粘膜疫苗組合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及作為感染癥、癌的預(yù)防或治療劑有用，且能夠?qū)谇粌?nèi)粘膜、眼粘膜、 耳粘膜、生殖器粘膜、咽喉粘膜、呼吸道粘膜、支氣管粘膜、肺粘膜、胃粘膜、腸道粘膜或直腸 粘膜給藥的粘膜疫苗組合物。特別是本發(fā)明涉及通過將特定的脂多糖作為佐劑、與抗原一 起對粘膜表面給藥，能夠安全且有效地誘導(dǎo)全身性免疫應(yīng)答和粘膜免疫應(yīng)答的粘膜疫苗組 合物。
【背景技術(shù)】
[0002] 作為疫苗制劑的劑型，現(xiàn)在產(chǎn)品化的制劑大部分為注射劑。注射型疫苗存在如下 問題:誘導(dǎo)血中（全身性）的免疫應(yīng)答（IgG抗體的產(chǎn)生)而不會誘導(dǎo)粘膜中的免疫應(yīng)答（IgA 抗體的產(chǎn)生），雖然可以防止由于感染后所導(dǎo)致的病原體的增殖，但是難以防御由于粘膜途 徑所導(dǎo)致的病原體的感染自身。
[0003] 因此，近年由粘膜的疫苗接種受到關(guān)注，其中，使用流感病毒作為抗原的粘膜給藥 (經(jīng)鼻給藥)型疫苗的開發(fā)顯露頭角。
[0004] 粘膜給藥型疫苗不僅能夠誘導(dǎo)全身性免疫（IgG抗體的產(chǎn)生），而且還能夠誘導(dǎo)粘 膜免疫（IgA抗體的產(chǎn)生）。該IgA抗體的特征在于，不怎么嚴(yán)格區(qū)別成為對象的疾病的病原 體的類型，即使每年改變的病原體的流行型變化也能夠應(yīng)對，認(rèn)為對于防止流行病而言是 有效的。
[0005] 另外，經(jīng)鼻給藥型疫苗顯露頭角的理由之一，可列舉出對消化道粘膜給予抗原時， 容易受到胃酸的影響、蛋白分解酶的影響卻難以防止這些影響，與此相對，經(jīng)鼻對粘膜給予 抗原時，沒有這些影響。進(jìn)而，在鼻腔粘膜上存在被稱為NALT的抗原識別組織對于免疫應(yīng)答 而言是有效的也是理由之一。
[0006] 但是，對鼻腔粘膜的抗原的給藥，雖然效果高但是急性腦病等嚴(yán)重副作用的可能 性也高，另外對于老人、嬰兒等而言，經(jīng)鼻給藥自身繁雜且困難，進(jìn)而存在由于鼻涕等身體 上主要原因而得不到穩(wěn)定的效果的問題。
[0007] 另一方面，也進(jìn)行了很多想要將抗原經(jīng)口給藥，咽下后，在消化道粘膜(小腸)等誘 導(dǎo)全身性免疫和粘膜免疫的嘗試。此時擔(dān)心的是，如何防止由于胃酸所導(dǎo)致的抗原的分解、 由于蛋白分解酶所導(dǎo)致的抗原的分解。為了解決這些問題，含有大量的中和胃酸的抗酸劑、 或者通過微球等覆膜技術(shù)防護(hù)抗原的技術(shù)得到開發(fā)。
[0008] 但是，實際上開發(fā)成功的是，本來在胃酸中的穩(wěn)定性高的存活弱毒化脊髓灰質(zhì)炎 病毒疫苗、存活弱毒化輪狀病毒疫苗。
[0009] 作為在口腔粘膜途徑誘導(dǎo)粘膜免疫和全身性免疫的例子，提出了以下的報告。 [0010]專利文獻(xiàn)1中提出了在經(jīng)口（例如舌下給藥)組合物中含有一種以上的抗原和Toll 樣受體(TLR)激動劑的免疫原性組合物，作為抗原，公開了流感抗原，作為佐劑，公開了 TLR4 激動劑。
[0011]但是，專利文獻(xiàn)1中提出的免疫原性組合物中的TLR4激動劑在免疫誘導(dǎo)方面效果 弱，謀求可以誘導(dǎo)更強的免疫并且安全的佐劑。
