條件下，確定本發(fā)明的實(shí)施例1-3的陰道內(nèi)環(huán)裝置 的體外每天釋放分布圖。將本發(fā)明的藥物遞送裝置放置到含有20ml水的合適的燒瓶中，并 置于37°C軌道(60rpm)振動(dòng)孵育箱中。用替換的釋放培養(yǎng)基每天取樣幾天，接著此后進(jìn)行常 規(guī)取樣。通過HPLC定量釋放，并收集每天和累積的釋放數(shù)據(jù)。
[0090] 本領(lǐng)域技術(shù)人員將很容易理解，下面的實(shí)施例中證明的釋放速率和釋放量不是限 制性的，而且可以被操作以通過例如，改變插入物中藥物物質(zhì)的裝載量，改變插入物中水溶 性釋放增強(qiáng)劑的裝載量和/或類型，和/或改變插入物的尺寸，或這些參數(shù)的一些或全部的 混合，來依照要求改變釋放速率和/或釋放量。
[0091] 實(shí)施例1
[0092] 牛血清白蛋白從陰道內(nèi)藥物遞送裝置的持續(xù)釋放
[0093] 根據(jù)如上所述的一般方法制造包含單個(gè)通道的有機(jī)硅彈性體陰道環(huán)。還根據(jù)如上 所述的一般方法制造了包含1. 〇 %w/w BSA，20.0%w/w水溶性釋放增強(qiáng)劑(甘氨酸，葡萄糖， PVP或PEG 3400)和79.0%w/w LSR-9-9508-30有機(jī)硅彈性體(Dow Corning)的有機(jī)硅彈性 體插入物，其具有7.6_的想要長(zhǎng)度。將單個(gè)插入物插入到有機(jī)硅彈性體陰道環(huán)中形成的通 道中。如上所述進(jìn)行體外釋放實(shí)驗(yàn)，除了使用BCA?[bicinchoninic acid，一種用于分析蛋 白的試劑盒中化合物]蛋白微測(cè)定試劑盒(PierCe，US)進(jìn)行定量外。表1中提供了 14天的累 積釋放數(shù)據(jù)。
[0094] 表1.牛血清白蛋白（BSA)從包含單個(gè)插入物的陰道環(huán)的累積釋放，該單個(gè)插入物 從不同的水溶性釋放增強(qiáng)劑構(gòu)建。BSA裝載量=1.0 % w/w，20.0 % w/w的水溶性釋放增強(qiáng)劑 裝載量。
[0095]
[0096] 應(yīng)當(dāng)理解BSA本身不是藥物。這里選擇BSA作為分子量為66.43kDa的蛋白，以證實(shí) 大分子14天的持續(xù)釋放。
[0097] 實(shí)施例2
[0098] 單克隆抗體2F5從陰道內(nèi)藥物遞送裝置的持續(xù)釋放
[0099] 根據(jù)如上所述的一般方法制造包含單個(gè)通道的有機(jī)硅彈性體陰道環(huán)。如下制備包 含2F5的有機(jī)硅彈性體插入物。首先通過冷凍干燥與甘氨酸（10% w/w)混合的2F5溶液(10% w/w)，從2F5原液（13.0lmg/ml)除去水。干燥以后，甘氨酸的剩余部分(30 %w/w)與冷凍干燥 的2F5-甘氨酸塊狀物混合。通過在DAC 150FVZ-K Speedmixer中，以3000rpm混合2F5-甘氨 酸混合物與有機(jī)硅彈性體(1^1?-9-9508-30,50%￥/￥)(0〇￥(：(^11丨即)30秒，來制備暴露的有 機(jī)硅插入物。然后將混合物插入到2ml注射器中，人工注射到直徑為3mm的PVC管中，并允許 RT固化24小時(shí)。該時(shí)間以后，將棒切割成9mm的長(zhǎng)度，然后使用解剖刀將PVC外殼從固化的有 機(jī)硅彈性體插入物小心地移走。然后將單個(gè)插入物放置到陰道環(huán)裝置的通道中。表2和3提 供了 30天的體外每天和累積釋放，并顯示了 28天的持續(xù)釋放。
[0100] 表2.!11￥11^&2?5從包含單個(gè)插入物的陰道環(huán)的每天釋放。2?5裝載量=7.5%，水 溶性釋放增強(qiáng)劑(甘氨酸）以22.5%w/w的裝載量。
[0101]
