氧乙締單硬脂酸醋，600轉(zhuǎn)/分鐘攬拌1小時，制成囊屯、 溶液；
[0053] (2)另取卵憐脂/膽固醇復(fù)配物(質(zhì)量比2/l)30g，用丙酬制成質(zhì)量濃度5%的囊材 溶液，加入囊材質(zhì)量〇.15g的竹紅菌甲素和0.3g單硬脂酸甘油醋，800轉(zhuǎn)/分鐘攬拌1.5小時 制成混合物溶液；
[0054] (3)將囊屯、溶液滴加到混合物溶液中（滴加速度為50滴/min) ,3000轉(zhuǎn)/分鐘攬拌1 小時;過0.4wii微孔濾膜，濾液在40°C和0.08個大氣壓下減壓蒸出丙酬0.5小時，-50°c冷凍 干燥5小時，制得光控祀向蛇毒多膚鋒納米制劑46g。
[0化5] 實施例6
[0056] (1)將蛇毒多膚lOg，用50g的pH為5的憐酸緩沖液溶解，加入0.1?醋酸鋒，500轉(zhuǎn)/ 分鐘攬拌攬拌4.5小時;加入0.05g吐溫60，800轉(zhuǎn)/分鐘攬拌0.5小時，制成囊屯、溶液；
[0057] (2)另取卵憐脂-膽固醇3:1質(zhì)量比復(fù)配物lOg，用乙醇制成質(zhì)量濃度1%的囊材溶 液，加入0.0 lg脫儀葉綠酸和0.05g司盤60，1500轉(zhuǎn)/分鐘攬拌0.5小時，制成混合物溶液；
[0058] (3)將囊屯、溶液滴加到混合物溶液中（滴加速度為60滴/min) ,4000轉(zhuǎn)/分鐘攬拌 0.5小時;過0.3皿微孔濾膜，濾液在60°C和0.02個大氣壓下減壓蒸出乙醇1.2小時，-40°C冷 凍干燥7小時，制得光控祀向蛇毒多膚鋒納米制劑23g。
[0化9] 實施例7
[0060] 實施例1-6制得的光控祀向蛇毒多膚鋒納米制劑的粒徑和包封率實驗
[0061] 方法:采用2010年中國藥典第二部附錄IXE粒度和粒度分布測定方法第=法光散 射法測定納米粒徑；用二氯甲燒溶解囊材，用等量水萃取，采用BCA試劑盒測定水萃取液中 的蛋白含量，計算樣品中的蛋白量，包封率=樣品中的蛋白量/蛇毒多膚用量X 100%。
[0062] 結(jié)果:光控祀向蛇毒多膚鋒納米制劑粒徑范圍在300~500nm之間，包封率在75~ 85%。結(jié)果見表1。
[0063] 運表明該采用實施例1~6法制得的光控蛇毒多膚鋒納米制劑粒徑分布較均勻，具 有較高的包封率。
[0064] 表1光控祀向蛇毒多膚鋒納米制劑粒徑分布和包封率
[0066] 實施例8
[0067] 實施例1、2、3制得的光控祀向蛇毒多膚鋒納米制劑的光控釋藥實驗
[006引實驗方法：取2g實施例1、2、3制得的光控祀向蛇毒多膚鋒納米制劑，加入到50mL pH= 7.5憐酸緩沖液中，攬拌轉(zhuǎn)速50;rpm。每隔1小時取樣ImL，并補(bǔ)回ImL抑=7.5憐酸緩沖 液，直至12h。將樣品采用BCA試劑盒測定蛋白質(zhì)濃度，計算累積釋放率。同時測定實施例1、 2、3制得的光控祀向蛇毒多膚鋒納米制劑在30W白識燈照射下的累積釋放率。
[0069] 實驗結(jié)果:實施例1、2、3制得的光控祀向蛇毒多膚鋒納米制劑在無光照下釋藥緩 慢，8~IOh后累計釋藥80%，但光照后，其在5~化釋藥達(dá)90%，表明光照加速了藥物釋放。 結(jié)果見圖1，圖1為實施例1、2、3制得的光控祀向蛇毒多膚鋒納米制劑在光照下的累積釋放 率(即累積釋藥率）。
[0070] 本發(fā)明的光控祀向蛇毒多膚鋒納米制劑具有顯著鎮(zhèn)痛作用，通過W下實驗得W證 實。
[0071] 實施例1、2、3制得的光控祀向蛇毒多膚鋒納米制劑對小鼠的鎮(zhèn)痛實驗
