，術(shù)語預(yù)防是指熟練技術(shù)人員識別易感病狀的人群，使得在病狀發(fā)作之前可進(jìn)行本 發(fā)明的組合物的施用的能力。此術(shù)語并不意味著病狀必須完全消除。
[0073] 如本文所使用的"有效量"是指本發(fā)明的肽足夠表現(xiàn)出可檢測治療效果的量。通過 例如臨床癥狀的改善、或者預(yù)防、減輕或改善并發(fā)癥來測定效果。患者的精確有效量取決于 患者的體重、尺寸、和健康;病狀的性質(zhì)和程度；以及施用選擇的治療劑或者治療劑的組合。 通過在醫(yī)生的技術(shù)和判斷內(nèi)的常規(guī)實(shí)驗(yàn)來測定給定情況的治療有效量。
[0074] 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供治療肥胖、高血壓或代謝綜合征的方法。相應(yīng)地， 本發(fā)明的一個實(shí)施方案是治療肥胖的方法，其包括向患者施用有效量的組合物，該組合物 包括由氨基酸序列661^、61^、1^^、1^6、11^、61^、1^、或61^組成的至少一種肽、或其藥學(xué)上可 接受的鹽。另一實(shí)施方案是治療高血壓的方法，其包括向患者施用有效量的組合物，該組合 物包括由氨基酸序列661^、61^、11^、11^、1^^、61^、1^、或61^組成的至少一種肽、或其藥學(xué)上 可接受的鹽。另一實(shí)施方案是治療代謝綜合征的方法，其包括向患者施用有效量的組合物， 該組合物包含由氨基酸序列GGL、GLG、LGL、LLG、LGG、GLL、LG、或GL組成的至少一種肽、或其 藥學(xué)上可接受的鹽。在任一上述實(shí)施方案中，在肽中一個或多個亮氨酸被亮氨酸的D-異構(gòu) 體獨(dú)立地取代。就方法而言，肽的每個可能亞組合被本發(fā)明具體涵蓋。
[0075] 在又一方面中，本發(fā)明提供在前驅(qū)糖尿病或糖尿病患者中治療、減少和/或改善與 糖尿病相關(guān)的并發(fā)癥的方法，其包括向患者施用組合物，其包含由氨基酸序列GGUGLG、 LGL、LLG、LGG或GLL組成的至少一種肽。本發(fā)明也提供在前驅(qū)糖尿病或糖尿病患者中預(yù)防、 減少和/或改善與糖尿病相關(guān)的并發(fā)癥的方法，其包括向患者施用組合物，其包含由氨基酸 序列GL或LG組成的至少一種肽。它也提供在糖尿病患者中預(yù)防、減少、或改善與糖尿病相關(guān) 的并發(fā)癥的方法，其包括向患者施用有效量的組合物，該組合物包含由氨基酸序列GGL、 GLG、LGL、LLG、LGG或GLL組成的至少一種肽、或者所述肽的藥學(xué)上可接受的鹽。它也提供在 糖尿病患者中預(yù)防、減少、或改善與糖尿病相關(guān)的并發(fā)癥的方法，其包括向患者施用有效量 的組合物，該組合物包含由氨基酸序列GGdL、GdLG、GdLL、GLdL、GdLdL、dLLG、LdLG、dLdLG、 dLGG、dLGL、LGdL或dLGdL組成的至少一種肽、或者所述肽的藥學(xué)上可接受的鹽。就方法而 言，肽的每個可能亞組合被本發(fā)明具體涵蓋。在一些實(shí)施方案中，糖尿病是1型糖尿病。在一 些實(shí)施方案中，糖尿病是2型糖尿病。施用預(yù)防、減少或改善至少一種與糖尿病相關(guān)的并發(fā) 癥的治療有效量的組合物，這些并發(fā)癥包括但不限于以下：心血管疾病[例如，冠狀動脈病 (有時稱為缺血性心臟?。?、腦血管疾病(例如中風(fēng)或者短暫性缺血發(fā)作）、心力衰竭、粥樣硬 化、或者動脈末梢疾病];慢性腎臟??；腎衰竭;膀胱問題;勃起機(jī)能障礙；胃輕癱;眼部疾病 (例如糖尿病性視網(wǎng)膜病、白內(nèi)障或青光眼）；糖尿病性神經(jīng)病(外周、自主、近側(cè)或病灶）；足 或皮膚潰瘍;或下肢截肢。
