàn)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 臨床和實(shí)驗(yàn)研究報(bào)道葛根琴連湯對(duì)糖尿病具有治療作用，其中，葛根琴連湯內(nèi)含 有不同極性的黃酬、異黃酬類、生物堿類、皂巧類等大量化合物，完全獲得運(yùn)些物質(zhì)并進(jìn)行 全面研究非常困難，究竟是哪些化合物在起作用也不清楚。我們根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)，從葛根琴連 湯中選取了 7個(gè)活性較強(qiáng)的化合物:①來源于葛根的黃酬類:葛根素、大豆巧;②來源于黃琴 的黃酬類:黃琴巧、黃琴素;③來源于黃連的生物堿:小築堿;④來源于甘草的甘草酸、甘草 巧，我們研究了 7個(gè)化合物不同配比對(duì)高血糖模型大鼠的降糖W及改善膜島素抵抗的作用， 并與原方劑進(jìn)行比對(duì)研究，發(fā)現(xiàn)了最佳降血糖化合物的構(gòu)成和比例。
[0003] 葛根琴連湯經(jīng)過臨床實(shí)踐驗(yàn)證，對(duì)2型糖尿病和膜島素抵抗有干預(yù)治療作用，但復(fù) 方湯劑缺乏對(duì)藥效物質(zhì)的微觀分析和質(zhì)量控制，影響臨床療效，本發(fā)明對(duì)葛根琴連湯的主 要活性成分進(jìn)行配比研究，發(fā)現(xiàn)并優(yōu)化葛根琴連湯干預(yù)治療2型糖尿病最佳有效組分配比， 為此類經(jīng)典方劑的二次開發(fā)提供研究基礎(chǔ)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種降血糖的藥物配方及其實(shí)驗(yàn)方法。
[000引為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供W下技術(shù)方案:一種降血糖的藥物配方，所述藥 物配方包括葛根素、大豆巧元、黃琴巧、黃琴素、小築堿、甘草酸、甘草巧屯種藥物，所述葛根 素的劑量濃度為50-500mg/kg.d、大豆巧元的劑量濃度為lO-lOOmg/kg.d、黃琴巧的劑量濃 度為lO-lOOmg/kg.d、黃琴素的劑量濃度為lO-lOOmg/kg.d、小築堿的劑量濃度為IO-IOOmg/ kg.d、甘草酸的劑量濃度為5-50mg/kg.d、甘草巧的劑量濃度為lO-lOOmg/kg.d。
[0006] 優(yōu)選的，所述藥物配方由如下配比濃度的原料藥組成:葛根素lOOmg/kg.d、大豆巧 元25mg/kg. d、黃琴巧的劑量濃度為1 OOmg/kg. d、黃琴素的劑量濃度為1 Omg/kg. d、小築堿的 劑量濃度為lOmg/kg.d、甘草酸的劑量濃度為5mg/kg.d、甘草巧的劑量濃度為50mg/kg.d。
[0007] -種驗(yàn)證降血糖藥物配方的實(shí)驗(yàn)方法:包括如下實(shí)驗(yàn)步驟：1)建立大鼠高血糖模 型;2)篩選分組;3)檢測(cè)指標(biāo);4)分析對(duì)比和得出結(jié)論。
[0008] 優(yōu)選的，所述步驟1)中建立大鼠高血糖模型的大鼠數(shù)為110只，且都為雄性大鼠， 上述110只雄性大鼠被隨機(jī)的分為11組，每組10只。
[0009] 優(yōu)選的，所述步驟2)中篩選分組共分為十二個(gè)組，分別為按照葛根琴連湯各提取 物組分配比的八個(gè)組合Nl-N8、葛根琴連湯原方組N9、二甲雙脈組NlO、模型組Nl 1、原有空白 組 Nl 2。
[0010] 優(yōu)選的，所述步驟3)中檢測(cè)的指標(biāo)為體重、空腹血糖、餐后化血糖、葡萄糖灌注 率、血清膜島素。
[0011] 選擇健康雄性8-9周齡SD大鼠140只，由第四軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中屯、提供，體重在 280~300g之間，適應(yīng)性喂養(yǎng)7天，按隨機(jī)數(shù)字表法分為空白組和模型組，空白組10只，模型 組130只，空白組喂食普通飼料，其中，普通飼料為常規(guī)的曬齒類動(dòng)物飼料，成分為脂肪 10 %、蛋白22%、碳水化合物68 %、鹽0.5%，模型組喂食高脂高糖高膽固醇飼料，其中，高脂 高糖高膽固醇飼料配方為:基礎(chǔ)飼料73.8 %、豬油10 %、薦糖5 %、雞蛋黃10 %、膽固醇1 %、 膽鹽0.2%，模型組和空白組均予W普通飲水，按上述條件連續(xù)喂養(yǎng)6周，每周測(cè)體重及空腹 血糖，6周末測(cè)體重，禁食12小時(shí)后測(cè)空腹血糖、空腹血清膜島素，計(jì)算膜島素抵抗指數(shù)和膜 島素敏感指數(shù)，使用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，試驗(yàn)結(jié)果中計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn) 差，多組之間比較采用單因素方差分析，兩組比較采用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，P<0.05為差 異具有顯著性。
