一種發(fā)酵中藥制劑及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種中藥制劑，屬于中藥領(lǐng)域，具體地說是一種以中草藥為原料配制 的發(fā)酵中藥制劑及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 對于骨病病癥的西醫(yī)治療方法，如血栓則需活血化瘀，可使用維腦路通等西藥改 善腦供血，但不適合長期服用，不良反應(yīng)的報告也有逐年增多的趨勢；如病灶為淤血，可通 過手術(shù)取出血塊減少壓迫神經(jīng)，同時用維生素營養(yǎng)神經(jīng)，但腦神經(jīng)一旦損傷則幾乎無法恢 復(fù)。
[0003] 中風(fēng)后遺癥、腦動脈硬化、腦萎縮、外傷淤血、四肢麻木、高血壓、骨質(zhì)增生、腰間盤 突出、跌打瘀腫及癌癥疼痛誘發(fā)癱瘓的機(jī)率較大，急性期治療后每年有大量人群因為上述 原因?qū)е掳c瘓，在未形成癱瘓前的預(yù)防或癱瘓后的治療，都是我們醫(yī)藥工作者需要研究的 課題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種發(fā)酵中藥制劑及其制備方法和應(yīng)用
[0005] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：
[0006] -種骨病的發(fā)酵中藥制劑，將側(cè)耳在中藥原料中發(fā)酵所得，所述中藥原料按重量 份數(shù)計：紅花20-40份、血竭20-40份、三七20-40份、乳香20-40份、沒藥20-40份、川烏15-35 份、草烏15-35份、松節(jié)20-40份、馬錢子20-40份、馬勃15-35份、細(xì)辛15-35份、自然銅15-35 份、姜黃20-40份、靈芝15-35份、干漆20-40份、烏蛇20-40份、木瓜20-40份、土木鱉10-30份、 冰片10-30份、兒茶1-10份和王不留行20-40份;所述側(cè)耳為Pleurotus sp.，已于2014年4月 14日保藏在"中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心"，保藏編號為CGMCC No.9060〇
[0007] 所述中藥原料按重量份數(shù)計，紅花20份、血竭20份、三七20份、乳香20份、沒藥20 份、川烏15份、草烏15份、松節(jié)20份、馬錢子20份、馬勃15份、細(xì)辛15份、自然銅15份、姜黃20 份、靈芝15份、干漆20份、烏蛇20份、木瓜20份、土木鱉10份、冰片10份、兒茶1份和王不留行 20份。
[0008] 所述發(fā)酵中藥制劑作為外用藥物，可以制成膏狀、錠劑、貼劑或丸劑。
[0009] 骨病的發(fā)酵中藥制劑的制備方法：
[0010] (1)按重量份數(shù)計，將紅花20-40份、血竭20-40份、三七20-40份、乳香20-40份、沒 藥20-40份、川烏15-35份、草烏15-35份、松節(jié)20-40份、馬錢子20-40份、馬勃15-35份、細(xì)辛 15-35份、自然銅15-35份、姜黃20-40份、靈芝15-35份、干漆20-40份、烏蛇20-40份、木瓜20-40份、土木鱉10-30份、冰片10-30份、兒茶1-10份和王不留行20-40份的中藥原料混合，待 用；
[0011] (2)將側(cè)耳接種到上述中藥原料中發(fā)酵，所得發(fā)酵物調(diào)成糊狀即為發(fā)酵中藥制劑；
[0012] 所述側(cè)耳(Pleurotus sp ·)，已于2014年4月14日保藏在"中國微生物菌種保藏管 理委員會普通微生物中心"，保藏編號為CGMCC No.9060。
[0013] 所述步驟(2)將側(cè)耳按質(zhì)量百分比為1-5%的量接種于中藥原料中，并在35-65°C 下發(fā)酵1-7天。
[0014] 骨病的發(fā)酵中藥制劑的應(yīng)用，所述發(fā)酵中藥制劑作為制備癱瘓的藥物。
[0015] 所述發(fā)酵中藥制劑作為能夠治療中風(fēng)后遺癥、腦動脈硬化、腦萎縮、外傷淤血、四 肢麻木、高血壓、骨質(zhì)增生、腰間盤突出、跌打瘀腫及癌癥所引起的癱瘓的藥物。
