黃柏內(nèi)酯在制備治療肺纖維化、慢性肺炎、慢性呼吸道疾病藥物中的應(yīng)用及其藥物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及到黃柏內(nèi)酯在制備治療肺纖維化及慢性肺炎藥物中的應(yīng)用，屬于制藥
技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 肺纖維化是一大類疾病的總稱，醫(yī)學(xué)上將肺纖維化歸屬為肺間質(zhì)病，肺間質(zhì)纖維 化是肺組織損傷后常見的病理過程，表現(xiàn)為早期的彌漫性肺泡炎、后期的成纖維細(xì)胞過度 增殖和細(xì)胞外基質(zhì)過度沉積，可引起呼吸衰竭，死亡率高達(dá)50%-70%。導(dǎo)致肺纖維化的原 因很多，常見的有環(huán)境、職業(yè)、物理和化學(xué)因素等，例如石棉、礦物、粉塵、化療藥物、放射損 傷等，一些風(fēng)濕免疫性疾病也可伴發(fā)肺纖維化。肺纖維化是一種預(yù)后很差的疾病，大部分特 發(fā)性肺纖維化(IPF)患者被確診后，平均生存期僅2年，5年生存率僅30%-50% (KeyJrLL，et al.NewEngland Journal ofMedicine.l995;332(24):1594)〇
[0003] 研究表明，IPF是以彌漫性肺泡炎、Π 型肺泡上皮和血管內(nèi)皮增生以及肺間質(zhì)纖維 化為主要病理特征。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)于IPF發(fā)病機(jī)制尚無明確定論，但大部分學(xué)者達(dá)成的共識(shí) 是以肺泡上皮細(xì)胞損傷，主要是Π 型上皮細(xì)胞損傷為起因引起的一系列反應(yīng)。
[0004] Wilson等研究了肺纖維化的免疫學(xué)機(jī)制。指出在損傷-炎癥-修復(fù)的三期過程中任 何一項(xiàng)或多項(xiàng)過程的失調(diào)，均可造成肺纖維化的發(fā)生（Wilson M，et al.Mucosal immunology. 2009; 2(2): 103 .)。炎癥能導(dǎo)致各種細(xì)胞因子分泌失調(diào)，生理性愈合轉(zhuǎn)變?yōu)椴?理性纖維化。結(jié)合其他免疫學(xué)研究結(jié)果，肺纖維化的進(jìn)程大致分為3個(gè)階段。
[0005] 第一階段，肺臟受到損傷或其他有害刺激，成纖維細(xì)胞的細(xì)胞外基質(zhì)產(chǎn)生細(xì)胞被 活化。
[0006] 第二階段，活化的細(xì)胞外基質(zhì)產(chǎn)生細(xì)胞發(fā)生結(jié)構(gòu)和表型的改變，產(chǎn)生大量細(xì)胞外 基質(zhì)（ECM)。同時(shí)胞內(nèi)的促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)和核轉(zhuǎn)錄因子(NF-kB )通路被激 活，促進(jìn)產(chǎn)生大量的細(xì)胞因子。通過旁分泌，介導(dǎo)包括巨噬細(xì)胞在內(nèi)的炎癥細(xì)胞向受刺激部 位移動(dòng)。T細(xì)胞被激活，分泌促纖維化生長(zhǎng)因子，如白細(xì)胞介素（IL)和腫瘤壞死因子(TNF-a) 等。巨噬細(xì)胞促進(jìn)纖維原細(xì)胞增殖與分化，同時(shí)分泌包括轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子13(TGF-i3)和IL-I在 內(nèi)的多種細(xì)胞因子。
[0007] 第三階段，損傷因素持續(xù)存在，造成反復(fù)損傷。成纖維細(xì)胞繼續(xù)被激活，產(chǎn)生更多 的ECM。細(xì)胞因子持續(xù)不斷的引起組織炎癥和膠原過度表達(dá)，ECM不斷沉積，肺纖維化逐漸形 成，最終特發(fā)部位肺功能喪失。
[0008] 目前臨床上對(duì)于肺纖維化的治療缺乏有效手段。糖皮質(zhì)激素和免疫抑制藥物等雖 能改善肺纖維化的癥狀，延緩疾病發(fā)展，但本身不是專一治療肺纖維化的藥物，具有強(qiáng)烈的 副作用。剛獲得Π )Α批準(zhǔn)的吡非尼酮(pirfenidone)是目前唯一針對(duì)肺纖維化的治療藥物， 其效果還有待臨床檢驗(yàn)。
[0009] 黃柏內(nèi)酯(obaculactone)是一類植物中提取的內(nèi)酯類化合物。對(duì)該化合物在藥理 學(xué)方面的活性研究及報(bào)道非常少。曾有報(bào)道該化合物對(duì)皮膚移植排斥、皮膚炎癥等具有良 好的抑制作用（Wang，et al · Int Immunopharmacol .2015Sep;28(l) : l_9.Gong，et al.Biochem Pharmacol.2010Jul 15;80(2):218-25·)。另一方面，大劑量的黃柏內(nèi)酯展現(xiàn) 出一定的抗菌、抗炎、抗瘧疾、抗腫瘤作用(石慧等.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)2014,42(4): 128.)

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010]本發(fā)明的目的是研究黃柏內(nèi)酯作為藥物在肺纖維化、慢性肺炎及炎癥相關(guān)的慢性 呼吸道疾病中的應(yīng)用。
[0011]本發(fā)明采用的技術(shù)方案為:黃柏內(nèi)酯在制備治療肺纖維化疾病藥物中的應(yīng)用。 [0012] 其中黃柏內(nèi)酯(obaculactone)的結(jié)構(gòu)式如下：
[0014] 所述肺纖維化疾病為慢性肺炎引發(fā)的肺纖維化疾病或矽肺。
[0015] 所述肺纖維化疾病為石棉、礦物、粉塵、化療藥物、放射損傷引發(fā)的肺纖維化疾病。
[0016] 所述肺纖維化疾病為風(fēng)濕免疫性疾病引發(fā)的肺纖維化疾病。
[0017] 本發(fā)明還公開了一種用于治療肺纖維化的藥物，其有效成分為黃柏內(nèi)酯。
[0018] 本發(fā)明還公開了黃柏內(nèi)酯在制備治療慢性肺炎藥物中的應(yīng)用。
[0019] 本發(fā)明還公開了一種用于治療慢性肺炎的藥物，其有效成分為黃柏內(nèi)酯。
[0020] 本發(fā)明還公開了黃柏內(nèi)酯在制備治療慢性支氣管炎、慢性阻塞性肺疾病或哮喘藥 物中的應(yīng)用。
[0021 ]黃柏內(nèi)酯口服能夠有效地，劑量依賴性地改善博來霉素誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化損傷 及其發(fā)病過程的炎癥癥狀。黃柏內(nèi)酯可以改善小鼠的體重下降，抑制肺纖維化病變小鼠的 臟器系數(shù)以及肺干重/濕重比。對(duì)小鼠的肺組織切片觀察可以發(fā)現(xiàn)，口服黃柏內(nèi)酯明顯地劑 量依賴性地改善了肺部損傷，減少了膠原沉積。通過對(duì)肺纖維化病變小鼠肺灌洗液和組織 的考察發(fā)現(xiàn)，口服黃柏內(nèi)酯可顯著降低肺灌洗液中的蛋白含量;抑制炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和炎癥 因子分泌;降低羥脯氨酸含量，改善組織生化指標(biāo)。
[0022] 對(duì)膠原合成的檢測(cè)表明，黃柏內(nèi)酯可以劑量依賴性的下調(diào)α-SMA和膠原蛋白的生 成，這一效應(yīng)是基于黃柏內(nèi)酯對(duì)小鼠纖維化肺組織中TGF-β信號(hào)通路的抑制。
[0023] 以上結(jié)果提示，黃柏內(nèi)酯可以應(yīng)用于包括肺纖維化、慢性肺炎、矽肺、慢性支氣管 炎、慢性阻塞性肺疾病、哮喘在內(nèi)的多種炎癥介導(dǎo)的慢性肺部疾病。
【附圖說明】
[0024]圖1.黃柏內(nèi)酯對(duì)小鼠博來霉素誘導(dǎo)肺纖維化的改善作用。(A)黃柏內(nèi)酯(25,50mg/ kg)灌胃給藥，各組小鼠的體重變化。（B)黃柏內(nèi)酯（15，30mg/kg)灌胃給藥，對(duì)小鼠肺臟器系 數(shù)的影響。（C)黃柏內(nèi)酯（15,30mg/kg)灌胃給藥，對(duì)小鼠肺臟干重/濕重比例的影響。（D)HE 染色及masson染色對(duì)小鼠肺臟組織及膠原沉積的檢查結(jié)果。放大倍數(shù)X 200。（E)HE組織檢 查定量。（？)11^8 8〇11染色檢查定量。結(jié)果以1116311±8.(1.表示。#?〈0.05，##?〈0.01，￥8正常小 鼠；*P〈0 · 05，**P〈0 · 05，vs模型小鼠 （Students ' t test)。
[0025] 圖2.黃柏內(nèi)酯對(duì)肺纖維化小鼠肺灌洗液炎癥的抑制作用。（A)黃柏內(nèi)酯對(duì)肺纖維 化小鼠肺灌洗液總蛋白含量的影響。⑶黃柏內(nèi)酯對(duì)肺纖維化小鼠肺灌洗液總細(xì)胞數(shù)、中性 粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞數(shù)的影響。（C)黃柏內(nèi)酯對(duì)肺纖維化小鼠肺灌洗液炎癥因子含量的影響。 結(jié)果以mean土 s.d.表示。##P〈0.01，vs正常小鼠；*Ρ〈0·05,林P〈0.05，vs模型小鼠 (Students't test)。
[0026] 圖3.黃柏內(nèi)酯對(duì)肺纖維化小鼠肺組織生化指標(biāo)的影響。（A)黃柏內(nèi)酯對(duì)肺纖維化 小鼠肺組織羥脯氨酸的抑制作用。（B)黃柏內(nèi)酯促進(jìn)谷胱甘肽表達(dá)，抑制丙二醛和過氧化物 酶活性。（C)黃柏內(nèi)酯抑制小鼠纖維化肺組織中icaml，vcaml，iNOS和cox2的表達(dá)。結(jié)果以 mean 土 s · d ·表不。##P〈0 · 01，vs正常小鼠；*P〈0 · 05，**P〈0 · 05，vs模型小鼠 （Students ' t test)〇
[0027] 圖4.黃柏內(nèi)酯對(duì)肺纖維化小鼠肺組織膠原合成及TGF-β信號(hào)通路的影響。（A-B) Western blot檢測(cè)α-SMA及膠原生成。（C-D)免疫組化檢測(cè)組織局部α-SMA生成及其定量。 (E-F)黃柏內(nèi)酯對(duì)肺纖維化小鼠肺組織TGF-β信號(hào)通路的。結(jié)果以mean 土 s . d.表示。##P〈 0 · 01，vs正常小鼠；*P〈0 · 05，**P〈0 · 05，vs模型小鼠 （Students ' t test)。
[0028] 下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
【具體實(shí)施方式】
[0029] 1.黃柏內(nèi)酯的藥理試驗(yàn)
[0030] 1)小鼠慢性肺炎致肺纖維化模型的誘導(dǎo)
[0031] 博來霉素介導(dǎo)的小鼠肺纖維化動(dòng)物模型(氣管滴注法）