抗結(jié)腸癌的復(fù)方中藥及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于結(jié)腸癌治療技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種抗結(jié)腸癌的復(fù)方中藥及其制備方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 結(jié)腸癌是指結(jié)腸粘膜上皮在環(huán)境或遺傳等多種致癌因素作用下發(fā)生的惡性病變， 是常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率排在我國(guó)癌癥的前5位，在世界腫瘤的發(fā)生率中 也呈明顯逐年上升趨勢(shì)。由于結(jié)腸癌與其他癌癥一樣在起病上具有隱匿漸進(jìn)性，在病因上 具有不確定性，在病機(jī)上具有虛、痰、癖、毒的共性，在病性上具有正虛邪實(shí)、寒熱夾雜的特 性，在癥狀上具有復(fù)雜多變性，迄今為止尚無(wú)特效治療方法。目前，西醫(yī)治療結(jié)腸癌的方法 主要有手術(shù)、放化療等，但存在易復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，產(chǎn)生耐藥性等劣勢(shì)。
[0003] 癌癥之所以難治，因其復(fù)雜的病狀，單用某一味藥治療往往只是杯水車薪，然而， 中藥復(fù)方因具有多靶點(diǎn)多通道、不易產(chǎn)生耐藥性并可從整體上進(jìn)行全面調(diào)節(jié)等多種特點(diǎn)被 越來(lái)越多人所接受。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種組方合理、療效確切，臨床使用安全，不良反 應(yīng)較低的抗結(jié)腸癌的復(fù)方中藥及其制備方法。
[0005] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:抗結(jié)腸癌的復(fù)方中藥，由以下重 量份的原料藥材制成：白頭翁6-24份、半枝蓮10-30份、生半夏3-12份、薏苡仁15-30份、雞內(nèi) 金13-60份、茯苓9-40份、白花蛇舌草10-40份。
[0006] 上述抗結(jié)腸癌的復(fù)方中藥，由以下重量份的原料藥材制成：白頭翁12-20份、半枝 蓮20-30份、生半夏6-12份、薏苡仁20-30份、雞內(nèi)金15-30份、茯苓9-20份、白花蛇舌草20-40 份。
[0007] 上述抗結(jié)腸癌的復(fù)方中藥，由以下重量份的原料藥材制成：白頭翁12份、半枝蓮20 份、生半夏6份、薏苡仁30份、雞內(nèi)金30份、茯苓20份、白花蛇舌草20份。
[0008] 上述抗結(jié)腸癌的復(fù)方中藥的制備方法，按重量份稱取各原料藥材，加入原料藥材 總重8-12倍水浸泡0.5-1.5h，加熱煎煮提取2-4次，每次0.5-3h，趁熱過濾，濾液合并，濾液 濃縮成浸膏或干膏。
[0009] 在浸膏或干膏中加入適量藥用輔料，按常規(guī)方法制成制劑。
[0010] 本發(fā)明以廣西名中醫(yī)鄧家剛教授多年臨床經(jīng)驗(yàn)方為基礎(chǔ)，研制了一種抗結(jié)腸癌的 復(fù)方中藥（以下簡(jiǎn)稱復(fù)方半枝蓮），由以下重量份的原料藥材制成：白頭翁6-24份、半枝蓮 10-30份、生半夏3-12份、薏苡仁15-30份、雞內(nèi)金13-60份、茯苓9-40份、白花蛇舌草10-40 份。方中以半枝蓮、白花蛇舌草為君藥，二者均為性寒之品，功能清熱解毒，多用于熱毒癰腫 如肺癰、腸癰、癌腫等病癥；白頭翁清熱解毒、涼血止痢，半夏燥濕化痰、消痞散結(jié)，薏苡仁排 膿、解毒散結(jié)，三者輔助君藥解毒散結(jié)，共為臣藥;茯苓、雞內(nèi)金倶為健脾和胃之品，既可扶 正驅(qū)邪，又可防苦寒藥物傷脾礙胃，用作佐藥。諸藥配伍應(yīng)用，共奏清熱解毒，散結(jié)抑癌之功 效。臨床證實(shí)，本發(fā)明具有明顯減輕患者便秘結(jié)塞等癥狀，明顯延長(zhǎng)患者壽命的功效。藥效 學(xué)試驗(yàn)結(jié)果也證實(shí)本發(fā)明在體內(nèi)外均明顯抑制結(jié)腸癌細(xì)胞⑶L0205的生長(zhǎng)，且能夠上調(diào)凋 亡蛋白Bax和Puma，下調(diào)Bcl-2的表達(dá)。因此，本發(fā)明配方簡(jiǎn)單、制作簡(jiǎn)便，毒副作用小，給藥 方便，成本低廉，可應(yīng)用于抗結(jié)腸癌藥物的制備。