[007^ 方法:將昆明種小鼠置于(55 ± 0.5) °C熱板上，觀察和記錄小鼠開始放在熱板上至 添后足的時間作為痛反應(yīng)潛伏期，選取痛反應(yīng)潛伏期為10~25s范圍內(nèi)的雌性小鼠90只，隨 機(jī)分為9組，每組10只。第I組腹腔注射生理鹽水(O.lml/lOg)，為陰性對照組;第2組ip嗎啡 lOmg/kg，為陽性對照組;第3~8組分別ip光控祀向蛇毒多膚鋒納米制劑(2mg/kg)無光照組 和光照組，光照組在給藥后給予小鼠30W白識燈光照1小時；第9組ip蛇毒鎮(zhèn)痛多膚原藥組 2mg/kg。分別于給藥后2,4h，她測定痛闊值小鼠祿后足時在熱板上的停留時間為痛闊 值）。如小鼠在熱板上停留60s后仍無痛反應(yīng)，應(yīng)立即取出，按60s計算。比較給藥組和對照組 的差異情況。結(jié)果見表2。
[0073] 結(jié)果：與陰性對照組相比，各給藥組在給藥后不同時間點出現(xiàn)的祿足的潛伏期均 明顯延長。光控祀向蛇毒多膚鋒納米制劑組的小鼠出現(xiàn)祿足的潛伏期初期小于蛇毒鎮(zhèn)痛多 膚原藥組，但4h后顯著變長;光照組4h釋藥顯著加快。提示本發(fā)明的光控祀向蛇毒多膚鋒納 米制劑具有光照加強(qiáng)鎮(zhèn)痛的作用。
[0074] 表2光控祀向蛇毒多膚鋒納米制劑對熱板所致的小鼠痛闊的抑制實驗
[0076]上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不受上述實施例的 限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化， 均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一種光控靶向蛇毒多肽鋅納米制劑，其特征在于：由含中藥光敏劑的囊殼和含蛇毒 鎮(zhèn)痛多肽鋅配合物的囊心組成。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述光控靶向蛇毒多肽鋅納米制劑的制備方法，其特征在于包括以 下步驟： (1) 將蛇毒多肽用磷酸或醋酸緩沖液溶解，加入鋅鹽，攪拌，加入乳化劑，繼續(xù)攪拌，得 到囊心溶液； (2) 將囊材用有機(jī)溶劑，配成囊材溶液;加入中藥光敏劑、乳化劑，攪拌，得到混合物溶 液； (3) 將囊心溶液滴加到步驟(2)的混合物溶液中，攪拌，過微孔濾膜，濾液，旋轉(zhuǎn)蒸出溶 劑，冷凍干燥，得到光控靶向蛇毒多肽鋅納米制劑。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述光控靶向蛇毒多肽鋅納米制劑的制備方法，其特征在于：步驟 (1)所述的蛇毒多肽為眼鏡蛇毒或複蛇毒中分尚的鎮(zhèn)痛多肽，分子量為7000~14000Da; 步驟(1)所述的乳化劑為吐溫60、聚氧乙烯硬脂酸酯或蔗糖脂肪酸酯中的一種以上； 步驟（1)所述鋅鹽為醋酸鋅;步驟(2)所述的囊材為卵磷脂/膽固醇復(fù)配物、聚乳酸乙醇 酸、聚乙丙交酯PLGA75、聚乙丙交酯PLGA50或聚乙丙交酯PLGA85的一種以上； 步驟(2)所述中藥光敏劑為脫鎂葉綠酸、姜黃素、竹紅菌素的一種以上;步驟(2)所述乳 化劑為司盤60、單硬脂酸甘油酯或月桂酸單甘油酯中的一種以上。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述光控靶向蛇毒多肽鋅納米制劑的制備方法，其特征在于:所述卵 磷脂/膽固醇復(fù)配物中卵磷脂:膽固醇質(zhì)量比為(2~3): 1; 所述竹紅菌素為竹紅菌甲素或竹紅菌乙素一種以上。