去除殘余表面活性劑，沉淀物復(fù)溶于Mi I ipore水中，3次水洗，干燥，即得PLGA納米粒。
[0067]實(shí)施例12
離子交聯(lián)法制備微粒:殼聚糖溶于稀醋酸水溶液，過夜溶脹，配成0.5%(w/v)的殼聚糖溶液，三聚磷酸鈉溶于蒸餾水，配成0.5%(w/v)的溶液，不斷磁力攪拌，以滴速約為3ml/min將三聚磷酸鈉液加入殼聚糖液中，溶液由澄清漸變?yōu)榈{(lán)色乳光，根據(jù)乳光判斷納米粒的形成。
[0068]實(shí)施例13
靜電噴霧法制備微粒:常溫，將PLGA溶解在三氟乙醇中48hr，磁力攪拌，15%w/v，將此溶液轉(zhuǎn)入連有高壓發(fā)生器的微量注射栗中，調(diào)節(jié)電壓V 5-35kV，接收距離L 9cm，溶液流速f
0.6ml/h，電噴，招箔接收板或載玻片接收所得微粒，干燥箱中干燥2d，即得納米粒。掃描電鏡觀察所制微粒形貌。
[0069]實(shí)施例14
速釋片的制備:碳酸氫鈉:氫氧化鎂=1:2，硬脂酸鎂1%、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉3%、Starch1500 10%，100目過篩，將上述制備的微粒適量，全部混合均勻，直接壓片，硬度為6 kg/mm2 ο
[0070]實(shí)施例15
速釋片的制備:甘露醇40%、微晶纖維素35%、適量乳糖，過100目篩，等量遞增混勻，加5%聚乙烯吡咯烷酮K30溶液為黏合劑，制粒，60°C烘干I h，整粒，再與適量羧甲基纖維素鈉、微粉硅膠混勻，壓片。
[0071]實(shí)施例16
胃溶包衣:將速釋片置包衣鍋內(nèi)，包衣鍋傾角45°，進(jìn)風(fēng)溫度35 ± 5°C，噴槍霧化空氣壓力414KPa，噴霧速率10g/min，速釋片溫度控制在25 ± 2°C，轉(zhuǎn)速15r/min。
[0072]實(shí)施例17
胃溶包衣:取pH敏感點(diǎn)在1-2的胃溶型丙烯酸樹脂(VI號(hào))，用丙酮/乙醇(l/l，v /V)配成2.0%的溶液，附加劑用量10-20%，混勻，調(diào)節(jié)包衣增重為3%。調(diào)節(jié)包衣鍋轉(zhuǎn)速，使片芯呈拋物線滾動(dòng)、旋轉(zhuǎn)打磨，約60±5 r/min。吹風(fēng)機(jī)進(jìn)風(fēng)預(yù)熱片芯，溫度約50°C，調(diào)節(jié)進(jìn)風(fēng)位置，出風(fēng)速度，使包衣液均勻噴出。15min后，觀察片芯，邊緣光滑，無缺損或裂片，包衣片不粘片，衣膜均勻平整;包衣完畢，取出，約60°C烘箱干燥;稱重，以包衣增重百分比作為包衣控制指標(biāo)。
[0073]實(shí)施例18
微粒的胃溶包衣:制得的微粒置流化床包衣裝置中沸騰流化，噴槍噴灑5-7%的乙醇羥丙基甲基纖維素液，鼓風(fēng)干燥，排氣口排出揮發(fā)溶劑，得包衣厚度均勻、無粘連的胃溶包衣微粒。
[0074]實(shí)施例19
胃溶包衣膠囊及微粒的填充:高效包衣機(jī)，噴嘴直徑0.5-1.5 mm,霧化壓力0.1MPa，風(fēng)量60-80m3/h，物料溫度23-25 °C，噴液速度1.5-2.5g/min，數(shù)顯千分尺測(cè)定厚度，25 °C下熟化30-40 min，包衣完成，取出胃溶包衣膠囊，室溫干燥。灌裝胃溶空心膠囊，10%乙基纖維素溶液封口，置干燥器備用?？杉尤脒m量抗粘劑硬脂酸鎂或二氧化硅等，或稀釋劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑等。
[0075]實(shí)施例20
腸溶速釋片崩解測(cè)定:參考國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心的靜態(tài)方法，將篩籃(孔內(nèi)徑400μπι)放入裝有2ml人工腸液的試管中，再垂直放入37°C水浴中，待試管內(nèi)溫上升后，將I片腸溶速釋片置篩籃中，從腸溶速釋片接觸人工腸液開始計(jì)時(shí)，至完全崩解停止，立刻將篩籃提離試管，篩網(wǎng)上無明顯留存，測(cè)試6片，均<15s。
[0076]實(shí)施例21