[0102] 表3.HIV mAb 2F5從包含單個(gè)插入物的陰道環(huán)的累積釋放。2F5裝載量=7.5%，水 溶性釋放增強(qiáng)劑(甘氨酸）以22.5%w/w的裝載量。
[0103]
[0104]
[0105] 實(shí)施例3
[0106] HIV包膜蛋白gpl40從陰道內(nèi)藥物遞送裝置的持續(xù)釋放
[0107] 根據(jù)如上所述的一般方法制造包含單個(gè)通道的有機(jī)硅彈性體陰道環(huán)。如下制備包 含HIV包膜蛋白gpl40的有機(jī)硅彈性體插入物。通過冷凍干燥gpl40/甘氨酸緩沖液制備包含 gp 140和甘氨酸（重量比為2: 98)的固體混合物。通過在DAC 150FVZ-K Speedmixer中，以 3000印111，50:50重量比，混合8?140-甘氨酸混合物與與有機(jī)硅彈性體〇^1?-9-9508-30,50% w/w)(Dow Corning)30秒，來制備暴露的有機(jī)娃插入物。最終的插入物包含重量比為1:49: 50的gpl40,甘氨酸和有機(jī)硅彈性體。然后將混合物插入到2ml注射器中，人工注射到直徑為 3_的PVC管中，并允許在室溫下固化24小時(shí)。該時(shí)間以后，將插入物切割成9_的長(zhǎng)度，然后 使用解剖刀將PVC外殼從固化的有機(jī)硅彈性體插入物小心地移走。然后將單個(gè)插入物放置 到陰道環(huán)裝置的單個(gè)通道中。表4和5提供了28天的體外每天和累積釋放數(shù)據(jù)。
[01 08]表4. gp 140從包含單個(gè)插入物的陰道環(huán)的每天釋放數(shù)據(jù)。gp 140裝載量=1.0 % w/ w;水溶性釋放增強(qiáng)劑(甘氨酸）以49.0 % w/w的裝載量。
[0111 ]表5. gp 140從包含單個(gè)插入物的陰道環(huán)的累積釋放數(shù)據(jù)。gp 140 = 1.0 %w/w的裝載 量;水溶性釋放增強(qiáng)劑(甘氨酸）以49%w/w的裝載量。
[0109]
[0110]
[0112]
[0113] 用于體外釋放研咒的方案-實(shí)施例4-6
[0114] 將藥物遞送裝置放置于帶有10ml無菌水的樣品小瓶中；蓋上小瓶并放置于37°C軌 道(60rpm)振動(dòng)孵育箱(Unitron HT Infors)中。用完全更換的釋放培養(yǎng)基(無菌水)進(jìn)行每 天取樣14天，接著每周兩次取樣/更換另外的2周。其中帶有單個(gè)包含藥物的插入物的棒狀 藥物遞送裝置用于實(shí)施例4-6中進(jìn)行的溶出研究。如果裝載有羊毛罌紅，BSA或2F5的棒狀插 入物原位處于環(huán)狀裝置主體中，這種藥物遞送裝置是可以預(yù)期的釋放分布圖的精確代表， 也即，藥物將僅僅從藥物遞送裝置的兩個(gè)開口端釋放。
[0115] 實(shí)施例4
[0116] 水溶性釋放增強(qiáng)劑的類型和濃度對(duì)羊毛罌紅釋放的影響。
[0117] 有機(jī)娃彈性體LSR9-9508-30由NuSil Technology LLC(Carpinteria,USA)提供。 這是一種由兩部分組成的鉑催化的有機(jī)硅彈性體，其中鉑催化劑包含在B部分中。羊毛罌紅 購(gòu)自 Sigma-Aldrich(Gillingham，UK)。使用Elga Purelab Maxima系統(tǒng)獲得超純水。內(nèi)徑為 3.35mm，外徑為4.64mm的醫(yī)學(xué)級(jí)有機(jī)硅管購(gòu)自BDH(Belfast，UK) aH 5時(shí)羊毛罌紅的水溶性 大于20 % w/w，分子量為793Da。
