單核細胞增生李斯特菌和侵肺軍團菌的活性。使用與用 于金黃色葡萄球菌相同的方法來評估CEM-101與AZI針對吞噬的單核細胞增生李斯特菌和 侵肺軍團菌的活性，以獲得濃度效果關系的信息和相應的相關藥理學標碼的信息。如圖6所 示，在所有情況下都觀察到符合希爾方程的關系，盡管侵肺軍團菌的有限生長使得函數(shù)的 擬合有些更不確定。當把數(shù)據(jù)針對重量濃度作圖時，顯示出CEM-101比AZI對于單核細胞增 生李斯特菌和侵肺軍團菌兩者都具有較高的相對療效(較低的EC50)。當侵肺軍團菌的數(shù)據(jù) 針對多個MIC作圖時，這種差異減少但保持顯著，表明MIC對該生物體的細胞內活性是重要 的但不是排他性的驅動者。相反地，當數(shù)據(jù)表達為多個MIC時，對于單核細胞增生李斯特菌 未觀察到響應的差異。在表中顯示了相關藥理學描述符的數(shù)值及其差異的統(tǒng)計分析。
[0217]在圖6中說明的劑量-響應曲線的相關回歸參數(shù)a(具有置信區(qū)間[C1])和統(tǒng)計分析

[0221] a使用圖6中所示的所有數(shù)據(jù)點（由于當抗生素的細胞外濃度低于O.Olx MIC(5)時 細胞外生長的跡象，來自沒有抗生素的樣品的數(shù)據(jù)未被使用。
[0222] +最初的（吞噬后)接種體[時間=0h;CFU/mg蛋白]:單核細胞增生利斯特菌，1.67 ±0· 22xl06(n = 3);侵肺軍團菌，0 ·94±0 ·60xl06。
[0223] ++最初的（吞噬后)接種體[時間=011]:2.74±0.55110 (^1]/1職蛋白（11 = 3)
[0224] ^在時間= 24h(單核細胞增生利斯特菌)或48h(侵肺軍團菌）時，來自相應的最初 的接種體的CFU降低（以log1Q為單位），如抗生素濃度外推得到少于5次計數(shù)的樣品被視 為低于檢測水平。
[0225] 6導致接種體減少在初始(E0)與最大(Emax)值之間的濃度（以mg/L或以X MIC為單 位），如由希爾方程獲得(使用斜率1);
[0226] °°導致沒有明顯細菌生長（與最初的接種體相同的CFU數(shù)）的濃度（以mg/L或以X MIC為單位），如通過圖解內推確定。統(tǒng)計分析:分析兩種抗生素之間的差異(對于相應的排 的每一列；未配對的、雙尾t-測試）：具有不同小寫字母的圖彼此顯著不同（p〈0.05)。
[0227] 實例。在感染的THP-1巨噬細胞中的劑量-響應研究。針對吞噬細胞內的金黃色葡 萄球菌ATCC 25923，CEM-101比AZI、CLR和TEL更有效(較低的Cs)。此外，CEM-101能夠減少細 胞內接種體(E max~llog)，這對于AZI、CLR和TEL中任一個都未觀察到。
[0228] CEM-101在細胞內的吸收（ii):細胞類型的作用
[0230] 實例。CEM-101與比較物(AZI、CLR和TEL)針對細胞內金黃色葡萄球菌ATCC 25923 (THP-1巨噬細胞)的劑量-響應研究。參考圖9和下表。
[0232] 實例。細胞內活性：與其它抗金黃色葡萄球菌劑的比較研究。測定了抗生素針對 THP-1巨噬細胞中的細胞內金黃色葡萄球菌(菌株ATCC 25923)的比較劑量-靜態(tài)響應。參見 圖8的柱，表示MIC(以mg/L)或細胞外靜態(tài)劑量。
[0233] 方法.小鼠腹膜的巨噬細胞用活的麻風桿菌感染，該藥物被添加并在33°C下孵育3 天。3天后，巨噬細胞被溶解以釋放細胞內麻風桿菌，該細胞內麻風桿菌然后通過放射性呼 吸測定法和生存能力染色而被測定生存能力。CEM-101針對細胞內麻風桿菌生存能力顯示 出功效。