[0076] 可通過任何合適的途徑來施用本發(fā)明的化合物。例如，能夠通過口服、眼睛、皮內(nèi)、 腹膜內(nèi)（"ip"）、鼻內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)或靜脈內(nèi)途徑來施用本發(fā)明的組合物。
[0077] 適合于口服施用的配制物包括例如固體、半固體和液體體系，例如，片劑;含有多 種或納米粒子、液體或粉末的軟和硬膠囊;錠劑(包括填充液體型）；咀嚼劑;凝膠;快速消化 劑型;膜;胚珠;噴霧劑。在一些實(shí)施方案中，施用本領(lǐng)域已知的遞送媒介物來配制口服施用 的本發(fā)明的肽，其包括但不限于微球體、脂質(zhì)體、腸包衣干燥乳劑或者納米粒子。
[0078] 口服施用的液體劑型包括但不限于藥學(xué)上可接受的乳劑、微乳劑、溶液劑、混懸 劑、糖漿劑和酏劑。除了活性肽之外，液體劑型可含有本領(lǐng)域通常使用的惰性稀釋劑，例如， 水或其他溶劑、增溶劑和乳化劑，例如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、芐醇、苯酸芐酯、 丙二醇、1，3_ 丁二醇、二甲基甲酰胺、油類(特別地，棉籽、落花生、玉米、胚芽、橄欖、蓖麻、和 芝麻油）、甘油、四氫糠醇、聚乙二醇和山梨聚糖的脂肪酸酯、及其混合物。除了惰性稀釋劑 之外，口服組合物還可包括佐劑，例如潤濕劑、乳化劑和懸浮劑、甜味劑、調(diào)味劑、和芳香劑。
[0079] 口服施用的固體劑型包括膠囊劑、片劑、丸劑、粉劑、和顆粒劑。在這些固體劑型 中，使活性肽與至少一種惰性、藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體，例如檸檬酸鈉或者磷酸二鈣 和/或以下混合:a)填料或填充劑，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇、和硅酸;b)粘合 劑，例如羧甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、鹿糖、和阿拉伯膠;c)濕潤劑，例如 甘油;d)崩解劑，例如瓊脂、碳酸鈣、土豆或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸鹽、和碳酸鈉;e)溶液 阻滯劑，例如石蠟;f)吸收促進(jìn)劑，例如季銨化合物;g)潤濕劑，例如，鯨蠟醇和甘油單硬脂 酸酯;h)吸收劑，例如高嶺土和膨潤土；以及i)潤滑劑，例如滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固 體聚乙二醇、硫酸十二烷基酯鈉、及其混合物。在膠囊劑、片劑和丸劑的情況下，劑型也可包 括緩沖劑。活性化合物與如上所示一種或多種賦形劑也可在微膠囊劑型中。使用諸如乳糖 (lactose)或乳糖(milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等的這些賦形劑也可將類似類型的 固體組合物采用為在軟和硬填充明膠膠囊中的填料。使用藥物配制領(lǐng)域眾所周知的諸如腸 溶衣和其他涂料的涂料和殼料可制備片劑、包衣片劑(dragees )、膠囊劑、丸劑、和顆粒劑的 固體劑型。使用合適的分散劑或潤濕劑和懸浮劑，根據(jù)已知技術(shù)可配制可注射制劑，例如， 無菌可注射水性或油質(zhì)混懸劑。