[0012]另外，專利文獻(xiàn)2中提出了源自泛菌屬菌的脂多糖（lipopolysaccharide、LPS)，記 載了與以往的LPS相比安全性高，與抗原同時給藥的情況下免疫響應(yīng)得到增強。
[0013] 但是，專利文獻(xiàn)2中，對于對獲得性免疫的使用沒有明確的提及、例示，另外，對于 最合適的佐劑/抗原的比率也沒有提及。進(jìn)而，專利文獻(xiàn)2中，對于源自泛菌屬菌的LPS的作 為粘膜疫苗的使用也沒有明確提及。
[0014] 另外，專利文獻(xiàn)3中提出了含有病原體的滅活抗原、以及作為免疫刺激劑(佐劑）的 Poly(I:C)與酵母聚糖的組合的疫苗，記載了使用源自成團(tuán)泛菌(Pantoea agglomerans)的 脂多糖(LPS)作為佐劑，使用流感病毒作為病原體的例子。
[0015]但是，專利文獻(xiàn)3中記載的使用源自成團(tuán)泛菌(Pantoea agglomerans)的脂多糖 (LPS)的疫苗的例子是對鼻粘膜給藥，沒有示范對口腔內(nèi)粘膜等特定的粘膜的給藥。通常若 給藥部位不同則有效的佐劑不同是技術(shù)常識。由此由該專利文獻(xiàn)3中記載的使用源自成團(tuán) 泛菌(Pantoea agglomerans)的脂多糖（LPS)的疫苗的例子，在口腔內(nèi)粘膜、眼粘膜、耳粘 膜、生殖器粘膜、咽喉粘膜、呼吸道粘膜、支氣管粘膜、肺粘膜、胃粘膜、腸道粘膜或直腸粘 膜，源自成團(tuán)泛菌(Pantoea agglomerans)的脂多糖(LPS)是否發(fā)揮效果還不明確。
[0016]現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn) [0017]專利文獻(xiàn)
[0018] 專利文獻(xiàn)1:日本特表2013-527218號公報 [0019] 專利文獻(xiàn)2:日本專利第4043533號公報 [0020] 專利文獻(xiàn)3:日本特開2009-242367號公報

【發(fā)明內(nèi)容】

[0021] 發(fā)明要解決的問題
[0022] 本發(fā)明鑒于上述現(xiàn)狀，其目的在于，提供安全，作為感染癥、癌的預(yù)防或治療劑有 用，可以有效地誘導(dǎo)全身性免疫應(yīng)答和粘膜免疫應(yīng)答，且能夠?qū)谇粌?nèi)粘膜、眼粘膜、耳粘 膜、生殖器粘膜、咽喉粘膜、呼吸道粘膜、支氣管粘膜、肺粘膜、胃粘膜、腸道粘膜或直腸粘膜 給藥的疫苗組合物。
[0023] 用于解決問題的方案
[0024]本發(fā)明人等為了解決上述問題而進(jìn)行深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在對口腔內(nèi)粘膜、眼粘 膜、耳粘膜、生殖器粘膜、咽喉粘膜、呼吸道粘膜、支氣管粘膜、肺粘膜、胃粘膜、腸道粘膜或 直腸粘膜的給藥中，將源自革蘭氏陰性細(xì)菌的脂多糖或其鹽作為佐劑，與抗原一起對口腔 內(nèi)粘膜、眼粘膜、耳粘膜、生殖器粘膜、咽喉粘膜、呼吸道粘膜、支氣管粘膜、肺粘膜、胃粘膜、 腸道粘膜或直腸粘膜給藥，并且使得與抗原的質(zhì)量比處于特定范圍內(nèi)，由此可以安全且有 效地誘導(dǎo)全身性免疫應(yīng)答和粘膜免疫應(yīng)答，從而完成了本發(fā)明，所述革蘭氏陰性細(xì)菌選自 