一種夏枯草均一多糖及其制備方法和用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及中藥提取物技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種植物提取組分及其制備方法和用 途。
【背景技術(shù)】
[0002] 中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)(201410561972.8)公開(kāi)了一種夏枯草水提物，所述夏枯草水提 物用如下方法制得:將夏枯草果穗加水10~22倍量，加熱回流提取2~4次，每次0.5~化，過(guò) 濾，濾液過(guò)0.45um水膜微濾，收集過(guò)0.45um水膜微濾后的濾液，將所收集的過(guò)0.45um水膜微 濾后的濾液再過(guò)截留分子量為3~500邸a的超濾膜，收集未透過(guò)超濾膜的藥液，濃縮，干燥。 該夏枯草水提物具有一定的抗瘤疹病毒活性。然而，該專利申請(qǐng)并未設(shè)及其中的多糖分子 量、純度及結(jié)構(gòu)解析方面的研究。
[0003] 鑒于現(xiàn)有技術(shù)的狀況，需要尋找多糖含量高、具有更強(qiáng)抗瘤疹病毒活性的夏枯草 抗病毒多糖組分。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的旨在提供一種夏枯草均一多糖及其制備方法和用途。
[000引具體地說(shuō)，本發(fā)明的第一方面是提供了一種夏枯草均一多糖，所述均一多糖的總 糖含量為53%~65% ;所述均一多糖的分子量為23.4KDa~41.7KDa;且所述均一多糖主要 由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醒酸、半乳糖醒酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖組成。
[0006] 在一優(yōu)選例中，所述葡萄糖醒酸的含量為12~15%。
[0007] 在另一優(yōu)選例中，所述均一多糖用如下方法制得:將夏枯草果穗加水10~22倍量， 加熱回流提取2~4次，每次0.5~化，過(guò)濾，濾液過(guò)0.45um水膜微濾，收集過(guò)0.45皿水膜微濾 后的濾液，將所收集的過(guò)0.45um水膜微濾后的濾液再依次過(guò)截留分子量為30KDa和100邸a 的超濾膜，收集截留分子量大于30KDa且小于100邸a部分的超濾液，濃縮，除去游離蛋白5~ 10次，再經(jīng)凝膠色譜分離，收集凝膠色譜柱流出的第二種多糖組分，濃縮，干燥。
[000引在另一優(yōu)選例中，所述超濾膜為化Uicon叫L超濾膜。
[0009] 在另一優(yōu)選例中，所述凝膠色譜柱為S邱hadex G-200葡聚糖凝膠柱。
[0010] 在另一優(yōu)選例中，所述均一多糖還含有17~20%硫酸根基團(tuán)。
[0011] 本發(fā)明的第二方面是提供了一種上述夏枯草均一多糖的制備方法，所述方法包括 如下步驟:將夏枯草果穗加水10~22倍量，加熱回流提取2~4次，每次0.5~化，過(guò)濾，濾液 過(guò)0.45um水膜微濾，收集過(guò)0.45um水膜微濾后的濾液，將所收集的過(guò)0.45um水膜微濾后的 濾液再依次過(guò)截留分子量為30KDa和lOOKDa的超濾膜，收集截留分子量大于30KDa且小于 100邸a部分的超濾液，濃縮，除去游離蛋白5~10次，再經(jīng)凝膠色譜分離，收集凝膠色譜柱流 出的第二種多糖組分，濃縮，干燥。
[0012] 在一優(yōu)選例中，所述超濾膜為P地icon?化超濾膜。
[0013] 在另一優(yōu)選例中，所述凝膠色譜柱為S邱hadex G-200葡聚糖凝膠柱。
[0014] 本發(fā)明還提供了上述夏枯草均一多糖在制備預(yù)防或治療單純瘤疹病毒感染的藥 物中的應(yīng)用。
[0015] 與現(xiàn)有的技術(shù)相比，本發(fā)明提供的夏枯草均一多糖的多糖含量更高、純度更高、抗 瘤疹病毒活性更強(qiáng)，且其制備工藝亦適于工業(yè)化生產(chǎn)。
[0016] 本發(fā)明各個(gè)方面的細(xì)節(jié)將在隨后的章節(jié)中得W詳盡描述。通過(guò)下文W及權(quán)利要求 的描述，本發(fā)明的特點(diǎn)、目的和優(yōu)勢(shì)將更為明顯。
【附圖說(shuō)明】
[0017] 圖1.硫酸-苯酪法測(cè)定葡萄糖含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線
[0018] 圖2.硫酸-巧挫法測(cè)定葡萄糖醒酸含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線
[0019] 圖3.考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線
[0020] 圖4.氯化領(lǐng)-凝膠法測(cè)定硫酸基含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線
[0021] 圖5.高效凝膠滲透色譜法測(cè)定普魯蘭糖對(duì)照品分子量的標(biāo)準(zhǔn)曲線
[0022] 圖6.高效凝膠滲透色譜法測(cè)定夏枯草均一多糖的色譜圖
[0023] 圖7A-7C.夏枯草均一多糖的單糖組成分析
[0024] A:單糖對(duì)照品，B:夏枯草均一多糖，C:二者對(duì)照疊加圖
[0025] 圖8.夏枯草均一多糖的紅外光譜圖
[0026] 圖9.夏枯草水提物和夏枯草均一多糖IC5〇(空斑減數(shù)法)比較
【具體實(shí)施方式】