胃溶速釋片崩解測(cè)定:參考國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心的靜態(tài)方法，將篩籃(孔內(nèi)徑400μπι)放入裝有2ml人工胃液的試管中，再垂直放入37°C水浴中，待試管內(nèi)溫上升后，將I片胃溶速釋片置篩籃中，從胃溶速釋片接觸人工胃液開始計(jì)時(shí)，至完全崩解停止，立刻將篩籃提離試管，篩網(wǎng)上無明顯留存，測(cè)試6片，均<15s。
[0077]實(shí)施例22
大鼠體內(nèi)定位試驗(yàn):SD大鼠，30只，體重216.37 ± 17.53g，禁食5h，200粒腸溶速釋生物粘附微粒用水灌胃，分別在灌胃后即刻，10 ’，20 ’后處死，打開腹腔，從賁門起銳性分離暴露胃腸腔，至回盲處，肉眼觀察腸溶速釋生物粘附微粒在胃腸道的分布。結(jié)果顯示，灌胃后即刻胃中完整和少量溶脹腸溶速釋生物粘附微粒160.70 ± 17.33粒，十二指腸溶脹或溶出腸溶速釋生物粘附微粒35.90± 15.47粒，灌胃后10’胃中完整和少量溶脹腸溶速釋生物粘附微粒1.40± 1.96粒，十二指腸溶脹或溶出腸溶速釋生物粘附微粒186.40 ±7.76粒，灌胃后20 ’胃中完整和少量溶脹腸溶速釋生物粘附微粒0.70 ±0.82粒，十二指腸溶脹或溶出腸溶速釋生物粘附微粒191.50±4.03粒?？梢?，所述的腸溶速釋生物粘附劑在十二指腸定位溶出。
[0078]實(shí)施例23
大鼠體內(nèi)定位試驗(yàn):SD大鼠，20只，體重223.17 ± 20.04g，禁食5h，200粒胃溶速釋生物粘附微粒用水灌胃，分別在灌胃后5 ’，15 ’，打開腹腔，從賁門起銳性分離暴露胃腸腔，肉眼觀察胃溶速釋生物粘附微粒在胃腸道的分布。結(jié)果顯示，灌胃后5 ’，胃中溶脹或溶出胃溶速釋生物粘附微粒190.92± 13.12粒，灌胃后15’胃中溶脹或溶出腸溶速釋生物粘附微粒193.75 ± 7.84粒?？梢?，所述的胃溶速釋生物粘附劑在胃部定位溶出。
[0079]實(shí)施例24
急性毒性試驗(yàn):昆明鼠20只，體重22.75 ± 2.63g，隨機(jī)分為2組，試驗(yàn)組ip生物粘附材料浸提液，50ml/Kg，對(duì)照組ip等量生理鹽水。注射后24h、48h、72h觀察一般狀況、毒性反應(yīng)和死亡動(dòng)物數(shù)。結(jié)果顯示，所有試驗(yàn)組動(dòng)物均無運(yùn)動(dòng)遲緩、體重下降、腹瀉、癱瘓、呼吸抑制、驚厥、死亡等體征。
[0080]實(shí)施例25
亞急性毒性試驗(yàn):SD大鼠24只，體重214.61 ± 18.72g，隨機(jī)分為2組。生物粘附材料細(xì)粉，生理鹽水配成5%混懸液，qod上午9時(shí)ig，對(duì)照組ig等量生理鹽水。觀察一般狀況和體重，2W、4W時(shí)每組各處死6只，取心、肝、腎、脾組織，稱重，并固定作病理組織切片，SPSSl2.0統(tǒng)計(jì)分析軟件分析器官指數(shù)(器官重量/動(dòng)物重量)，組間采用方差分析，組內(nèi)采用t檢驗(yàn)，以p〈0.05為差異有顯著性意義。結(jié)果顯示，所有試驗(yàn)組動(dòng)物均無運(yùn)動(dòng)遲緩、體重下降等體征，試驗(yàn)組器官指數(shù):心臟0.454 ±0.062，肝臟3.203 ±0.254，腎臟0.869 ±0.077，脾臟0.269 土
0.085，對(duì)照組器官指數(shù):心臟0.463 ± 0.039，肝臟3.317 ± 0.472，腎臟0.878 ±0.071，脾臟
0.273±0.064，與對(duì)照組相比，心、肝、腎、脾各器官指數(shù)的差異均無顯著性意義(P>0.05)。病理組織切片未發(fā)現(xiàn)明顯異常。
[0081 ] 實(shí)施例26
皮膚刺激試驗(yàn):新西蘭兔3只，體重2.75±0.13kg，無菌生物粘附材料細(xì)粉10g，加入50ml生理鹽水，高溫高壓消毒，37 °C浸提72h，2500rpm離心，5min，取上清。脊背兩側(cè)備皮，面積約10 X 10cm，一側(cè)10個(gè)位點(diǎn)用浸提液id，0.5ml,另一側(cè)等量生理鹽水，觀察各位點(diǎn)在注射后Ih、24h、48h、7 2h后體征。結(jié)果顯不，注射后Ih、24h、48h、7 2h試驗(yàn)側(cè)及對(duì)照側(cè)均無明顯紅腫、潰爛及滲液等體征出現(xiàn)，未見明顯皮膚刺激癥狀。