[0016] 本發(fā)明所有益技術(shù)效果
[0017] 本發(fā)明發(fā)酵中藥制劑，主治中風(fēng)后遺癥、腦動脈硬化、腦萎縮、外傷淤血、四肢麻 木、高血壓、骨質(zhì)增生、腰間盤突出、跌打瘀腫及癌癥疼痛，同時用于因上述疾病引起癱瘓前 的預(yù)防或癱瘓后的治療，效果明顯。其在治療疾病或提早預(yù)防重癥發(fā)生、緩解疼痛方面有很 好效果，可長期單獨(dú)或配合其他藥物使用，無毒副作用，對身體機(jī)能的恢復(fù)有很好的效果。
[0018] 本發(fā)明配制的發(fā)酵中藥制劑有活血通絡(luò)、開竅醒神、消腫止痛的功效，主治中風(fēng)后 遺癥、腦動脈硬化、腦萎縮、外傷淤血、四肢麻木、高血壓、骨質(zhì)增生、腰間盤突出、跌打瘀腫 及癌癥疼痛，同時預(yù)防或治療因患上述疾病引起的癱瘓，在治療疾病或提早預(yù)防重癥發(fā)生、 緩解疼痛方面有很好效果，可長期單獨(dú)或配合其他藥物使用，無毒副作用，對身體機(jī)能的恢 復(fù)有很好的效果，配制方法操作簡單，可大規(guī)模生產(chǎn)。
【具體實施方式】
[0019]主要成分:紅花、血竭、三七、乳香、沒藥、川烏、草烏、松節(jié)、馬錢子、馬勃、細(xì)辛、自 然銅、姜黃、靈芝、干漆、烏蛇、木瓜、土木鱉、冰片、兒茶和王不留行。
[0020] 功能主治:活血通絡(luò)、開竅醒神、消腫止痛;主治中風(fēng)后遺癥、腦動脈硬化、腦萎縮、 外傷淤血、四肢麻木、高血壓、骨質(zhì)增生、腰間盤突出、跌打瘀腫及癌癥疼痛，同時預(yù)防或治 療因患上述疾病引起的癱瘓。
[0021] 用法用量:局部或穴位貼敷，每個用6天，間隔3天再換另一個。
[0022]規(guī)格:4g/個
[0023]於藏:密封、防熱、防潮。
[0024] 實施例1
[0025] 1.按重量份數(shù)計，取紅花20份、血竭20份、三七20份、乳香20份、沒藥20份、川烏15 份、草烏15份、松節(jié)20份、馬錢子20份、馬勃15份、細(xì)辛15份、自然銅15份、姜黃20份、靈芝15 份、干漆20份、烏蛇20份、木瓜20份、土木鱉10份、冰片10份、兒茶1份和王不留行20份的中藥 原料藥，混合粉碎，過100目篩，混勻制成中藥混合細(xì)粉；
[0026] 2.將側(cè)耳接種于PDA固體培養(yǎng)基，在20°C、培養(yǎng)70小時，得側(cè)耳純化的單菌落。
[0027] 3.將單菌落側(cè)耳按質(zhì)量分?jǐn)?shù)3%接種量接種于上述中藥混合細(xì)粉中，65°C發(fā)酵7 天，得到產(chǎn)物；
[0028] 4.上述產(chǎn)物經(jīng)加熱調(diào)成糊狀制成中藥膏，將制成的中藥膏分裝成每個4g，即得。
[0029] 所述側(cè)耳(Pleurotus sp·)，已于2014年4月14日保藏在"中國微生物菌種保藏管 理委員會普通微生物中心"，保藏編號為CGMCC No.9060,保藏單位地址為北京市朝陽區(qū)北 辰西路1號院3號。
[0030] 對所述側(cè)耳(Pleurotus sp.)進(jìn)行DNA檢測：
[0031] (l)DNA 提取
[0032] 用FastDNA SPIN土壤DNA提取試劑盒（MP Biomedicals，Santa Ana,CA)提取真菌 DNA 〇
[0033] (2)PCR 擴(kuò)增
[0034] PCR擴(kuò)增引物：
[0037] PCR擴(kuò)增程序
[0039] ⑶測序
[0040] 將PCR產(chǎn)物委托上海生物工程有限公司測序 [0041]基因序列結(jié)果：
[0043] (4)比對結(jié)果，經(jīng) NCBI(National Center of Biotechnology Information [www .ncbi.nlm.nih.gov])數(shù)據(jù)庫比對，結(jié)果如下：Pleurotus ostreatus isolate NW42618S ribosomal RNA gene(登錄號：EU622251.1)
[0044] Pleurotus ostreatus即側(cè)耳。
[0045] 實施例2