[0118]如下面的表6中所述的制備包含羊毛罌紅的插入物制劑。分別使用總共2g質(zhì)量的 羊毛罌紅/水溶性釋放增強(qiáng)劑/有機(jī)硅制劑。在DAC150FVZ-K Speedmixer中，以3000rpm，首 先通過混合想要濃度的合適組分(也即，羊毛罌紅，A和B部分有機(jī)硅彈性體和水溶性釋放增 強(qiáng)劑)30秒，來制造棒狀藥物遞送裝置。然后將該混合物吸收到注射器中，并注射到上述的 有機(jī)硅管(長(zhǎng)度為100mm，內(nèi)徑為3.35mm)中。然后使管在室溫下固化24小時(shí)，該時(shí)間以后，將 管切割成長(zhǎng)度為15mm的部分，每個(gè)長(zhǎng)度都為一個(gè)棒狀的藥物遞送裝置。
[0119] 使用Biotek Powerwave微量培養(yǎng)板讀數(shù)器，以檢測(cè)波長(zhǎng)630nm，利用KC junior軟 件，對(duì)釋放的羊毛罌紅濃度進(jìn)行定量。獲得l〇〇ng/ml-100μg/ml范圍內(nèi)羊毛罌紅的線性校正 曲線(R2 = 0.997)。
[0120] 羊毛罌紅從覆蓋的有機(jī)硅棒制劑連續(xù)釋放4周，該制劑具有各種不同的水溶性釋 放增強(qiáng)劑，以一種水溶性釋放增強(qiáng)劑裝載量(表6)范圍。根據(jù)它們的低毒性和它們的物理化 學(xué)差異選擇水溶性釋放增強(qiáng)劑;單糖（葡萄糖），簡(jiǎn)單氨基酸(甘氨酸），相當(dāng)高分子量蛋白 (牛血清白蛋白，BSA)和不同分子量的兩種聚合物聚乙二醇(MW: 3,500,這里稱為PEG)和羥 乙基纖維素(MW:90,000,這里稱為HEC)。圖2和3舉例說明了羊毛罌紅從棒狀藥物遞送裝置 的典型釋放分布圖，該裝置帶有單個(gè)包含羊毛罌紅的插入物，該插入物中含有〇,5，10,20， 30，40和50%裝載量的PEG和HEC作為插入物中的水溶性釋放增強(qiáng)劑。圖2和3的數(shù)據(jù)表明，相 較于沒有水溶性釋放增強(qiáng)劑的棒(〇%)，當(dāng)制劑中包含的低濃度的水溶性釋放增強(qiáng)劑（5-10%)時(shí)，僅僅為羊毛罌紅的每天釋放提供小的改善或沒有改善。只有當(dāng)水溶性釋放增強(qiáng)劑 的濃度增加到20%或高于時(shí)，觀察到增加的每天釋放。羊毛罌紅從不同的制劑的釋放速率 在4周的研究中是線性的。
[0121] 圖4顯示了羊毛罌紅從帶有單個(gè)包含羊毛罌紅的插入物的棒狀藥物遞送裝置的累 積釋放，該插入物中包含50%裝載量的5種不同的水溶性釋放增強(qiáng)劑。很明顯相較于其他的 水溶性釋放增強(qiáng)劑，甘氨酸提供了最高的釋放增加特性。相較于次好的水溶性釋放增強(qiáng)劑 HEC，28天以后，甘氨酸提供了兩倍的BSA累積釋放。甘氨酸是優(yōu)選的水溶性釋放增強(qiáng)劑。
[0122] 表6.羊毛罌紅制劑。
[0123]
[0124]
[0125] *CSD是截面的直徑。
[0126] 表6a.利用BSA，羊毛罌紅的體外累積釋放數(shù)據(jù)。
[0127]
[C
[0129]表6b.利用葡萄糖，羊毛罌紅的體外累積釋放數(shù)據(jù)。
[0130]
[0131 ]表6c.利用甘氨酸，羊毛罌紅的體外累積釋放數(shù)據(jù)。
[0132]
[0133] 表6d.利用HEC，羊毛罌紅的體外累積釋放數(shù)據(jù)。 [01341
[0135]
[0136] 表6e.利用PEG，羊毛罌紅的體外累積釋放數(shù)據(jù)。
[0137]
[0138] 涉及羊毛罌紅的溶出研究（圖2,3和4)顯示了親水性、大分子藥物從疏水插入物載 體材料釋放受影響的程度。如上所述，羊毛罌紅是水溶性的，也即，在水中的溶解度大于5% w/w，而且是大分子。從這些數(shù)據(jù)清楚看出，沒有分散在整個(gè)插入物載體材料中的水溶性釋 放增強(qiáng)劑的幫助，羊毛罌紅不能彌散通過有機(jī)硅插入物載體材料。水溶性釋放增強(qiáng)劑從插 入物載體材料的制劑排除時(shí)(也即，〇%裝載量），開始的很少幾天只有低的表面羊毛罌紅釋 放，該時(shí)間以后，羊毛罌紅濃度是極其低的。
