一種純化藍靛果忍冬中多酚的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于天然有機化學領域，涉及一種利用超聲波輔助提取-大孔樹脂聯用技術純化藍靛果忍冬中多酚的方法。
【背景技術】
[0002]藍靛果忍冬(Lonicera Caerulea L)簡稱為藍靛果，民間也俗稱山前子、羊奶子等，其形狀為長橢圓形，呈深藍紫色，果實味道類似于越蔓橘、藍莓等，呈酸甜味。藍靛果是一種新興的野生漿果資源，具有較強的生命力、抗寒能力，適應性也很好。藍靛果中含有維生素、礦物質等多種營養(yǎng)成分，可鮮食也可進行生產加工。此外，藍靛果也是一種生物活性成分富集的漿果，尤其是花色苷類物質、酚酸類物質和黃酮類物質的種類多樣、含量較高，同時還具有多種生物活性，如預防心血管疾病、抑菌抗炎、預防癌癥和抗氧化等生理功效。本發(fā)明采用超聲波輔助提取-大孔樹脂聯用技術所得藍靛果忍冬多酚的含量和純度均較高，旨在為藍靛果多酚分離及應用提供新的途徑。

【發(fā)明內容】

[0003]本發(fā)明目的是提供一種利用超聲波輔助提取-大孔樹脂聯用技術純化藍靛果忍冬中多酚的方法，在保證以高效率獲取高含量、高純度的藍靛果忍冬多酚精制品的同時盡可能的降低工藝成本、減少能源消耗和對環(huán)境造成的污染。
[0004]本發(fā)明所提供技術方案的工藝流程如下:
藍靛果忍冬鮮果—挑選、清洗、瀝干—打漿—高壓均質機均質—超聲波輔助乙醇提取法浸提—真空抽慮并收集濾液—旋轉蒸發(fā)儀濃縮濾液—篩選后的大孔樹脂純化—蒸餾水除雜—乙酸酸化的乙醇溶液洗脫—薄層色譜法跟蹤檢測—收集多酸富集物—0.45 μπι有機微孔濾膜過濾多酸富集物—Sephadex LH-20葡聚糖凝膠柱層析法再次純化多酚富集物—用乙醇-乙酸-水(70: 0.01: 29.99，v/v/v)溶液洗脫—減壓濃縮洗脫液—真空冷凍干燥—紫紅色藍靛果多酚精制品方法步驟如下:
(I)原料挑選:挑選出采摘后的藍靛果忍冬中無病蟲害和機械損傷且成熟度一致的果實，清洗、瀝干。
[0005](2)藍靛果多酚提取:采用勻漿機對預處理后的藍靛果忍冬進行打漿，并通過高壓均質機對藍靛果果漿均質5 min，然后加入比例為40?55: 0.1: 59.9?44.9(ν/ν/ν)的乙醇-乙酸-水溶液，按照料液比為1:15?25(g/mL)的比例進行混合，待混合均勻后置于35?50 °C超聲波清洗機(功率為500 W)中浸提75?100 min。
[0006](3)真空抽濾:對浸提后的多酚粗提液進行真空抽慮并收集濾液。
[0007](4)濃縮:將藍靛果多酚濾液置于圓底燒瓶中并在35?40 °C條件下的真空旋轉蒸發(fā)儀中處理30?35 min，回收乙醇并收集多酚濃縮液。
[0008](5)大孔樹脂的篩選:對收集的多酚濃縮液再次真空抽慮，并通過比較分析型號分別為XAD-7、X-5、S-8、D11、AB-8、D1400的大孔樹脂對多酚濾液的吸附量、吸附率和解吸率，從中篩選出純化藍靛果忍冬多酚的最適大孔樹脂。