5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述光控靶向蛇毒多肽鋅納米制劑的制備方法，其特征在于：步驟 (1)所述磷酸或醋酸緩沖液的用量為蛇毒多肽質(zhì)量的3~5倍，所述磷酸或醋酸緩沖液的pH 為4~6;步驟（1)所述鋅鹽的用量為蛇毒多肽質(zhì)量的0.5~2%;步驟（1)所述乳化劑的加入 量為蛇毒多肽質(zhì)量的0.5~3% ; 步驟(2)所述中藥光敏劑加入量為囊材質(zhì)量的0.1~1 %，所述乳化劑加入量為囊材質(zhì) 量的0.5~3%; 步驟(3)所述囊心溶液與混合物溶液的質(zhì)量比為1: (1~20)。6. 根據(jù)權(quán)利要求2所述光控靶向蛇毒多肽鋅納米制劑的制備方法，其特征在于：步驟 (1) 所述攪拌轉(zhuǎn)速為200~500轉(zhuǎn)/分鐘，攪拌時間為4~8小時;步驟(1)所述繼續(xù)攪拌的轉(zhuǎn)速 為200~1000轉(zhuǎn)/分鐘，所述攪拌時間為0.5~2小時； 步驟(2)所述攪拌轉(zhuǎn)速為500~2000轉(zhuǎn)/分鐘，攪拌時間為0.5~2小時； 步驟⑶所述攪拌轉(zhuǎn)速為1000~5000轉(zhuǎn)/分鐘，所述攪拌時間為0.5~2小時。7. 根據(jù)權(quán)利要求2所述光控靶向蛇毒多肽鋅納米制劑的制備方法，其特征在于：步驟 (2) 所述有機(jī)溶劑為乙醇、丙酮或二氯甲烷;步驟(2)所述囊材溶液的質(zhì)量濃度1~5%。8. 根據(jù)權(quán)利要求2所述光控靶向蛇毒多肽鋅納米制劑的制備方法，其特征在于：步驟 (3) 所述滴加的速度為20-80滴/min; 步驟(3)所述微孔濾膜的孔徑為0.1~0.5μπι，所述旋蒸去除溶劑的條件為于40~60°C 和0.01~0.1個大氣壓下蒸出溶劑，所述冷凍干燥的條件為于-30~-50°c冷凍干燥4~8小 時。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述光控靶向蛇毒多肽鋅納米制劑的應(yīng)用，其特征在于:所述光控靶 向蛇毒多肽鋅納米制劑用作鎮(zhèn)痛藥物，具有防治中樞性疼痛的作用。
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥的領(lǐng)域，公開了一種光控蛇毒多肽鋅納米制劑及其制備方法和用途。所述方法為：(1)將蛇毒多肽用磷酸或醋酸緩沖液溶解，加入鋅鹽，攪拌，加入乳化劑，繼續(xù)攪拌，得到囊心溶液；(2)將囊材用有機(jī)溶劑，配成囊材溶液；加入中藥光敏劑、乳化劑，攪拌，得到混合物溶液；(3)將囊心溶液滴加到步驟(2)的混合物溶液中，攪拌，過微孔濾膜，濾液，旋轉(zhuǎn)蒸出溶劑，冷凍干燥，得到光控靶向蛇毒多肽鋅納米制劑。本發(fā)明增強(qiáng)了蛇毒多肽的穩(wěn)定性；并且制劑的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，用于鎮(zhèn)痛藥物。
【IPC分類】A61K38/17, A61K9/51, A61K47/22, A61P25/00, A61K47/14
【公開號】CN105497873
【申請?zhí)枴緾N201510962906
【發(fā)明人】葉勇, 方菲
【申請人】華南理工大學(xué)
【公開日】2016年4月20日
【申請日】2015年12月17日