由沙雷氏菌屬（Serratia)、勒克菌屬（Leclercia)、拉恩菌屬（RahneIla)、嗜熱酸菌屬 (Acidical dus)、嗜酸菌屬（Acidiphili um)、酸球形菌屬（Acidisphaera )、酸胞菌屬 (Acidocella)、酸單胞菌屬（Acidomona s )、亞細(xì)亞菌屬（Asaia)、別爾納普氏菌屬 (Belnapia)、脆弱球菌屬(Craurococcus)、葡糖醋桿菌屬(Gluconacetobacter)、葡糖桿菌 屬(Gluconobacter)、柯扎克氏菌屬（Kozak ia)、利亞桿菌屬（Leahi bacter)、鼠球菌屬 (Muricoccus)、新亞細(xì)亞菌數(shù)（Neoasaia)、嗜油單胞菌屬（Oleomonas)、副脆弱球菌屬 (Paracraurococcus)、紅球狀菌屬(Rhodopila)、玫瑰球菌屬(Roseococcus)、如比特皮達(dá) (Rubritepida)、糖桿菌屬（Saccharibac ter)、星狀菌屬（St el la)、斯瓦米納坦氏菌屬 (Swaminathania)、替考球菌屬(Teichococcus )、扎瓦爾金氏菌屬(Zavarzinia)、假單胞菌 屬(Pseudomonas)、無色桿菌屬(Achromobacter)、芽抱桿菌屬(Bacillus)、甲焼袋狀菌屬 (Methanoculleus)、甲焼八疊球菌屬(Methanosarcina)、梭菌屬（Clostridium)、微球菌屬 (Micrococcus)、黃桿菌屬（Flavobacterium)、泛菌屬（Pantoea)、醋酸桿菌屬 (Acetobacter)、發(fā)酵單胞菌屬（Zymomonas )、黃單胞菌屬（Xanthomonas)和腸桿菌屬 (Enterobacter)組成的組中的至少一種D
[0025] 即，本發(fā)明為一種粘膜疫苗組合物，其特征在于，其為對選自由人或動物的口腔內(nèi) 粘膜、眼粘膜、耳粘膜、生殖器粘膜、咽喉粘膜、呼吸道粘膜、支氣管粘膜、肺粘膜、胃粘膜、腸 道粘膜和直腸粘膜組成的組中的至少一種粘膜給藥的粘膜疫苗組合物，其含有至少一種抗 原和作為免疫刺激劑的源自革蘭氏陰性細(xì)菌的脂多糖或其鹽，所述革蘭氏陰性細(xì)菌選自由 沙雷氏菌屬（Serratia)、勒克菌屬（Leclercia)、拉恩菌屬（RahneIla)、嗜熱酸菌屬 (Ac idi caldus)、嗜酸菌屬（Acidiphi I ium)、酸球形菌屬（Ac idi sphaera)、酸胞菌屬 (Acidocella)、酸單胞菌屬（Acidomona s )、亞細(xì)亞菌屬（Asaia)、別爾納普氏菌屬 (Belnapia)、脆弱球菌屬(Craurococcus)、葡糖醋桿菌屬(Gluconacetobacter)、葡糖桿菌 屬（Gluconobacter)、柯扎克氏菌屬（Kozakia)、利亞桿菌屬（Leahibacter)、鼠球菌屬 (Muricoccus)、新亞細(xì)亞菌數(shù)（Neoasaia)、嗜油單胞菌屬（Oleomonas)、副脆弱球菌屬 (Paracraurococcus)、紅球狀菌屬(Rhodopila)、玫瑰球菌屬(Roseococcus)、如比特皮達(dá) (Rubritepida)、糖桿菌屬（Saccharibac ter)、星狀菌屬（St el la)、斯瓦米納坦氏菌屬 (Swaminathania)、替考球菌屬(Teichococcus)、扎瓦爾金氏菌屬(Zavarzinia)、假單胞菌 屬(Pseudomonas)、無色桿菌屬(Achromobacter)、芽抱桿菌屬(Bacillus)、甲焼袋狀菌屬 (Methanoculleus)、甲焼八疊球菌屬(Methanosarcina)、梭菌屬（Clostridium)、微球菌屬 (Micrococcus)、黃桿菌屬（Flavobacterium)、泛菌屬（Pantoea)、醋酸桿菌屬 (Acetobacter)、發(fā)酵單胞菌屬（Zymomonas )、黃單胞菌屬（Xanthomonas)和腸桿菌屬 (Enterobacter)組成的組中的至少一種，上述免疫刺激劑與上述抗原的質(zhì)量比（免疫刺激 劑的總質(zhì)量/抗原的總質(zhì)量)為0.002~500。
[0026] 另外，本發(fā)明的粘膜疫苗組合物優(yōu)選為液體制劑、噴霧劑、半固體制劑或固體制 劑，上述半固體制劑和固體制劑通過體液和/或體溫溶解。
[0027] 另外，本發(fā)明的粘膜疫苗組合物優(yōu)選為通過體液和/或體溫溶解的固體制劑。
[0028] 另外，本申請發(fā)明的粘膜疫苗組合物優(yōu)選用于誘導(dǎo)體液免疫。
[0029] 另外，本申請發(fā)明的粘膜疫苗組合物中，上述抗原優(yōu)選為源自感染癥的抗原或癌 抗原。
[0030] 另外，上述半固體制劑優(yōu)選為凝膠劑、軟膏劑、乳膏劑、經(jīng)陰道劑、栓劑或糖漿劑。
[0031] 另外，上述固體制劑優(yōu)選為薄膜制劑、崩解片或速溶片。
[0032] 上述抗原優(yōu)選為選自由源自流感病毒的抗原、源自人類乳頭瘤病毒的抗原和源自 肺炎球菌的抗原組成的組中的至少一種。
[0033] 另外，上述抗原優(yōu)選為源自流感病毒的抗原。
[0034] 以下對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。
[0035] 本發(fā)明的粘膜疫苗組合物含有至少一種抗原和免疫刺激劑。
[0036] 本發(fā)明的粘膜疫苗組合物中，上述免疫刺激劑與上述抗原的質(zhì)量比（免疫刺激劑 的總質(zhì)量/抗原的總質(zhì)量)為0.002~500。若不足0.002則不能誘導(dǎo)充分強度的免疫，若超過 500則產(chǎn)生安全性上的問題。上述免疫刺激劑與上述抗原的質(zhì)量比的優(yōu)選的下限為0.01，優(yōu) 選的上限為100。通過上述免疫刺激劑與上述抗原的質(zhì)量比處于該范圍內(nèi)，可以確保安全性 的同時誘導(dǎo)充分強度的免疫。
[0037] 本說明書中所稱的"抗原的質(zhì)量"，除了特別記載的情況之外，指的是疫苗中的抗 原中含有的抗原蛋白質(zhì)的質(zhì)量。因此，抗原為源自病毒等生物體的物質(zhì)的情況下，指的是該 抗原中含有的全部蛋白質(zhì)的質(zhì)量。
[0038]作為本發(fā)明中使用的抗原，優(yōu)選為源自感染癥的抗原或癌抗原。
[0039] 對于源自感染癥的抗原而言，為了預(yù)防疾病，需要通過疫苗給藥來預(yù)先形成抗體， 因此優(yōu)選利用本發(fā)明。本發(fā)明的粘膜疫苗組合物適于使得體液免疫活化。
[0040] 作為該源自感染癥的抗原，若為感染性病原體和源自感染性病原體的抗原則沒有 特別限定。
[00