[0027] 本發(fā)明人經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期研究，優(yōu)化了之前的提取工藝，即將由夏枯草果穗經(jīng)水提后的 微濾液，再用超濾膜超濾，所得超濾液去除游離蛋白后，再經(jīng)凝膠色譜分離純化，進(jìn)而制得 了本發(fā)明的多糖含量更高且具有更強(qiáng)抗病毒活性的夏枯草均一多糖。本發(fā)明的夏枯草均一 多糖可用于制備預(yù)防或治療單純瘤疹病毒感染的藥物。
[0028] 如本發(fā)明所使用，"均一多糖"是單糖通過(guò)聚合而成的多糖，聚合的糖有特定的結(jié) 構(gòu)單元。均一多糖可分為相同單糖形成的聚糖或不同單糖形成的雜多糖。
[0029] 本發(fā)明的夏枯草均一多糖可W單獨(dú)使用或W藥物組合物的形式使用。藥物組合物 包括作為活性成分的本發(fā)明的夏枯草均一多糖及可藥用載體。較佳地，本發(fā)明的藥物組合 物含有0.1~99.9%重量百分比的作為活性成分的本發(fā)明的夏枯草均一多糖。"可藥用載 體"不會(huì)破壞本發(fā)明的夏枯草均一多糖的藥學(xué)活性，同時(shí)其有效用量，即能發(fā)揮藥物載體作 用時(shí)的用量對(duì)人體無(wú)毒。
[0030] 所述可藥用載體包括但不限于:軟憐脂、硬脂酸侶、氧化侶、離子交換材料、自乳化 藥物傳遞系統(tǒng)、吐溫或其他表面活化劑、血清蛋白、緩沖物質(zhì)如憐酸鹽、氨基乙酸、山梨酸、 水、鹽、電解質(zhì)如硫酸鹽精蛋白、憐酸氨二鋼、憐酸氨鐘、氯化鋼、鋒鹽、娃酸儀、飽和脂肪酸 部分甘油醋混合物等。
[0031] 其他常用的藥物輔料如粘合劑（如微晶纖維素）、填充劑(如淀粉、葡萄糖、無(wú)水乳 糖和乳糖珠粒）、崩解劑(如交聯(lián)PVP、交聯(lián)簇甲基淀粉鋼、交聯(lián)簇甲基纖維素鋼、低取代徑丙 基纖維素）、潤(rùn)滑劑(如硬脂酸儀）W及吸收促進(jìn)劑、吸附載體、香味劑、甜味劑、賦形劑、稀釋 劑、潤(rùn)濕劑等。
[0032] 本發(fā)明的夏枯草均一多糖W及其藥物組合物可按本領(lǐng)域常規(guī)方法制備并可W通 過(guò)腸道或非腸道或局部途徑給藥?？诜苿┌z囊劑、片劑、日服液、顆粒劑、丸劑、散劑、 丹劑、膏劑等;非腸道給藥制劑包括注射液等；局部給藥制劑包括霜?jiǎng)?、貼劑、軟膏劑、噴霧 劑等。
[0033] 本發(fā)明的夏枯草均一多糖W及其藥物組合物的給藥途徑可W為口服、舌下、經(jīng)皮、 經(jīng)肌肉或皮下、皮膚粘膜、靜脈、尿道、陰道等。
[0034] 本發(fā)明各個(gè)方面的細(xì)節(jié)將在隨后的章節(jié)中得W詳盡描述。通過(guò)下文W及權(quán)利要求 的描述，本發(fā)明的特點(diǎn)、目的和優(yōu)勢(shì)將更為明顯。
[0035] 下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，運(yùn)些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條 件或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說(shuō)明，否則所有的百分?jǐn)?shù)、比率、比例、或份數(shù)按 重量計(jì)。
[0036] 除非另行定義，文中所使用的所有專業(yè)與科學(xué)用語(yǔ)與本領(lǐng)域熟練人員所熟悉的意 義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于本發(fā)明方法中。文中 所述的較佳實(shí)施方法與材料僅作示范之用。
[0037] 本發(fā)明提到的上述特征，或?qū)嵤├岬降奶卣骺蒞任意組合。本專利說(shuō)明書(shū)所掲 示的所有特征可與任何組合物形式并用，說(shuō)明書(shū)中所掲示的各個(gè)特征，可W任何可提供相 同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特別說(shuō)明，所掲示的特征僅為均等或相似 特征的一般性例子。
[0038] 實(shí)施例1夏枯草均一多糖PSP-2B的制備及分析
[0039] 1.制備
[0040] 【實(shí)驗(yàn)材料】
[0041 ] 夏枯草，電熱套，冷凝管，圓底燒瓶，Millipore Labscale TFF超濾系統(tǒng)，Lambda 35紫外分光光度計(jì)，Perkin Elmer Spectrum One傅立葉變換紅外光譜儀，AKTA purifier 100系列蛋白純化儀，Agilent 1100系列高效凝膠滲透色譜儀，Polarimeter Model 341旋 光度儀，Waters Η Class超高效液相色譜儀，苯酪，巧挫，硫酸領(lǐng)，明膠，硫酸，1-苯基-3-甲 基-5-化挫嘟酬等。
[0042] 【實(shí)驗(yàn)方法】
[0043] 將夏枯草果穗500g，煎煮3次，每次加水20倍量，每次0.化，水提取液過(guò)0.45WI1水膜 微濾，收集濾液，濾液在50°C減壓濃縮，將濃縮的濾液依次過(guò)截留分子量為30KDa和100邸a 的超濾膜，收集截留分子量大于30KDa且小于100邸a部分的超濾液用Sevag法除去游離蛋白 質(zhì)7次，濃縮至飽和，取飽和溶液上樣于Se地adex G-200葡聚糖凝膠柱（1.6 X 100cm)，每次 上樣1ml，流動(dòng)相為去離子水，流速為0.4ml/min，分管收集，每管5ml，收集液用硫酸-苯酪法 檢測(cè)多糖，取第二種多糖組分，冷凍干燥，制得。
[0044] 【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】