【附圖說明】
[0011]圖1是復(fù)方半枝蓮對(duì)C0L0205細(xì)胞的影響圖。
[0012]圖2是復(fù)方半枝蓮對(duì)⑶L0205細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的調(diào)控圖，圖中從左至右依次為 24h空白組，24h復(fù)方半枝蓮，48h空白組，48h復(fù)方半枝蓮，72h空白組，72h復(fù)方半枝蓮。
[0013]圖3是復(fù)方半枝蓮對(duì)結(jié)腸癌移植瘤體積的影響曲線圖。
[0014] 圖4是復(fù)方半枝蓮對(duì)結(jié)腸癌移植瘤體積的影響圖。
【具體實(shí)施方式】
[0015] 實(shí)施例1復(fù)方半枝蓮散劑
[0016] 配方：白頭翁1.2千克、半枝蓮2.0千克、生半夏0.6千克、薏苡仁3.0千克、雞內(nèi)金 3.0千克、茯苓2.0千克、白花蛇舌草2.0千克。
[0017]制法:按配方稱取各原料藥材，第一次加入原料藥材總重10倍量水，浸泡30min后， 加熱煎煮30min (水沸時(shí)開始計(jì)時(shí)），第二次加8倍量水，煎煮30min。合并2次煎液，濃縮至膏 狀，干燥粉碎，過1 〇〇目篩，分裝即得。
[0018]實(shí)施例2復(fù)方半枝蓮片劑
[0019]配方：白頭翁15千克、半枝蓮25千克、生半夏9千克、薏苡仁30千克、雞內(nèi)金20千克、 茯苳15千克、白花蛇舌草30千克。
[0020] 制法:按配方稱取各原料藥材，加入原料藥材總重10倍水浸泡0.5h，加熱煎煮提取 2次，每次60min，趁熱過濾，濾液合并，濾液濃縮干燥得干膏，干膏粉碎后，加入適量常用藥 用輔料后混合制粒，壓片，分裝即得。
[0021] 實(shí)施例3復(fù)方半枝蓮顆粒劑
[0022]配方：白頭翁20千克、半枝蓮30千克、生半夏12千克、薏苡仁20千克、雞內(nèi)金15千 克、茯苓9千克、白花蛇舌草40千克。
[0023]制法:按配方稱取各原料藥材，加入原料藥材總重12倍水浸泡0.5h，加熱煎煮提取 2次，每次30min，趁熱過濾，濾液合并，濾液濃縮至密度為1.2-1.3的浸膏，加入適量常用藥 用輔料后，混勻，濕法制粒，烘干，整粒，分裝即得。
[0024]藥效實(shí)驗(yàn)
[0025] 采用實(shí)施例1制得的復(fù)方半枝蓮作為以下實(shí)驗(yàn)一至三所用實(shí)驗(yàn)藥品。
[0026] 實(shí)驗(yàn)一復(fù)方半枝蓮對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖抑制作用
[0027] 1、材料與儀器
[0028] 1.1細(xì)胞株
[0029]結(jié)腸癌細(xì)胞株C0L0205，由中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)提供。
[0030] 1.2藥品與試劑
[0031] MTT(賽默飛世爾生物化學(xué)制品北京有限公司），胰蛋白酶（美國(guó)Amresco公司， 3518B039)，胎牛血清（美國(guó)GIBCO公司，1428479)，順鉑（中國(guó)齊魯制藥有限公司 (8090162DB));復(fù)方中所有藥材均購(gòu)自廣西南寧市仁愛醫(yī)院；其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。
[0032] 1.3儀器
[0033] 凍存管，75cm培養(yǎng)瓶，25cm培養(yǎng)瓶，IOcm培養(yǎng)皿，HHS恒溫水浴鍋(上海博訊實(shí)業(yè)有 限公司），SB25-12D超聲波清洗儀(寧波新芝生物科技股份有限公司），BT12?電子分析天平 (德國(guó)Sartorius公司），Millipore Simplicity-185超純水儀（美國(guó)MiIlipore公司），101A-3E電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海實(shí)驗(yàn)儀器廠有關(guān)公司），離心機(jī)(美國(guó)Thermo公司，ST16R)，全波長(zhǎng) 酶標(biāo)儀(EPO CH公司，ΒΙ0ΤΕΚ)，C02培養(yǎng)箱（美國(guó)TheymoForma381型），倒置顯微鏡(德國(guó)徠卡 公司）。
[0034] 2、實(shí)驗(yàn)方法
[0035]當(dāng)細(xì)胞存活率大于90%且處在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)，將新鮮培養(yǎng)的⑶L0205細(xì)胞用胰酶 消化，吹打分散細(xì)胞，利用細(xì)胞計(jì)數(shù)法計(jì)算，制成2 X 104個(gè)· ml/1懸浮液，共設(shè)6組，每組6個(gè) 復(fù)孔，以每孔IOOyL移接于96孔培養(yǎng)板，共接種三塊培養(yǎng)板，培養(yǎng)24h后，棄去原培養(yǎng)液，除空 白組加培養(yǎng)液外，其余各組加入含藥培養(yǎng)液各180yL，藥物濃度分別為陽(yáng)性組(順鉑）150/μ g · mL-1，復(fù)方半枝蓮高濃度組0.60/g · L-\中濃度組0.30/g · L-\低濃度組0.15/g · L一、 [0036]利用MTT法檢測(cè)復(fù)方半枝蓮對(duì)⑶L0205的抑制作用，藥物與細(xì)胞共同培養(yǎng)24、48、 72h后置于顯微鏡下拍照觀察細(xì)胞形態(tài)。每孔加入MTT 20yL(5.0/g · L-1)，繼續(xù)于37°C、5% C02培養(yǎng)箱內(nèi)溫育4h，終止培養(yǎng)，小心快速翻轉(zhuǎn)棄去孔內(nèi)培養(yǎng)液及藥物，每孔加入150yL DMSO，至于振蕩器上充分振蕩IOmin，使結(jié)晶充分溶解。檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率各個(gè)過程中均 不用PBS洗板，以免將細(xì)胞或生成的結(jié)晶洗落。用酶標(biāo)儀于490nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的吸光度 即OD值。細(xì)胞增殖抑制率=1-細(xì)胞存活率，即細(xì)胞增殖抑制率/% = ( 1-試驗(yàn)組OD值/空白組 OD值）X 100〇
[0037] 實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差G±S)表示，采用SPSS 21軟件包進(jìn)行方差分析。卩< 0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0038] 3、結(jié)果
[0039] 復(fù)方半枝蓮對(duì)人結(jié)腸癌CL0L205細(xì)胞增殖的抑制作用MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果，與空白組比 較，除低劑量在2 4 h (P > 0.0 5)外，其它各藥物組在不同時(shí)間段的0 D值均明顯減小（P < 0.01)。復(fù)方半枝蓮對(duì)CL0L205細(xì)胞增殖的抑制率隨著藥物劑量的增加而增大，成較好的量 效關(guān)系。復(fù)方半枝蓮高、中、低劑量對(duì)C0L0205細(xì)胞增殖的抑制率在48h最大，分別為 68.46%，63.11 %，54.91 %。具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。在倒置顯微鏡下觀察，空白組的細(xì)胞核質(zhì) 均勻，核仁清楚，細(xì)胞形態(tài)完整，生長(zhǎng)良好，形成貼壁的圓形細(xì)胞。復(fù)方半枝蓮干預(yù)后，復(fù)方 低劑量組24h時(shí)間點(diǎn)與空白組的細(xì)胞形態(tài)相似。其它藥物組細(xì)胞形態(tài)逐漸改變，細(xì)胞數(shù)逐漸 減少，細(xì)胞變形，形態(tài)不規(guī)則，體積縮小，折光性差，細(xì)胞懸浮、逐漸脫落而死亡。在加 MTT前 拍攝各組細(xì)胞形態(tài)，照片顯示的細(xì)胞形態(tài)與所測(cè)數(shù)值反映的結(jié)果基本相符合，結(jié)果如圖1所 不。
[0040] 表1不同濃度的復(fù)方半枝蓮對(duì)C0L0205細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率的影響β=6)
[0041]
[0042] 注:與空白組比較，々〈O.OS'PSO.Ol。
[0043] 實(shí)驗(yàn)二復(fù)方半枝蓮對(duì)結(jié)腸癌C0L0205細(xì)胞相關(guān)凋亡蛋白表達(dá)的影響
[0044] 1、材料與儀器
[0045] 1.1細(xì)胞株
[0046] 結(jié)腸癌細(xì)胞株C0L0205，由中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)提供。
[0047] 1.2藥品與試劑<