無菌可注射制劑也可為在無毒非腸道可接受的稀釋劑或溶 劑中無菌可注射溶液劑、混懸劑或乳劑，例如在1，3_ 丁二醇中的溶液?？衫玫目山邮艿拿?介物和溶劑是水、林格氏溶液、U.S.P.和等張氯化鈉溶液。此外，無菌、固定油是通?？刹捎?的溶劑或懸浮介質(zhì)。用于該目的，可采用任何溫和固定油，包括合成甘油單酯或甘油二酯。 此外，諸如油酸的脂肪酸用于制備注射劑。例如，通過過濾透過細(xì)菌阻隔過濾器、或者通過 在使用之前能夠溶解或分散在無菌水或其他無菌可注射介質(zhì)中的無菌固體組合物中并入 殺菌劑能夠消毒可注射配制物。
[0080] 具體涵蓋使用本發(fā)明的組合物聯(lián)合本領(lǐng)域已知的其他糖尿病藥物來治療前驅(qū)糖 尿病或者糖尿病患者。在一些實(shí)施方案中，使用本發(fā)明的組合物治療使得可降低一種或多 種其他糖尿病藥物的劑量，因而減少與一種或多種其他藥物相關(guān)的副作用。在一些實(shí)施方 案中，其他糖尿病藥物是胰島素。在一些實(shí)施方案中，其他糖尿病藥物是雙胍(例如二甲雙 胍）。在一些實(shí)施方案中，其他糖尿病藥物是噻唑烷二酮(例如吡格列酮）。在一些實(shí)施方案 中，其他糖尿病藥物是DPP-4抑制劑(例如西他列汀）。換而言之，能夠聯(lián)合諸如用于待治療 病狀的監(jiān)護(hù)標(biāo)準(zhǔn)所使用的那些其他藥物來使用本發(fā)明的組合物。在一些實(shí)施方案中，藥物 是他汀(statin)(包括但不限于阿伐他汀、洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀羅蘇伐他汀、氟伐 他汀、和匹伐他?。?。在一些實(shí)施方案中，藥物是降低血壓藥物[包括但不限于，血管緊張素 轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑，例如卡托普利、賴諾普利、和雷米普利;血管緊張肽II受體阻斷劑，例 如氯沙坦、奧美沙坦和纈沙坦;β阻斷劑，例如美托洛爾、納多洛爾和噴布洛爾；以及鈣通道 阻斷劑，例如氨氯地平、地爾硫卓和硝苯地平]。
[0081] 在又另一方面中，本發(fā)明提供用于向需要其的患者施用本發(fā)明的組合物的試劑 盒，其中試劑盒包括本發(fā)明的組合物、使用組合物的說明書以及用于向患者施用組合物的 裝置。在一些實(shí)施方案中，使用試劑盒施用藥物組合物，該藥物組合物包含由氨基酸序列 GGL、GLG、GLL、LLG、LGL、LGG、GGdL、GdLG、GdLL、GLdL、GdLdL、dLLG、LdLG、dLdLG、dLGG、dLGL、 LGdL或dLGdL組成的至少一種肽、或肽的藥學(xué)上可接受的鹽、以及藥學(xué)上可接受的賦形劑， 其中試劑盒包括組合物、施用組合物的說明書以及用于向患者施用組合物的裝置。在一些 實(shí)施方案中，試劑盒包括藥物組合物，該藥物組合物包含由所述氨基酸序列GGL、GLG、或GLL 組成的至少一種肽。就試劑盒而言，肽的每個可能亞組合被本發(fā)明具體涵蓋。 實(shí)施例
[0082] 通過參照詳細(xì)描述本發(fā)明的示例性實(shí)施方案的以下實(shí)施例來更加完整理解本發(fā) 明。
[0083] 實(shí)施例1
[0084] 測定氨基酸甘氨酸和亮氨酸對血糖的作用。
[0085] 在口服負(fù)荷甘氨酸和葡萄糖之后甘氨酸對血糖的作用
[0086] 在由Jackson Lab(Bar Harbor,Maine)中購買的成年雄性C57BL/6J小鼠中進(jìn)行試 驗(yàn)。通過灌胃給予禁食小鼠葡萄糖（2mg/g體重，在圖1中菱形線，n= 10)或者甘氨酸 (0.35mg/g bw，在圖1中方形線，n = 10)和葡萄糖。測定給予葡萄糖之后0、30、60、90、和 120min時血糖。
[0087]與對照組相比，在甘氨酸組中任何時間點(diǎn)下血糖水平均未顯著改變。
[0088] 在口服負(fù)荷亮氨酸和葡萄糖之后亮氨酸對血糖的作用
[0089]在由Jackson Lab中購買的成年雄性C57BL/6J小鼠中進(jìn)行試驗(yàn)。通過灌胃給予禁 食小鼠葡萄糖(2mg/g體重，在圖2中菱形線，n=10)或者亮氨酸(0.35mg/g bw，在圖2中方形 線，n = 10)和葡萄糖。測定給予葡萄糖之后0、30、60、90、和12011^11時血糖。
[0090] 實(shí)施例2
[0091] 當(dāng)在糖尿病小鼠中口服攝入葡萄糖或淀粉時，Diapin(本發(fā)明的肽GGL)強(qiáng)有力地 降低血糖水平。而且，在KKay糖尿病小鼠中在未禁食條件下Diapin也降低血糖水平 [Yamauchi等人，Nat.Med.， 7(8):971_946( 2001)]。參見圖3。
[0092] 在糖尿病小鼠中口服負(fù)荷葡萄糖之后Diapin抑制血糖的增加
[0093] 在Diapin組中在30、60、90和120min處血糖水平顯著低于對照組中那些。
[0094] 在糖尿病小鼠中在口服負(fù)荷淀粉之后Diapin抑制血糖的增加 [0095] 在由Jackson Lab中購買的成年雄性KKay糖尿病小鼠中進(jìn)行試驗(yàn)。在對照組中（在 圖4中菱形線，n = 10)，口服施用2mg/g bw的劑量的淀粉。在Diapin組(在圖4中方形線，n = 9)，分別口服施用在2mg/g bw和lmg/g bw的劑量下的淀粉和Diapin。在灌胃淀粉和Diapin 之后測定在0、30、60、90和12011^11處血糖。
[0096] 在Diapin組中在30、60、90和120min處血糖顯著低于對照組中那些。
[0097] Diapin降低在糖尿病小鼠中隨機(jī)血糖
[0098]在由Jackson Lab中購買的成年雄性KKay糖尿病小鼠中進(jìn)行試驗(yàn)。在未禁食條件 下，在對照組(在圖5中菱形線，n = 9)中，口服給予蒸餾水以及在Diapin組(在圖5中方形線， n = 9)中，口服給予在lmg/g bw下Diapin。在灌胃Diapin之后測定在0、30、60、90、120、150和 180min處血糖。
[0099] 在Diapin組中在60、90、120、150和180min處血糖水平顯著低于對照組中那些。
[0100] 實(shí)施例3
[0101] Diapin本身刺激在KKay糖尿病小鼠中胰島素分泌。而且，Diapin也增加在糖尿病 小鼠中GLP-1分泌。
[0102] Diapin刺激在糖尿病小鼠中口服負(fù)荷葡萄糖和Diapin之后胰島素分泌
[0103] 在成年雄性KKay糖尿病小鼠中進(jìn)行試驗(yàn)。在禁食條件下，在對照組(在圖6中白色 柱子，n = ll)中，口服施用1.5mg/g bw劑量的葡萄糖。在Diapin組（在圖6中黑色柱子，n = 11)中，分別口服施用lmg/g bw和1.5mg/g bw的Diapin和葡萄糖。收集口服施用葡萄糖和 Diapin之后30min的血樣樣品。使用FreeStyle葡萄糖計(jì)來監(jiān)控血糖以及通過ELISA(Alpco， Cat#80-INSMS-E01)來測定胰島素。
[0104