[0012] 本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明中的配方是經(jīng)過嚴(yán)密的科學(xué)實(shí)驗(yàn)得來，具有很好的 降低血糖、改善膜島素抵抗的作用，能夠?yàn)榇祟惤?jīng)典方劑的二次開發(fā)提供研究基礎(chǔ)，有著極 強(qiáng)的創(chuàng)新性。
【附圖說明】
[0013] 圖1為本發(fā)明中實(shí)驗(yàn)方法的步驟圖；
[0014] 圖2為均勻?qū)嶒?yàn)設(shè)計(jì)圖；
[0015] 圖3為均勻設(shè)計(jì)的優(yōu)化方案圖。
【具體實(shí)施方式】
[0016] 為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，W下結(jié)合附圖及實(shí)施例，對(duì) 本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明，應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用W解釋本發(fā)明，并 不用于限定本發(fā)明。
[0017] 從圖1可W看出本發(fā)明中的實(shí)驗(yàn)方案如下：
[001引1.高血糖大鼠模型的建立
[0019] 1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及造模
[0020] 健康雄性8-9周齡SD大鼠140只第四軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中屯、提供，體重在280~ 300g之間，適應(yīng)性喂養(yǎng)7天，按隨機(jī)數(shù)字表法分為空白組和模型組，空白組10只，模型組130 只，空白組喂食普通飼料，模型組喂食高脂高糖高膽固醇飼料，模型組（RI)和空白組 (Normol)均予W普通飲水，按上述條件連續(xù)喂養(yǎng)6周，每周測(cè)體重及空腹血糖，6周末測(cè)體 重，禁食12小時(shí)后測(cè)空腹血糖，空腹血清膜島素，計(jì)算膜島素抵抗指數(shù)和膜島素敏感指數(shù)。 [0021 ] 1.2觀察指標(biāo)
[0022] 1.2.1-般情況觀察
[0023] 觀察各組大鼠精神、活動(dòng)狀態(tài)、毛發(fā)及動(dòng)物死亡情況，每周用電子天平稱量大鼠體 重1次，記錄并分析體重變化。
[0024] 1.2.2血糖
[0025] 給藥第6周末，禁食12小時(shí)后，用血糖儀測(cè)尾靜脈血糖。
[0026] 1.2.3空腹血清膜島素
[0027] 用酶聯(lián)免疫法化LISA)測(cè)空腹血清膜島素，造模第六周末，禁食1化后，10%水合氯 醒腹腔注射麻醉，眶靜脈叢采血，取抗凝血，4000r/min，離屯、5min，獲得血漿。酶聯(lián)免疫吸 附法化nzyme - linked immunosorbent assay，ElLISA)測(cè)定空腹血清膜島素 （Fasting serum insulin，F(xiàn)INS)含量。
[002引1.2.4膜島素抵抗指數(shù)
[0029] 用冊(cè)MA模型公式：IRI =GLU X INS今22.5計(jì)算膜島素抵抗指數(shù)。
[0030] 1.2.5膜島素敏感指數(shù)
[0031] 測(cè)定空腹血糖（FPG)和空腹膜島素（FINS)濃度后，進(jìn)行計(jì)算：膜島素敏感指數(shù) (ISI)=Ln[l/(FPGxFINS)]
[0032] 1.3實(shí)驗(yàn)儀器
[0033] ACS-30電子計(jì)價(jià)砰 永康市華鷹衡器有限公司
[0034] 膜島素測(cè)試試劑盒 北京北方生物技術(shù)研究所產(chǎn)品
[0035] KQ2200DE型數(shù)控超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司
[0036] TGklSM臺(tái)式高速冷凍離屯、機(jī) 長(zhǎng)沙湘儀離屯、機(jī)儀器有限公司
[0037] 磁力加熱攬拌器 常州國(guó)華電器有限公司
[0038] 電熱鼓風(fēng)干燥機(jī) 上海一恒科學(xué)儀器有限公司
[0039] 電子恒溫水浴鍋 北京科偉永興儀器有限公司
[0040] HH-S6型電子天平 上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司
[0041] 4°C冰箱 合肥美菱股份有限公司