[0234]通過在無胸腺的nu/nu小鼠腳墊中的連續(xù)傳代保持的麻風桿菌的Thai-53分離物， 用于所有的試驗。對于無菌測試，將新收獲的活的麻風桿菌在33°C下，在連同不同濃度的藥 物(CEM-10UCLR和利福平)一起的介質中孵育7天。該孵育結束時，藥物處理的麻風桿菌經(jīng) 受放射性呼吸測定法，以基于棕櫚酸鹽的氧化和用生存能力染料染色來評估膜損傷的程 度，以便評估生存能力。對于細胞內測試，來自瑞士小鼠的腹膜的巨噬細胞用新收獲的活的 麻風桿菌以20:1的Μ0Ι感染12小時。感染結束時，細胞外的細菌洗滌并且以不同濃度添加藥 物并在33°C下孵育3天。3天結束時，細胞被溶解以獲得細胞內麻風桿菌用于放射性呼吸測 定法和生存能力染色。
[0235] 當與對照比較時，0.15μg/ml的CEM-101能夠顯著(P〈0.001)降低麻風桿菌在無菌 培養(yǎng)基和細胞內培養(yǎng)基中的生存能力。CEM-101的抑制作用與在同一條件下且在相同濃度 下采用CLR獲得的抑制作用不是統(tǒng)計學上不同的。
[0236] 實例。CEM-101對肺炎鏈球菌、β-溶血性和草綠色鏈球菌、葡萄球菌和腸球菌的高 有效性已經(jīng)記錄在使用參考臨床實驗室標準研究所(CLSI)方法進行的早期篩分研究中。由 于可能危及MLSB-酮內酯類的抗性的機理和存在快速增長，因此評價了 CEM-101與五種所選 抗微生物劑類型在測試野生型(WT)和表型/基因型定義的抗性生物體亞型時的殺菌活性 (MBC和殺滅曲線）。對CEM-10UTEL和CLR的MBC確定使用了 40菌株(6種物質組）的CLSI方法。 KC使用8種菌株(6種物質組）。以4X濃度接觸1或2小時測試PAE(5種菌株）；TEL對照。
[0237] MBC和殺滅曲線研究:對總共40種菌株（10種肺炎鏈球菌、10種金黃色葡萄球菌和5 種β-溶血性鏈球菌、草綠色鏈球菌、凝血酶陰性葡萄球菌[CoNS]和腸球菌中的任一種)進行 MIC測試，然后是使用CLSI程序的MBC確定(MIC和MBC范圍0.008-16μg/ml)。所測試的試劑殺 死2 99.9%的最初接種體的最低濃度被定義為MBC終點（表2和表3)。按照Moody&Knapp， NCCLS M21-A3andM26-A(NCCLS M21-A3和M26-A)描述的方法，對于CEM-101、TEL、CLR和AZI 對8種所選菌株進行時間殺菌活性。以2X、4X、8X MIC測試化合物;并且在1'032、了438和丁24 進行菌落計數(shù)。
[0238] CEM-101對BSA、SA和凝血酶陰性葡萄球菌顯示低的MBC/MIC比（< 4);并且是TEL的 療效的兩倍。SA、腸球菌和某些大環(huán)內酯/抗CLN的（R)菌株具有較高的比。KC結果顯示出 CEM-101與TEL相比更快且更大的殺菌活性(cidal activity)(濃度依賴的）<ΧΕΜ-101顯示 出的對數(shù)種革蘭氏陽性物種的殺菌活性的速率和程度均比TEL高。
[0239] 根據(jù)CEM-101、TEL、CLR和ΑΖΙ的MBC/MIC比例，分離物的分布
[0241]
[0242] CEM-101針對金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎鏈球菌、釀膿鏈球菌（僅在8X MIC)和草綠色鏈球菌的大環(huán)內酯易感的菌株以及抗大環(huán)內酯的釀膿鏈球菌顯示快速殺菌 活性U31oglOCFU/ml的減少）。當與TEL或大環(huán)內酯CLR和AZI中任一種比較時，CEM-101產(chǎn) 生了更大的CFU/ml的減少以及更快速的殺菌。
[0243] 時間殺滅曲線結果概述


