一種倍半萜化合物在制備抑制急性炎癥藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種倍半祗化合物在制備抑制急性炎癥藥物中的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥技術(shù) 領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 炎癥是機體對各種炎性刺激引起組織損害而產(chǎn)生的一種基本病理過程，也是移除 有害刺激、修復(fù)受損組織的一種保護性反應(yīng)。但是，當炎癥的蔓延與過度反應(yīng)將導(dǎo)致許多非 感染性疾病的發(fā)生，并且過度炎癥反應(yīng)還能引起炎癥性疾病的發(fā)生，甚至導(dǎo)致機體死亡。細 菌感染、組織損傷、血栓等因素均可W引起炎癥反應(yīng)，在一些病例中甚至可引起感染性休 克。目前的抗炎藥物可分為糖皮質(zhì)激素（如可的松、地塞米松、潑尼松等）和非幽體抗炎藥 (NSAID)(如阿司匹林、布洛芬、嗎I噪美辛等)兩大類，運兩類藥物都有明顯的副作用，如腎功 能衰竭、胃腸潰瘍等。因此，研制和發(fā)現(xiàn)新的安全有效的抗炎藥物具有重要的臨床意義。
[0003] 香鱗毛藤[Diyopteris fragrans(L. )Schott]是鱗毛藤科（Diropterideceae)鱗 毛藤屬植物，多年生草本，生于高寒地區(qū)的滑石坡或碎石坡上，由于其葉片表面密被腺毛， 且揉之有揮發(fā)性香味，故稱之為香鱗毛藤。我國的黑龍江省五大連池市為香鱗毛藤主要分 布區(qū)，當?shù)厝嗣窈茉缇鸵呀?jīng)認識到使用香鱗毛藤的水煎液或揉汁能夠治療多種皮膚病及類 風濕性關(guān)節(jié)炎，并發(fā)展出多種民間驗方，運些實例反映出香鱗毛藤是一種極具開發(fā)潛力和 應(yīng)用前景的天然藥用植物資源，并在近年來吸引了人們的廣泛關(guān)注。
[0004] 腺毛是植物表皮細胞具有分泌功能的特化結(jié)構(gòu)，在植物病蟲害防御、抵抗逆境脅 迫、減少水分蒸騰等方面起重要作用。祗類代謝是植物分泌型腺毛中最為活躍的代謝途徑 之一。單祗化合物和倍半祗化合物是構(gòu)成葉面揮發(fā)性化學成分的重要組分，在賦予植物重 要商業(yè)價值的同時，也構(gòu)成了植物的化學防御體系。
[0005] 祗類是重要的植物次生代謝物，其結(jié)果多變、種類繁多，構(gòu)成了次生代謝物種最大 的一類，而且具有多種生理功能。祗類化合物已廣泛應(yīng)用于工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和醫(yī)藥領(lǐng)域中。如青 葛素對惡性追疾有速效作用，紫杉醇是公認的良好抗癌藥物。由于祗類具有廣泛的生物活 性和藥理作用，因此也是天然藥物的主要資源庫。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種倍半祗化合物的制備和抑制急性炎癥 藥物的應(yīng)用，采用的技術(shù)方案如下：
[0007] 本發(fā)明從香鱗毛藤腺毛中提取并鑒定了一種倍半祗化合物，其化學名為 A化icanol，暫無中文名，目前此種倍半祗除香鱗毛藤中發(fā)現(xiàn)外，僅在隱孔菌(Cryptoporus volvatus)、大花地抱菌（A化atrellus conf Iuens)和水寥（Polygonum hy化opiper)個別物 種中發(fā)現(xiàn)。此外，在植物腺毛中發(fā)現(xiàn)尚屬首次。
[000引本發(fā)明的目的在于提供一種倍半祗化合物的制備和抑制急性炎癥藥物的應(yīng)用，具 體是應(yīng)用于抑制急性炎癥的蔓延與康復(fù)，此化合物的抑制急性炎癥效果為首次報道，所述 倍半祗化合物為Albicanol，IUPAC化學名為[(15,4日5,8日5)-5,5,8日-1'11116讓71-2-methyl idene-3,4,4a, 6,7,8-hexahydro-lH-naphthalen-1-yl ]methanol，其化學式為 Cl5出6〇,其結(jié)構(gòu)式如下：
[0010] 優(yōu)選地，所述倍半祗化合物從植物中提取或者化學合成得到的。
[0011] 優(yōu)選地，所述倍半祗化合物提取自香鱗毛藤。
[0012] 優(yōu)選地，所述倍半祗化合物提取自香鱗毛藤的腺毛。
[0013] 優(yōu)選地所述的應(yīng)用，所述倍半祗化合物的提取方法為：
[0014] 用丙酬溶解香鱗毛藤葉片的腺毛代謝產(chǎn)物，過濾后旋蒸，用四氨巧喃溶解濃縮的 香鱗毛藤腺毛揮發(fā)油，然后過MCI柱，調(diào)整甲醇和水的體積比進行梯度洗脫，濃縮后轉(zhuǎn)移至 硅膠粉中，四氨巧喃溶解后室溫過夜，利用層析柱進行分離，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮得到單一的白 色結(jié)晶，獲得A化icanol。
[0015] 更優(yōu)選地，所述倍半祗化合物的提取方法為：
[0016] 用丙酬溶解香鱗毛藤葉片的腺毛代謝產(chǎn)物，過濾后在42°C水浴下進行減壓旋蒸， 將丙酬蒸干后用四氨巧喃溶解濃縮的香鱗毛藤腺毛揮發(fā)油，然后過MCI柱，用50%甲醇-水 洗脫，逐漸增加甲醇濃度至80%進行梯度洗脫，濃縮后將濃縮物轉(zhuǎn)移至硅膠粉中，然后用四 氨巧喃溶解，不斷攬拌，室溫過夜，使用干柱法裝填層析柱，依次將體積比為20:1、18:1、16: 1和12:1的丙酬-石油酸溶劑依次加壓通過層析柱，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮后得到單一的白色結(jié) 晶，獲得A化icanol。
[0017] 本發(fā)明有益效果：
[0018] 1、本發(fā)明提供的香鱗毛藤腺毛中提取的倍半祗A化icanol對急性炎癥具有顯著的 抑制致死率、抑制炎癥因子的表達和促進機體恢復(fù)的顯著作用。是能夠抑制NF-KB信號通路 并提升抑炎因子的抗炎天然產(chǎn)物類藥物，對治療急性炎癥有明顯的效果，具有廣闊的臨床 應(yīng)用前景。
[0019] 2、倍半祗A化icanol作為植物合成分泌的一種具有一定揮發(fā)性的物質(zhì)，對植物有 化學防護作用，也具有藥物活性。發(fā)明人通過實驗研究發(fā)現(xiàn)，A化icanol處理急性炎癥小鼠 可顯著降低小鼠死亡率，而且存活率隨濃度的增加呈現(xiàn)劑量依賴性。對處理組小鼠的肺臟 切片進行觀察，與LPS模型組相比，A化icanol處理的小鼠肺臟腫脹程度明顯減弱，細胞浸潤 降低，當達到25mg/kg劑量時肺臟腫脹基本消失，肺泡清晰，恢復(fù)到正常肺臟狀態(tài)，說明此化 合物在低濃度時可W有效抑制炎癥的惡化和蔓延，而且在劑量增加時對機體有恢復(fù)作用。
[0020] 3、在分子機制方面，發(fā)明人對小鼠的免疫器官脾臟進行RNA提取W檢測相關(guān)炎癥 因子的基因表達情況。在炎癥反應(yīng)過程中包括促炎因子與抑炎因子。促炎因子包括IL-I， IL-6和TNF-a，其都是受NF-KB信號通路調(diào)控；抑炎因子有IL-10。在實驗中，發(fā)明人通過 Real-time PCR對W上因子進行檢測。結(jié)果說明倍半祗A化icanol能隨劑量增加抑制NF-KB 的表達，同時也抑制了此通路中比-I，化-6和了^-〇的表達;與此同時，在LPS的刺激下，抑炎 因子IL-IO則有顯著上升，表明此化合物有助于機體抵抗炎癥及恢復(fù)健康。
【附圖說明】
[0021] 圖1為實施例1的不同濃度A化icanol處理急性炎癥小鼠存活率.
[0022] 圖2為實施例1的不同處理組小鼠肺臟切片肥染色結(jié)果；
[0023] (A，CK對照組;B，25mg/kg A化icanol組；C，LPS急性炎癥組;D，5mg/kg A化icanol+ LI^組；E，10mg/kg A化icanol+LI^組；F，25mg/kg A化icanol+LI^組）。
[0024] 圖3為實施例1中的NF-KB在不同濃度處理下的變化。
[0025] 圖4為實施例1中TNF-a在不同濃度處理下的變化。
[00%]圖5為實施例1中IL-I在不同濃度處理下的變化；
[0027] (A，A化icanol處理對小鼠的IL-Ia抑制結(jié)果；B，A化icanol處理對小鼠的IL-I巧審 制結(jié)果）。
[0028] 圖6為實施例1中IL-6在不同濃度處理下的變化。
[0029] 圖7為實施例1中IL-IO在不同濃度處理下的變化。
【具體實施方式】
[0030] 下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明做進一步說明，但本發(fā)明不受實施例的限制。
[0031] 下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的試 驗材料，如無特殊說明，均為自常規(guī)生化試劑商店購買得到的。
[0032] W下實驗設(shè)及的材料及儀器：
[0033] 1)倍半祗 Albicanol
[0034] 提取自采集于黑龍江五大連池二、=池的香鱗毛藤葉片，實驗室內(nèi)保存。
[0035] 2)藥物與試劑
[0036] LPS(脂多糖），購自Sigma公司，W滅菌的生理鹽水溶解。
[0037] De xame thas one (地塞米松)購自河南鄭州樂峰制藥有限公司。
[0038] Trizol,用于提取mRNA細胞裂解試劑，購自Life I'echnologies公司。
[0039] SYBR reagent，qRT-PCR反應(yīng)試劑，購自全式金（TransGene)公司。
[0040] 反轉(zhuǎn)錄試劑盒，用于反轉(zhuǎn)錄mRNA,購自全式金(TransGene)公司。
[0041] 3)實驗動物
[0042] 昆明小鼠（雌性,10-11周周齡），購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司。
[0043] 4)實驗儀器
[0044] 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，江蘇予華有限公司生產(chǎn)
[0045] AB]；7500 Thermal Cycler qRT-PCR儀器，澳大利亞Applied Biosystems公司。
[0046] 酶標儀，美國Molecular Devices公司，SpectraMax Microplate Reader系列。
[0047] 實施例1、香鱗毛藤腺毛中A化icanol的提取分離與鑒定 [004引實驗方法：
[0049]用綴子夾取一小塊用丙酬薩濕的醫(yī)用脫脂棉，用手指按住香鱗毛藤的一端，緩慢 且用力擦拭整根香鱗毛藤葉片，盡量將擦涂的腺毛最大化，在此過程中注意勤更換丙酬和 棉花，把溶有腺毛代謝產(chǎn)物的丙酬過濾W除雜質(zhì)。過濾后的丙酬溶液存于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，安 裝在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀之后于42°C水浴減壓旋蒸，當丙酬蒸干后關(guān)掉旋轉(zhuǎn)開關(guān)和水浴開關(guān)，保存 旋蒸瓶內(nèi)的腺毛揮發(fā)油，稱重。將濃縮的香鱗毛藤腺毛揮發(fā)油用四氨巧喃溶解后過MCI柱 上，使用化蒸饋水沖洗，棄沖洗廢液，而后使用50 %甲醇-水化洗脫，收集洗脫液，再不斷增 加甲醇濃度進行梯度洗脫，直至80 %甲醇-水，收集洗脫液，使用化C板鑒定洗脫液所含的化 學成分，而后使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進行濃縮，洗脫成分為黃色油狀濃稠液體，稱量低溫保存。 [0050]將濃縮物小屯、轉(zhuǎn)移至硅膠粉中，四氨巧喃溶解，不斷攬拌，室溫過夜W揮發(fā)溶劑， 使用干柱法裝填層析柱，硅膠與樣品體積比為30:1，依次將體積比為20:1、18:1、16:1和12: 1的丙酬-石油酸溶劑依次加壓通過層析柱，加壓通過層析柱，回收液體，TLC鑒定其成分后， 在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮，最終得到單一的白色結(jié)晶，獲得A化icanol。
[0化1 ] 實施例2、A化icanol