[0042] 膜島素測(cè)試試劑盒 北京北方生物技術(shù)研究所產(chǎn)品
[0043] 移液器20-200ul，100-1000 ul 德國(guó) EP 化 ndorf 公司
[0044] =諾牌血糖儀 長(zhǎng)沙=諾生物傳感技術(shù)有限公司
[004引 1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
[0046] 使用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，試驗(yàn)結(jié)果中計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 +SDJ表示。多組之間比較采用單因素方差分析(ANOVA),兩組比較采用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì) 學(xué)處理，P<0.05為差異具有顯著性。
[0047] 1.5實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[004引一般情況造模過程中，對(duì)照組大鼠毛色光滑、柔順，模型組大鼠活動(dòng)量明顯減少， 精神萎靡，體毛無光澤，造模6周后，根據(jù)檢測(cè)指標(biāo)，剔除造模未成功和死亡的大鼠。兩組動(dòng) 物體重比較，在第2-5周，兩組體重均在穩(wěn)步上升，模型組比空白組體重增長(zhǎng)的更為迅速，但 在第1周，第2周，兩組體重比較，P〉0.05,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;動(dòng)物飼養(yǎng)至第3周、第4周、5周， 兩組體重比較，P<0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，至第6周，兩組體重比較，P<0.01，差異顯著，有 統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。
[0049]表1給藥前兩組體重變化比較(單位:g)
[0051 ]注:與空白組比較 *P<0.05，**P<0.01
[0052]造模第6周末，模型組的空腹血糖，空腹膜島素，膜島素抵抗指數(shù)均升高，與空白組 比較，P<0.05,差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，膜島素敏感指數(shù)下降，P<0.05,與空白組比較，差異 顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2和表3。
[0053] 表2兩組空腹血糖變化比較(單位:mmol/L)
[005引注:與空白組比較吁<0.05，*中<0.01
[0056]表36周末兩組膜島素、膜島素敏感指數(shù)、膜島素抵抗指數(shù)比較
[005引注:與空白組比較，沖<0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義
[0059] 2.葛根琴連湯組分對(duì)高血糖模型大鼠糖代謝的影響
[0060] 2.1動(dòng)物分組
[0061] 將造模成功的110只SD雄性大鼠，根據(jù)體重編號(hào)按隨機(jī)數(shù)字表法分為11組:葛根琴 連湯各提取物組分配比的八個(gè)組合(N1、N2、N3、N4、N5、N6、N7、N8)，葛根琴連湯原方組(N9)、 二甲雙脈組(N10)、模型組(Nil)。各組繼續(xù)予W高脂高糖高膽固醇飼料，原有空白組(N12) 繼續(xù)予W普通飼料，共12組動(dòng)物，每組各10只，均予W普通飲水。
[0062] 2.2藥物及試劑來源
[006引葛根素(Pue):西安輝煌植物科技有限公司，純度:90%
[0064] 大豆巧元:西安輝煌植物科技有限公司，純度:90%
[0065] 黃琴巧:西安輝煌植物科技有限公司，純度:90%
[0066] 黃琴素:西安輝煌植物科技有限公司，純度:90%
[0067] 小築堿:西安輝煌植物科技有限公司，純度:90%
[0068] 甘草酸:西安輝煌植物科技有限公司，純度:90%
[0069] 甘草巧:西安輝煌植物科技有限公司，純度:90%
[0070] 葛根琴連湯:各味中藥購(gòu)自陜西中醫(yī)藥大學(xué)校醫(yī)院。
[0071] 膽固醇:平頂山市慧源生物制品有限公司
[0072] 膽鹽:平頂山市慧源生物制品有限公司
[0073] CMC(簇甲基纖維素鋼）：湖北新河原料有限公司
[0074] 鹽酸二甲雙脈(Met):上海醫(yī)藥(集團(tuán)）有限公司信誼制藥總廠 [007引10%葡萄糖注射液:華裕(無錫)制藥有限公司
[0076]水合氯醒：中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上海化學(xué)試驗(yàn)公司 [0077] 2.3藥品、試劑