[0082]實(shí)施例27
離體胃粘膜粘附試驗(yàn):昆明鼠8只，體重21.36±2.41g，禁食24h(供水)，頸椎脫位處死，立即取胃，自賁門沿胃大彎切開至幽門，平鋪于載玻片，均勻鋪撒胃溶定位速釋生物粘附微粒，置飽和氯化鈉溶液容器中，密閉保濕lOmin，取出，用pHl.3的鹽酸氯化鈉溶液20ml/min沖洗5min，觀察微粒脫落面積，并等距離數(shù)碼拍照，必要時(shí)圖像分析比較脫落面積。結(jié)果顯示，僅肉眼觀察即胃溶定位速釋生物粘附微粒無明顯脫落。
[0083]實(shí)施例28
離體胃粘膜粘附試驗(yàn):SD大鼠10只，體重227.83± 19.41g，禁食24h(供水)，同上取胃，將胃溶速釋生物粘附劑壓成平片，用人工胃液潤(rùn)濕10 min后，橋連扭力天平并固定，天平指針調(diào)零。升降平臺(tái)放置存有胃粘膜的培養(yǎng)皿(保濕)，調(diào)節(jié)升降平臺(tái)，使胃粘膜恰與潤(rùn)濕后的胃溶速釋生物粘附劑接觸粘附，10 min后，予胃溶速釋生物粘附劑2mg/s拉力，直至粘膜與胃溶速釋生物粘附劑恰好分開，記錄天平讀數(shù)。結(jié)果顯示，胃溶速釋生物粘附劑對(duì)胃粘膜具有良好粘附作用。
[0084]實(shí)施例29 離體腸粘膜粘附試驗(yàn):SD大鼠10只，體重231.42 ± 15.89g，禁食24h (供水)，頸椎脫位處死，立即取十二指腸至空腸上段，平鋪，PH6.8的磷酸鹽緩沖液沖洗，置飽和氯化鈉溶液容器中，密閉保濕。將腸溶速釋生物粘附劑壓成平片，用PH6.8的磷酸鹽緩沖液潤(rùn)濕10 min后，橋連扭力天平并固定，天平指針調(diào)零。升降平臺(tái)放置存有小腸粘膜的培養(yǎng)皿(保濕)，調(diào)節(jié)升降平臺(tái)，使小腸粘膜恰與潤(rùn)濕后的腸溶速釋生物粘附劑接觸粘附，10 min后，予腸溶速釋生物粘附劑2mg/s拉力，直至粘膜與腸溶速釋生物粘附劑恰好分開，記錄天平讀數(shù)。結(jié)果顯示，腸溶速釋生物粘附劑對(duì)十二指腸至空腸上段粘膜具有良好粘附作用。
[0085]實(shí)施例30
在體灌注粘膜粘附試驗(yàn)(腸溶):SD大鼠6只，體重253.10 ± 19.24g，禁食24h (供水)，烏拉坦麻醉，腹部中線切開，賁門部結(jié)扎，鈍性分離胃、小腸整個(gè)腸段，沖洗內(nèi)容物，遠(yuǎn)端結(jié)扎，胃近端與小腸遠(yuǎn)端兩端分別接玻璃管，胃近端玻璃管接蠕動(dòng)栗。取腸溶速釋生物粘附微粒200粒，混懸于100 ml生理鹽水中，將腸溶速釋生物粘附微?；鞈乙汗嗳?，收集流出物并計(jì)數(shù)流出腸溶速釋生物粘附微粒粒數(shù)，計(jì)算不同部位的包衣微粒滯留率。腸溶速釋生物粘附微粒在不同部位的粘附性能不同，在胃、小腸的粘附性能分別為3.5 3 ± 0.21 %，8 7.3 6 土5.59%ο
[0086]實(shí)施例31
在體灌注粘膜粘附試驗(yàn)(胃溶):SD大鼠6只，體重244.31 ± 17.37g，禁食24h(供水)，烏拉坦麻醉，腹部中線切開，賁門部結(jié)扎，鈍性分離胃、小腸整個(gè)腸段，沖洗內(nèi)容物，遠(yuǎn)端結(jié)扎，胃近端與小腸遠(yuǎn)端兩端分別接玻璃管，胃近端玻璃管接蠕動(dòng)栗。取胃溶速釋生物粘附微粒200粒，混懸于100 ml生理鹽水中，將胃溶速釋生物粘附微粒混懸液灌入，收集流出物并計(jì)數(shù)流出胃溶速釋生物粘附微粒粒數(shù)，計(jì)算不同部位的包衣微粒滯留率。胃溶速釋生物粘附微粒在不同部位的粘附性能不同，在胃、小腸的粘附性能分別為90.13±3.74%，8.45 土
0.67%。
[0087]實(shí)施例32
離體灌注粘膜粘附試驗(yàn)(腸溶):SD大鼠10只，體重230.07±15.83g，頸椎脫位處死，腹部中線切開，取出十二指腸，用PH