[0009](6)大孔樹脂純化:用恒流栗將濃度為2.03 11^/1^的濃縮濾液以0.5?2 BV/h的流速進行上樣，上樣量為樹脂體積的1.5?2.5倍，至大孔樹脂呈吸附飽和狀態(tài)。先用洗脫體積為2.5?4 BV的蒸餾水沖洗柱子，清除藍靛果多酚中多糖、蛋白質等雜質，接著用4倍柱體積的65?95% (v/v)的乙醇洗脫液控制洗脫流速為I?2 BV/h進行梯度洗脫，并用薄層色譜法跟蹤和檢測，收集藍靛果多酚富集物。
[0010](7)有機濾膜過濾:用0.45 μπι有機微孔濾膜過濾藍靛果多酚富集物并收集濾液。
[0011](8)葡聚糖凝膠柱層析:將過濾后的多酚富集物經Sephadex LH-20葡聚糖凝膠柱吸附飽和后進行二次純化，用4?5 BV的乙醇-乙酸-水(70: 0.01: 29.99，v/v/v)溶液進行洗脫，收集二次純化的多酚洗脫液。
[0012](9)濃縮和真空冷凍干燥:對收集到的多酚洗脫液在35?45 °C條件下進行減壓濃縮并回收乙醇，接著將多酚濃縮液置于30?40 °C條件下的真空冷凍干燥機中進行干燥處理，制成藍館果多酸精制品粉末，呈紫紅色。
[0013]本發(fā)明的優(yōu)點是:1.大孔樹脂具有理化性質穩(wěn)定、吸附容量大效果好、再生簡單等優(yōu)點，適合藍靛果多酚的規(guī)模化生產;2.整個操作工藝安全可靠，操作技術成本低廉;3.通過此工藝獲取的藍靛果多酚含量和純度均較高;4.此技術提高了藍靛果資源的商用價值。
【具體實施方式】
[0014]實施例1
挑選出采摘后的藍靛果忍冬中無病蟲害和機械損傷且成熟度一致的果實，清洗、瀝干后，用勻漿機進行打漿，并通過高壓均質機對藍靛果果漿均質5 min，然后加入比例為40:0.1: 59.9(v/v/v)的乙醇-乙酸-水溶液，按照料液比為1:15(g/mL)的比例進行混合，待混合均勻后置于35 °C超聲波清洗機(功率為500 W)中浸提75 min;接著對多酚浸提液進行真空抽慮，收集藍靛果多酚濾液并置于圓底燒瓶中在35 °(:條件下旋轉蒸發(fā)30 min，回收乙醇并收集多酚濃縮液，再次真空抽慮多酚濃縮液;通過比較分析型號分別為XAD-7、X-5、S-8、0101^8-8、01400的大孔樹脂對多酚濾液的吸附量、吸附率和解吸率，篩選結果為乂40-7型大孔樹脂純化藍靛果忍冬多酚的效果最佳。用恒流栗將濃度為2.03 mg/mL的濃縮濾液以
0.5 BV/h的流速進行上樣，上樣量為樹脂體積的1.5倍，至大孔樹脂呈吸附飽和狀態(tài)，先用洗脫體積為3 BV的蒸餾水沖洗柱子，清除藍靛果多酚中多糖、蛋白質等雜質，接著用4倍柱體積的65?95% (v/v)的乙醇洗脫液控制洗脫流速為I BV/h進行梯度洗脫，并用薄層色譜法跟蹤和檢測，收集藍靛果多酚富集物，接著用0.45 pm有機微孔濾膜過濾藍靛果多酚富集物并收集濾液，將多酚濾液經Sephadex LH-20葡聚糖凝膠柱吸附飽和后進行二次純化，用4BV的乙醇-乙酸-水(70: 0.01: 29.99,ν/ν/ν)溶液進行洗脫，收集二次純化的多酚洗脫液。在35 °C條件下對多酚洗脫液進行減壓濃縮并回收乙醇，接著將多酚濃縮液置于30 °C條件下的真空冷凍干燥機中進行干燥處理，制成藍靛果多酚精制品粉末，呈紫紅色。
[0015]實施例2
挑選出采摘后的藍靛果忍冬中無病蟲害和機械損傷且成熟度一致的果實，清洗、瀝干后，用勻漿機進行打漿，并通過高壓均質機對藍靛果果漿均質5 min，然后加入比例為50: