性脊髓側(cè)索硬化癥(ALS)的藥效學(xué)考察評價(jià)，具體 方法如下：購買hS0Dl-G93A轉(zhuǎn)基因小鼠30只和野性型B6SJLF1/J+/+小鼠6只，野生型的 B6SJLF1/J+/+小鼠作為正常對照NC組(η = 6)，將hS0Dl-G93A轉(zhuǎn)基因小鼠隨機(jī)分為5組，分別 命名為:ALS對照組(η = 6 )，陽性藥物利魯唑治療組(Ri luzole，η = 6)，地黃治療組（梓醇 10mg/kg，η = 6)，黃苗注射液組（12g/kg，η = 6)，梓醇+地黃注射液組(η = 6)。具體分組及給 藥劑量和給藥方式等如表1所示：
[0033] 表1、實(shí)驗(yàn)小鼠具體分組及給藥劑量和給藥方式
[0036]然后每4d評估其進(jìn)水量和進(jìn)食量一次，評估其進(jìn)食和體重變化。體重測定方法為 第60天開始記錄小鼠體重，每隔4天記錄一次，最后記錄小鼠的平均體重。測量時(shí)間選在每 天的10時(shí)到13時(shí)之間，電子稱的稱重范圍是0.1至300g之間，其結(jié)果如圖1和圖2所示。結(jié)果 顯示，地黃組、黃芪組和梓醇+地黃注射液組較對照組實(shí)驗(yàn)小鼠在體重和飲食方面均明顯增 加，表明黃芪、地黃或其組合物對ALS小鼠具有增加體重和飲食的作用。
[0037]小鼠神經(jīng)運(yùn)動(dòng)功能的評價(jià)采用一般狀況評分法，即從第60天開始，參考VercelIi 等人研究的 1_5分評分法（參考文獻(xiàn)Vercelli A，Mereuta 0M，Garbossa D，Muraca G， Mareschi K,Rustichelli D，et al.Human mesenchymal stem cell transplantation extends survival,improves motor performance and decreases neuroinflammation in mouse model of amyotrophic lateral sclerosis.Neurobiology of Disease.2008； 31:395-405)，具體標(biāo)準(zhǔn)如下：
[0038] 5分:無運(yùn)動(dòng)功能障礙；
[0039] 4分:將小鼠懸吊時(shí)出現(xiàn)后肢伸展異?；蛘痤?；
[0040] 3分：明顯的后肢無力、步態(tài)異常；
[0041 ] 2分:雙后肢完全癱瘓，爬行僅靠前肢；
[0042] 1分:雙后肢完全癱瘓，并且將小鼠仰臥后30s內(nèi)小鼠不能翻轉(zhuǎn)；
[0043] 注:4分為發(fā)病時(shí)間；1分為死亡時(shí)間；
[0044] 懸吊時(shí)間測定：第60天開始進(jìn)行小鼠前、后肢抓力測定，測量神經(jīng)肌肉運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度， 每隔10天測一次，抓力感受裝置是由平行的金屬絲(直徑5mm)構(gòu)成的，使其傾斜于地面45°， 將小鼠置于感受器緩慢旋轉(zhuǎn)180°，裝置離地面20cm預(yù)防小鼠掉落不足以造成傷害，秒表記 錄小鼠在鋼絲抓握的時(shí)間，以60s為限，大于60s記60,每只小鼠測量三次，結(jié)果如表2所示。 [0045]表2、小鼠懸吊前后肢抓力
[0047] 結(jié)果顯示，在130天后地黃組、黃芪組和梓醇+地黃注射液組較對照組實(shí)驗(yàn)小鼠在 吊前后肢抓力方面優(yōu)于對照組，表明黃芪、地黃或其組合物對ALS小鼠的懸吊前后肢抓力。
