一種幼油草提取物及其治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的醫(yī)藥用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及中藥提取物領(lǐng)域，具體設(shè)及一種治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的幼油草提取物及 其制備方法，該提取物可W應(yīng)用于制備治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的藥物。
【背景技術(shù)】
[0002] 幼油草為等麻科植物花點(diǎn)草的全草。別名高墳草(《奚弁》）。
[0003] 原植物花點(diǎn)草為多年生小草本，高10~20厘米?；糠种?，具甸筒莖，莖細(xì)弱，稍透 明狀，被有上向的毛。葉互生;菱狀卵形或稍=角形，長和寬幾相等，約1~2厘米，先端純，基 部模形，邊緣具純圓銀齒，上面疏生長毛和點(diǎn)狀突起，下面疏生短柔毛?；▎涡?，雌雄同株； 花紫色;雄花序出于枝梢葉蔽，具細(xì)長梗;雌花序出于上部葉蔽;雄花花專5裂，雄蕊同數(shù);雌 花花專4裂，裂片有長白毛，雌蕊1，柱頭呈毛筆狀。瘦果卵形，有點(diǎn)狀突起?；ㄆ?月。果期5~ 6月。生于山麓陰濕處。分布長江流域中、下游及臺灣等地。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的發(fā)明目的在于提供一種新的幼油草提取物，另一個發(fā)明目的在于提供在 于一種上述幼油草提取物制備方法，此外還在于提供含有上述提取物的藥物制劑及利用該 提取物制備治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的藥物的用途。
[0005] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得W實(shí)現(xiàn)的：
[0006] -種幼油草提取物，該提取物由W下方法制備：
[0007] (a) W重量計(jì)，每100份藥材包含干燥的幼油草80~90份和干燥的丹參10~20份， 混合粉碎，用75 %乙醇溶液熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液； (b)將步驟(a)所得乙醇提取濃縮液用水稀釋，依次用石油酸、乙酸乙醋和水飽和的正下醇 萃取，減壓濃縮，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（C)正下醇萃取 物用水溶解，過濾，用大孔樹脂富集活性成分，先用10%乙醇沖洗8個柱體積除去大極性成 分，再用70%乙醇洗脫12個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮即得。
[000引為了能夠通過建立HPlX指紋圖譜的方法控制不同批次制備的提取物的批間差異， 所述提取物的液相分析方法為：
[0009]色譜柱:Agilent Zorbax Extent-ClS柱（4.6mmX250mm，5皿）；
[0010]流動化A為乙臘，B為0.5 %憐酸溶液；
[0011] 梯度洗脫程序：0.01 ~5min，A 10% 一 15%;5 ~10min，A 15% 一 48%;10 ~25min， A 48%一78%;25~30min，A 78%一 10%;
[0012] 流動相流速:1.0mL ? min-i;
[OOU] 檢現(xiàn)販長：248nm;
[0014]柱溫：35°C;
[001引進(jìn)樣量：10化。
[0016]藥物制劑，含有治療有效量的所述提取物和藥學(xué)上可接受的載體。
[0017] 所述的提取物在制備治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的藥物中的應(yīng)用。
[0018] 所述的藥物制劑在制備治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的藥物中的應(yīng)用。
[0019] 本發(fā)明提取物用作藥物時(shí)，可W直接使用，或者W藥物制劑的形式使用。
[0020] 所述藥物制劑含有治療有效量的本發(fā)明幼油草提取物，其余為藥物學(xué)上可接受 的、對人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0021] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 W及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物制劑W單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明提取物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等;用于注射時(shí)，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
[0022] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明通過對干燥的幼油草和丹參進(jìn)行提取、除雜、富集處理，能 得到具有治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的提取物;本發(fā)明提供的液相分析方法可W用于建立該提取物 的指紋圖譜，用于控制不同批次制備的提取物的批間差異。
【附圖說明】
[0023] 圖1為幼油草提取物HPLC液相圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0024] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不W此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可W對 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0025] 實(shí)施例1:幼油草提取物①制備(85份幼油草，15份丹參）
[0026] 藥材來源:幼油草和丹參購自安徽毫州中藥材市場。
[0027] 主要試劑:食品級乙醇購自上海凌峰化學(xué)試劑有限公司；醫(yī)藥級AB-8大孔樹脂購 自天津波鴻樹脂有限公司；乙臘為HPLC級，購于TEDIA; 85 %憐酸為HPLC級，購于TEDIA;色譜 用純凈水為哇哈哈純凈水。