[0046] 1.按重量份數(shù)計，取紅花30份、血竭30份、三七20份、乳香20份、沒藥30份、川烏20 份、草烏15份、松節(jié)30份、馬錢子30份、馬勃20份、細(xì)辛15份、自然銅20份、姜黃30份、靈芝15 份、干漆25份、烏蛇25份、木瓜20份、土木鱉15份、冰片15份、兒茶5份和王不留行25份的中藥 原料藥，混合粉碎，過100目篩，混勻制成中藥混合細(xì)粉；
[0047] 2.將側(cè)耳接種于PDA固體培養(yǎng)基，在35°C、培養(yǎng)120小時，得側(cè)耳純化的單菌落。
[0048] 3.將單菌落側(cè)耳按質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%接種量接種于上述中藥混合細(xì)粉中，65°C發(fā)酵7 天，得到產(chǎn)物；
[0049] 4.上述產(chǎn)物用香油調(diào)成糊狀制成中藥膏，將制成的中藥膏分裝成每個4g，即得。
[0050]臨床前試驗
[00511試驗1.皮膚刺激試驗
[0052]試驗?zāi)康模河^察給動物皮膚涂抹本發(fā)明的制劑后，對動物完整和破損皮膚所產(chǎn)生 的局部刺激反應(yīng)情況，為臨床用藥的安全性提供參考。
[0053]受試藥物:本發(fā)明為中藥膏藥劑型，成黑褐色，有粘性、溶于酒精，不溶于水。由遼 寧省中醫(yī)研究院劑型研究室提供，將制劑用95%醫(yī)用酒精1:0.5稀釋后備用。
[0054]受試動物:體重2.0-2.5kg大耳白家兔8只，由中國醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，實 驗動物合格證號:遼實條合字1號與遼實質(zhì)合字008。
[0055]試驗方法：
[0056] 1)完整皮膚刺激試驗:取預(yù)先備好的健康家兔4只，雌、雄各半，脊柱兩側(cè)剪毛后使 用脫毛劑脫毛(采用現(xiàn)有脫毛劑）。脫毛面積為150cm 2,24小時后檢查脫毛區(qū)皮膚無損傷后， 左側(cè)脫毛區(qū)涂抹上述實施例獲得的中藥膏作為受試藥物，右側(cè)脫毛區(qū)涂抹95%醫(yī)用酒精 lml作為溶媒對照，24小時后用75%醫(yī)用酒精洗去左側(cè)受試藥物，去除受試藥物后的1、24、 48、72小時，肉眼觀察左側(cè)涂抹部位有無紅斑和水腫的皮膚刺激反應(yīng)，在四個觀察時間點(diǎn) 上，均未見皮膚紅斑和水腫形成。根據(jù)文獻(xiàn)（中華人民共和國衛(wèi)生部藥政管理局《中藥新藥 研究指南》，P210)評價標(biāo)準(zhǔn)，皮膚刺激反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)平均分值均為0分。
[0057] 2)破損皮膚刺激試驗:前期準(zhǔn)備與試驗1)完整皮膚刺激試驗相同，不同點(diǎn)為脫毛 后，左、右側(cè)脫毛區(qū)均用6號針頭劃破皮膚，以組織液滲出，不出血為度，每側(cè)平行劃破皮膚 長約1 cm的破損線三條(間隔為0.5cm)，左、右兩側(cè)皮膚的破損程度應(yīng)保持基本一致，涂藥及 觀察同試驗1)。結(jié)果根據(jù)觀察，涂藥區(qū)和對照區(qū)均未見皮膚紅斑和水腫形成，破損皮膚24小 時后開始結(jié)痂，涂藥區(qū)與對照區(qū)平均分值均為〇分。
[0058]試驗結(jié)論:參照文獻(xiàn)皮膚刺激性強(qiáng)度評價標(biāo)準(zhǔn)（中華人民共和國衛(wèi)生部藥政管理 局《中藥新藥研究指南》，P210)評價，本發(fā)明的發(fā)酵中藥制劑對家兔完整和破損皮膚均無刺 激性。
[0059]試驗2.皮膚給藥的急性毒性試驗
[0060]試驗?zāi)康模河^察給動物皮膚一次性涂抹大劑量本發(fā)明的制劑后，給藥動物出現(xiàn)的 毒性反應(yīng)和死亡情況，測定皮膚給藥的最大耐受量，為臨床用藥的安全性提供動物急性毒 性參考。
[0061]受試藥物:本發(fā)明為中藥膏藥劑型，成黑褐色，有粘性、溶于酒精，不溶于水。將藥 劑用95%醫(yī)用酒精稀釋1倍，使其成為粘稠糊狀，備用。
[0062]受試動物:體重18_22g昆明種封閉群小白鼠，由中國醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供， 實驗