[0048] 垂直桿測試：垂直桿測試是較直接檢測運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)和平衡的一種方法，木質(zhì)圓形木 桿，直徑約2cm，長60cm，小鼠置于水平位置的木桿中心，逐漸向上抬高90°，正常小鼠順著木 桿向上行或者下行且不掉落，運(yùn)動(dòng)功能缺陷的小鼠將在45°時(shí)滑落，結(jié)果如表3所示。
[0049] 表3、垂直桿測試結(jié)果
[0051]結(jié)果顯示，在130d后地黃組、黃芪組和梓醇+地黃注射液組較對照組實(shí)驗(yàn)小鼠在運(yùn) 動(dòng)協(xié)調(diào)性方面優(yōu)于對照組，表明黃芪、地黃或其組合物對ALS小鼠能夠增強(qiáng)ALS小鼠的運(yùn)動(dòng) 協(xié)調(diào)能力。
[0052]墨汁印記分析:將小鼠放在長70cm，寬IOcm的木制凹槽上，凹槽底面鋪上長寬相當(dāng) 的紙帶，將小鼠前后肢腳掌用墨汁染色后放在凹槽的一端，引誘小鼠使其運(yùn)動(dòng)到另一端，完 成后找出留在紙帶上的個(gè)活動(dòng)時(shí)的3個(gè)腳印取平均數(shù)作為一側(cè)步長值，兩側(cè)步長的平均值 作為統(tǒng)計(jì)，結(jié)果如表4所示。
[0053] 表4、墨汁印記步長分析
[0055] 結(jié)果顯示，注射130天后，地黃組、黃芪組和梓醇+地黃注射液組墨汁印記步長大于 對照組，表明黃芪、地黃或其組合物能夠增強(qiáng)ALS小鼠的步長。
[0056]生存期判定:將小鼠側(cè)臥位放置在平板上，如其不能在30s內(nèi)翻身為正常姿勢者判 定為死亡，該日記錄為小鼠死亡時(shí)間，生存期為小鼠從出生到死亡的天數(shù)。
[0057]各組發(fā)病時(shí)間、疾病顯性持續(xù)期(發(fā)病-死亡時(shí)間）、存活時(shí)間統(tǒng)計(jì)結(jié)果如表5所示。 [0058]表5、各組發(fā)病時(shí)間、疾病顯性持續(xù)期(發(fā)病-死亡時(shí)間）、存活時(shí)間
[0060] 結(jié)果顯示，地黃組、黃芪組和梓醇+地黃注射液組的發(fā)病時(shí)間和存活時(shí)間均延長， 并且發(fā)病時(shí)間至死亡時(shí)間也延長，表明黃芪、地黃或其組合物能夠防治和延長ALS的生存時(shí) 間。
[0061 ] 實(shí)施例3
[0062]坐骨神經(jīng)損傷動(dòng)物模型的建立:用3.5 %水合氯醛按0.1ml/10g劑量腹腔注射麻醉 動(dòng)物，綁定后，常規(guī)消毒，備皮。用手術(shù)刀片劃開皮膚在右側(cè)股后部作正中縱形切口，頓性分 離肌肉暴露梨狀肌下緣處坐骨神經(jīng)。止血鉗鉗夾坐骨神經(jīng)致第三齒，共鉗夾四次，每次15s。 完畢后將神經(jīng)歸位，縫合皮膚。假手術(shù)組僅暴露坐骨神經(jīng)不鉗夾，然后縫合傷口。
[0063]動(dòng)物分組與給藥:將造模成功的60只小鼠隨機(jī)分為五組:假手術(shù)組、模型組、地黃 醇提物組(60g/kg)、黃芪醇提物組(60g/kg，濃縮至2.4g/ml濃度）、梓醇組，每組12只。造模 后第二天開始給藥，每天一次，最長持續(xù)21天。給藥情況如下:模型組給予生理鹽水0.1ml/ IOg;地黃和黃芪醇提物組灌胃給藥〇. lml/lOg;梓醇組腹腔注射給藥0. lml/10g。
[0064]分時(shí)間點(diǎn)取雙側(cè)腓腸肌:每個(gè)組分別在造模后7d、14d、21d這三個(gè)時(shí)間點(diǎn)上取材。 每組在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)上處死6只小鼠。處死小鼠后立即解剖將雙側(cè)腓腸肌股骨內(nèi)外髁起點(diǎn)至 跟骨結(jié)節(jié)止點(diǎn)完整取下，剝離粘連的結(jié)締組織，在光鏡下觀察肌纖維形態(tài)，結(jié)果如圖3所示。 結(jié)果顯示，假手術(shù)組骨骼肌細(xì)胞橫切面，可見細(xì)胞橫截面積較大，形態(tài)較規(guī)則，結(jié)構(gòu)清晰，排 列整齊，細(xì)胞間隙較小。造模后各組肌纖維橫截面積與假手術(shù)組相比明顯減少，且表現(xiàn)為形 態(tài)不規(guī)則，大小不一，排列紊亂，皺縮明顯，細(xì)胞間隙明顯增寬，且隨失神經(jīng)時(shí)間延長萎縮加 重。與模型組相比，各治療組肌細(xì)胞萎縮情況明顯改善，肌纖維呈現(xiàn)輕中度萎縮，但排列較 整齊，形態(tài)較規(guī)則。
[0065]然后測定腓腸肌濕重比，具體方法為:取出完整腓腸肌后，立即用分析天平進(jìn)行精 密稱量。稱重后，留取樣本，計(jì)算濕重比。濕重比=手術(shù)側(cè)腓腸肌重量/非手術(shù)側(cè)腓腸肌重 量，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果如表6所示。
[0066] 表6、不同時(shí)間點(diǎn)腓腸肌濕重比（X 土 s，η = 6)
[0068] *P〈0.01VS假手術(shù)組;#P〈0.01 VS模型組
[0069] 結(jié)果顯示，與假手術(shù)組相比，造模各組腓腸肌的濕重比在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)皆不同程度 的降低(p〈0.01)，且隨時(shí)間推移降低越明顯；與模型組相比，各治療組在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的小鼠 腓腸肌濕重比均明顯增高(P〈〇.01)。表明各治療組可明顯延緩腓腸肌肌濕重比的降低，且 梓醇組效果最佳。
[0070] 腓腸肌SOD活力測定，具體方法如下：將5組剩余兩端的腓腸肌用預(yù)冷的PBS(pH = 7.3)洗去血污，濾紙吸干水分，稱重，按1:9 (w: V)比例加入4°C預(yù)冷的I3BS，冰浴勻漿，4°C， 6000r/min離心20min，取上清液用于測定。測定采用黃嘌呤氧化酶法，測定結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分 析，結(jié)果如表7所示。
[0071] 表7、不同時(shí)間點(diǎn)腓腸肌SOD活性
[0073] *P〈0.01VS假手術(shù)組;#P〈0.01 VS模型組
[0074] 結(jié)果顯示，模型組腓腸肌SOD活性同假手術(shù)組相比顯著降低，即神經(jīng)損傷后骨骼肌 萎縮減少SOD活性。各治療組與模型組相比，腓腸肌SOD活性顯著提升(P〈0.01)。
[0075] 腓腸肌MDA含量測定，測定方法同SOD活力測定，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果如表8所示。
[0076] 表8、不同時(shí)間點(diǎn)腓腸肌MDA含量
[0078] *P〈0.01VS假手術(shù)組;#P〈0.01 VS模型組
[0079] 結(jié)果顯示，同假手術(shù)組相比，造模后各組的腓腸肌MDA含量顯著增加(P〈0.01SP〈 〇.05)。各治療組與模型組相比，腓腸肌MDA含量均顯著降低(P〈0.01)。
[0080]上述結(jié)果表明，地黃、梓醇及黃芪均能有效改善坐骨神經(jīng)損傷導(dǎo)致的肌萎縮，具有 抗氧化損傷的作用。
[0081 ]肌纖維橫截面積測定，具體方法如下:將切取新鮮失神經(jīng)腓腸肌中部，4 %多聚甲 醛固定；10 %、20 %、3