[0247] 當針對大環(huán)內酯易感的鏈球菌、CoNS和抗大環(huán)內酯的CLN易感的肺炎鏈球菌測試 時，CEM-101顯示殺菌活性。CEM-101MBC/MIC比對于金黃色葡萄球菌可能是高的，但某些菌 株顯示MBC結果保持在濃度的易感范圍內。
[0248] 實例。對衣原體的活性。CEM-101、TEL、AZI、CLR和強力霉素作為粉末而提供并按照 生產(chǎn)商的說明溶解。進行每次試驗時使藥物懸浮液為新鮮的。
[0249] 肺炎衣原體:所測試的肺炎衣原體的分離物包括參照菌株(TW 183)、9種來自美國 的、患有肺炎的兒童和成人的分離物以1?39、了2023、了2043、16805、011^ 029、01-1)、來自日本 的、1種患有肺炎的兒童的分離物(J-21)和2種來自美國的、患有人類免疫缺陷病毒感染和 肺炎的患者的支氣管肺泡灌洗樣本的菌株(BAL15和BAL16)。
[0250] 沙眼衣原體：10種沙眼衣原體的分離物，包括來自六1'(：(：^-801]1?、？-1(：-041^、(：-說尺32、1-冊-36、1^434、〇-冊-571?、8-說1?-36)的標準分離物和近期臨床分離物018(宮 頸）、N19(宮頸）、7015(嬰兒眼睛））。
[0251] 體外易感性測試:使用在96孔微量滴定板生長的HEp-2細胞，在細胞培養(yǎng)中進行肺 炎衣原體和沙眼衣原體的易感性測試。每個孔用0.1ml被稀釋得到1〇 3至l〇4IFU/ml的測試菌 株溫育，以l，700x g離心分離1小時，并在35°C下溫育1小時。使孔通風并用0.2mL在每mL中 含有l(wèi)yg的環(huán)己酰亞胺的培養(yǎng)基覆蓋并連續(xù)兩倍稀釋該測試藥物。
[0252] 將復制版接種。在35°C溫育48-72小時后，將培養(yǎng)基固定并染色，以包含脂多糖屬 抗原的焚光素標記的抗體(Pathfinder，Kallestad Diagnostics，Chaska，Minn)。最小抑制 濃度(MIC)是沒有觀察到內含物的最低抗生素濃度。最小殺菌濃度(MBC)通過使含有抗生素 的培養(yǎng)基通風，用磷酸鹽緩沖鹽水洗滌細胞兩次以及添加不含抗生素的培養(yǎng)基而確定。將 培養(yǎng)基在70 °C下冷凍，解凍，傳代至新細胞上，溫育72小時然后如上固定并染色。MBC是在傳 代后導致沒有內含物的最低抗生素濃度。所有測試都進行三次。
[0253] 針對10種肺炎衣原體的分離物的CEM-101和其它抗生素的活性
[0255]針對10種沙眼衣原體的分離物的CEM-101和其它抗生素的活性
[0258] 本研究的結果證實，針對沙眼衣原體和肺炎衣原體，CEM-101具有與其它大環(huán)內酯 和酮內酯相當?shù)捏w外活性。
[0259] 實例。組織分布。CEM-101被很好地吸收并分布到組織中。在250mg/kg/d的大鼠中， CEM-101的平均肺部濃度和肝臟濃度是血漿中的濃度的17倍和15倍。在200mg/kg/d劑量的 猴子中，肺部濃度和肝臟濃度是血漿濃度的503倍和711倍。心臟中的CEM-101濃度顯著低于 肺部或肝臟中發(fā)現(xiàn)的水平，所述肺部或肝臟中發(fā)現(xiàn)的水平在大鼠和猴子中分別是血漿濃度 的5倍和54倍。
【主權項】
1. 藥物組合物在制造用于治療瘟疫、土拉菌病、軍團病、類鼻疽、吸入性炭疽、非典型肺 炎及其組合的藥物中的用途;其中所述組合物包括：（a)治療有效量的一種或多種下式的化 合物 或其藥學上可接受的鹽，其中： Rio是氫或?；?； X是Η ;Y是OR7;其中R7是二脫氧甲基己糖基;或者X和Y與所連接的碳合起來形成羰基； V是C(0); W是Η或F; Α 是 CH2、C(0)、C(0)0、C(0)NH、S(0)2、S(0)2NHSC(0)NHS(0)2; B是(CH2)n，其中η是范圍在0-10的整數(shù)，或者B是2-10個碳的不飽和碳鏈;且 C是氫、羥基、烷基、芳烷基、烷基芳基、烷氧基、雜烷基、任選取代的芳基、任選取代的雜 芳基、氨芳基、烷基氨芳基、酰基、酰氧基、磺?；㈦寤虬奔柞；?和 (b)任選地一種或多種藥學上可接受的載體、稀釋劑和賦性劑以及其組合。2. 如權利要求1所述的用途，其中X是H;Y是OR7;和R7是二脫氧甲基己糖基。3. 如權利要求1所述的用途，其中W是Η。4. 如權利要求1所述的用途，其中W是F。5. 如權利要求1所述的用途，其中X和Υ與所連接的碳合起來形成羰基。6. 如權利要求1所述的用途，其中R1()是氫。7. 如權利要求1所述的用途，其中A是CH2。8. 如權利要求1所述的用途，其中B是(CH2)n，其中η是1-5的整數(shù)。9. 如權利要求1所述的用途，其中η是2-4的整數(shù)。10. 如權利要求1所述的用途，其中η是3。11. 如權利要求1所述的用途，其中Α和Β合起來形成亞丙基、亞丁基或亞戊基。12. 如權利要求1所述的用途，其中A和B合起來形成亞丁基。13. 如權利要求1至12中任一項所述的用途，其中C是任選取代的芳基或任選取代的雜 芳基。14. 如權利要求13所述的用途，其中C是任選取代的苯基。15. 如權利要求13所述的用途，其中C是苯基、鹵代苯基、鹵代烷基苯基或氨苯基。16. 如權利要求13所述的用途，其中C是3-氨苯基。17. 如權利要求13所述的用途，其中C是任選取代的苯并三唑基。18. 如權利要求13所述的用途，其中C是苯并三唑基甲基。19. 如權利要求1所述的用途，其中所述化合物具有下式或其藥學上可接受的鹽。20. 如權利要求1所述的用途，其中所述化合物具有下式^ 〇21. 權利要求1至12或19至20中任一項所述的用途，其中所述藥物適于預防性治療急性 接觸。22. 權利要求1至12或19至20中任一項所述的用途，其中所述藥物適于預防性治療預接 觸。23. 適于一天一次施用的單劑型或分單位劑量劑型或單位劑型，所述單劑型或分單位 劑量劑型或單位劑型包括1 〇〇至1 〇〇〇mg的下式的化合物或其藥學上可接受的鹽。24. 權利要求23所述的單劑型或分單位劑量劑型或單位劑型，其包括200mg或400mg的 所述化合物。25. 權利要求23或24所述的單位劑量或單位劑型，其中所述化合物具有下式
【專利摘要】描述了大環(huán)內酯和酮內酯抗生素用于治療急性接觸和由生物防御病原體引起的疾病的用途。
【IPC分類】A61K31/7056, A61P31/04, A61P11/00, A61P31/00
【公開號】CN105616437
【申請?zhí)枴緾N201610045028
【發(fā)明人】P·B·費爾南德斯
【申請人】森普拉制藥公司
【公開日】2016年6月1日
【申請日】2009年10月24日
【公告號】CN102223794A, CN102245022A, CN102245195A, CN102245195B, EP2358379A1, EP2358379A4, EP2358379B1, EP2362727A1, EP2362727A4, EP2365747A1, EP2365747A4, EP3031460A1, US8791080, US8796232, US9072759, US20110195920, US20110201566, US20110237534, US20150105339, US20150111845, US20160082028, WO2010048599A1, WO2010048600A1, WO2010048601A1