[0139] 認(rèn)為羊毛罌紅較差的彌散/滲透，是由于羊毛罌紅相對(duì)低的溶出度和相對(duì)高的分 子量(相對(duì)于一般彌散通過有機(jī)娃插入物載體材料的分子MOODaltons)，從而抑制它彌散 通過例示的有機(jī)娃插入物載體材料的能力，該有機(jī)娃插入物載體材料是疏水的。
[0140] 同樣明顯地，少量添加(5和10% )水溶性釋放增強(qiáng)劑到包含藥物的插入物中，對(duì)增 加羊毛罌紅的釋放具有很少的影響。僅僅當(dāng)水溶性釋放增強(qiáng)劑的濃度達(dá)到15或20%和以上 時(shí)，釋放速率被顯著增加。以20，30，40和50 %的PEG裝載量，到28天的研究結(jié)束時(shí)，羊毛罌紅 的累積釋放分別增加2，6，10和13倍。至于HEC，到28天的研究結(jié)束時(shí)，羊毛罌紅的累積釋放 分別增加2,4，11和25倍。因此，盡可能保持最高的水溶性釋放增強(qiáng)劑裝載量(如，例如50%) 是有益的。羊毛罌紅提高的釋放認(rèn)為是由于水溶性釋放增強(qiáng)劑的存在，增加水吸收到插入 物載體材料的疏水基質(zhì)中而引起的。認(rèn)為產(chǎn)生一系列互連通道和孔，溶解基質(zhì)和羊毛罌紅 可移動(dòng)通過這些通道和孔，并從本發(fā)明的藥物遞送裝置彌散。
[0141] 這里檢驗(yàn)的所有水溶性釋放增強(qiáng)劑顯示以濃度依賴的方式影響羊毛罌紅的釋放。 不同的水溶性釋放增強(qiáng)劑之間的唯一差異是它們?cè)黾友蛎浖t釋放的幅度。圖4舉例說明 了羊毛罌紅從帶有單個(gè)包含羊毛罌紅的插入物的棒狀藥物遞送裝置的釋放，該插入物中包 含50%裝載量的一系列水溶性釋放增強(qiáng)劑。很明顯甘氨酸，D-葡萄糖和HEC提供了羊毛罌紅 釋放的最大改善，其中甘氨酸提供了羊毛罌紅釋放的最大改善。如圖11A和11B所示，利用甘 氨酸的改善的釋放最可能與帶有這種水溶性釋放增強(qiáng)劑的棒狀藥物遞送裝置增加的溶脹 相關(guān)。50%PEG棒的這種圖像（圖11A)代表了 28天的溶出以后，所有的水溶性釋放增強(qiáng)劑，除 了甘氨酸之外（圖11B，其中可見到棒狀藥物遞送裝置0到最小的溶脹）。至于甘氨酸，棒狀藥 物遞送裝置另外的溶脹導(dǎo)致了進(jìn)一步的聚合物網(wǎng)擴(kuò)展，從而產(chǎn)生增加數(shù)量的孔和空隙，溶 出介質(zhì)和羊毛罌紅可以移動(dòng)通過這些孔和空隙。
[0142] 涉及羊毛罌紅的研究舉例說明了，大分子但是中度低分子量的親水性藥物，如何 通過水溶性釋放增強(qiáng)劑的包含物，以高濃度從有機(jī)硅插入物遞送。這些研究被擴(kuò)展(參見下 面的實(shí)施例5)到檢驗(yàn)?zāi)Ｐ偷鞍譈SA從類似的棒狀藥物遞送裝置的釋放。
[0143] 實(shí)施例5
[0144] 賦形劑濃度對(duì)BSA釋放分布圖的影響
[0145] 有機(jī)娃彈性體LSR9-9508-30由NuSil Technology LLC(Carpinteria,USA)提供。 BSA購(gòu)自 Sigma-Aldrich(Gillingham,UK)。使用Elga Purelab Maxima系統(tǒng)獲得超純水。內(nèi) 徑為3.35mm，外徑為4.64mm的醫(yī)學(xué)級(jí)有機(jī)硅管購(gòu)自BDH( Be If as t，UK)。
[0146] 如下面的表7中所述的制備包含BSA的插入物制劑。分別使用總共2g質(zhì)量的BSA/水 溶性釋放增強(qiáng)劑/有機(jī)娃制劑。在DAC 150FVZ-K Speedmixer中，以3000rpm，首先通過混合 想要濃度的合適組分(也即，B