[002引制備方法:將8.化g干燥幼油草根莖和1.化g干燥丹參混合粉碎，用75 %乙醇溶液 熱回流提取(2化X3次），合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液(2L);將所得乙醇 提取濃縮液用水稀釋至化，依次用石油酸(化X3次）、乙酸乙醋（化X3次）和水飽和的正下 醇（化X 3次）萃取，減壓濃縮，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物 232g;(c)正下醇萃取物用1.5L水溶解，醫(yī)用脫脂棉過濾，用AB-8大孔樹脂（2kg，柱體積 1.5L)富集活性成分，先用10%乙醇沖洗8個柱體積(1化)除去大極性成分，再用70%乙醇洗 脫12個柱體積(1化），收集70%洗脫液，減壓濃縮，即得幼油草提取物約150g。
[0029] 實(shí)施例2:幼油草提取物②制備(80份幼油草，20份丹參）
[0030] 制備方法:將8. Okg干燥幼油草根莖和2. Okg干燥丹參混合粉碎，用75 %乙醇溶液 熱回流提取(2化X3次），合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液(2L);將所得乙醇 提取濃縮液用水稀釋至化，依次用石油酸(化X3次）、乙酸乙醋（化X3次）和水飽和的正下 醇（化X 3次）萃取，減壓濃縮，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物 232g;(c)正下醇萃取物用1.5L水溶解，醫(yī)用脫脂棉過濾，用AB-8大孔樹脂（2kg，柱體積 1.5L)富集活性成分，先用10%乙醇沖洗8個柱體積(I化)除去大極性成分，再用70%乙醇洗 脫12個柱體積(1化），收集70%洗脫液，減壓濃縮，即得幼油草提取物約150g。
[0031] 實(shí)施例3:幼油草提取物③制備(90份幼油草，10份丹參）
[0032] 制備方法:將9. Okg干燥幼油草根莖和1. Okg干燥丹參混合粉碎，用75 %乙醇溶液 熱回流提取(2化X3次），合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液(2L);將所得乙醇 提取濃縮液用水稀釋至化，依次用石油酸(化X3次）、乙酸乙醋（化X3次）和水飽和的正下 醇（化X 3次）萃取，減壓濃縮，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物 232g;(c)正下醇萃取物用1.5L水溶解，醫(yī)用脫脂棉過濾，用AB-8大孔樹脂（2kg，柱體積 1.5L)富集活性成分，先用10%乙醇沖洗8個柱體積(1化)除去大極性成分，再用70%乙醇洗 脫12個柱體積(1化），收集70%洗脫液，減壓濃縮，即得幼油草提取物約150g。
[0033] 實(shí)施例4:幼油草提取物④制備(75份幼油草，25份丹參）
[0034] 制備方法:將7 .化g干燥幼油草根莖和2.化g干燥丹參混合粉碎，用75 %乙醇溶液 熱回流提取(2化X3次），合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液(2L);將所得乙醇 提取濃縮液用水稀釋至化，依次用石油酸(化X3次）、乙酸乙醋（化X3次）和水飽和的正下 醇（化X 3次）萃取，減壓濃縮，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物 232g;(c)正下醇萃取物用1.5L水溶解，醫(yī)用脫脂棉過濾，用AB-8大孔樹脂（2kg，柱體積 1.5L)富集活性成分，先用10%乙醇沖洗8個柱體積(1化)除去大極性成分，再用70%乙醇洗 脫12個柱體積(1化），收集70%洗脫液，減壓濃縮，即得幼油草提取物約150g。
[0035] 實(shí)施例5:幼油草提取物⑤制備(95份幼油草，5份丹參）
[0036] 制備方法:將9.化g干燥幼油草根莖和0.化g干燥丹參混合粉碎，用75 %乙醇溶液 熱回流提取(2化X3次），合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液(2L);將所得乙醇 提取濃縮液用水稀釋至化，依次用石油酸(化X3次）、乙酸乙醋（化X3次）和水飽和的正下 醇（化X 3次）萃取，減壓濃縮，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物 232g;(c)正下醇萃取物用1.5L水溶解，醫(yī)用脫脂棉過濾，用AB-8大孔樹脂（2kg，柱體積 1.5L)富集活性成分，先用10%乙醇沖洗8個柱體積(1化)除去大極性成分，再用70%乙醇洗 脫12個柱體積(1化），收集70%洗脫液，減壓濃縮，即得幼油草提取物約150g。
[0037] 實(shí)施例6:液相色譜分析
[003引供試品溶液配制：取實(shí)施例1方法制得的提取物5mg至50mL棟色容量瓶中，加30mL 10%乙臘水溶液超聲溶解，冷卻至室溫后，繼續(xù)加10%乙臘水溶液定容。分析方法如下：
[0039] 高效液相色譜儀:Agilent 1260,二元累；
[0040] 色譜柱:Agilent Zorbax Extent-ClS柱（4.6mmX250mm，5皿）；
[0041] 流動相:A為乙臘，B為0.5%憐酸溶液；
[0042] 梯度洗脫程序：0.01 ~5min，A 10% 一 15%;5 ~10min，A 15% 一 48%;10~25min， A 48%一78%;25~30min，A 78%一 10%;
[0043] 流動相流速:1. OmL ? min-i;
[0044] 檢測波長：248nm;
[0045] 柱溫：35°C;
[0046] 進(jìn)樣量：10化。
[0047] 用制備的10批次的幼油草提取物進(jìn)行分析，進(jìn)行色譜峰匹配，結(jié)果1~10號峰在10 批樣品色譜圖中均出現(xiàn)。因此標(biāo)定10個峰為共有色譜峰，據(jù)此建立該提取物的HPLC質(zhì)量控 制圖譜，結(jié)果見圖1。該10批次的幼油草提取物藥理活性相似。
[004引實(shí)施例7:提取物藥理試驗(yàn)
[0049] -、材料與方法
[0050] 1.1藥物：幼油草提取物①~⑤分別按照實(shí)施例1~5制得。秋水仙堿片，批號 100206，規(guī)格0.5mg/s，西雙版納版納藥業(yè)有限責(zé)任公司；取6片秋水仙堿，研磨，加蒸饋水至 200mL，混勻配制成濃度為0.15mg/mL秋水仙堿溶液。微晶尿酸鋼(M洲），參照Coderre方法， 194血蒸饋水加 SmLlmo 1/L化OH，煮沸，加 Ig尿酸，用ImLl