035] 1.1.2探頭超聲時間考察
[0036] 薄膜分散法制備脂質(zhì)體后(稱取卵憐脂、膽固醇、麥角醬醇，加入氯仿溶解，旋轉(zhuǎn)蒸 發(fā)成薄膜，真空干燥，水化，超聲脫膜），通過探頭超聲將大粒徑的脂質(zhì)體整粒成小粒徑脂質(zhì) 體。本實驗考察了不同探頭超聲時間對于麥角醬醇脂質(zhì)體包封率的影響。設(shè)置探頭超聲時 間為 1〇111111、2〇111111、3〇111111、4〇111111，其包封率分別為79.45%、91.73%、95.86%、95.94%。隨 著時間增加，包封率隨之增大，30min時包封率不再變化，且探頭超聲時間過長，容易導致脂 質(zhì)體破裂。
[0037] 1.1.3麥角醬醇載藥量考察
[0038] 本實驗考察了不同麥角醬醇載藥量對包封率的影響。麥角醬醇載藥量為5%、 10%、15%、20%，其包封率分別為90.76%、85.81%、69.79%、73.09%。
[0039] 1.2響應(yīng)面試驗
[0040] 1.2.1星點設(shè)計
[0041] 單因素試驗結(jié)果表明卵憐脂與膽固醇比例、探頭超聲時間和載藥量3個因素對麥 角醬醇包封率具有顯著影響。根據(jù)星點設(shè)計原理，選擇卵憐脂與膽固醇比例、探頭超聲時間 和載藥量為自變量，每個自變量確定3個水平，分別用代碼一1，0，1表示，共15個試驗點（3個 中屯、點）。每個試驗平行3次進行。W麥角醬醇脂質(zhì)體包封率為評價指標，采用星點設(shè)計(表 1)優(yōu)選制備工藝條件。
[0042] 表1麥角醬醇脂質(zhì)體制備工藝星點試驗安排(n = 3)
[0044] 1.2.2模型的建立與方差分析
[0045] 運用Desi即-Expert.V 8.0.6.1軟件對表中數(shù)據(jù)進行二次多元回歸擬合，得自變 量與因變量間的回歸方程Y = 90.40+17.87X1-2.58X2+4.14)(3-7.62XiX2+6.28XiX3+ 3.03X2)(3-21.95Xi 2 - 4.29X22 - 2.44X32。對該回歸模型進行顯著性檢驗。表2結(jié)果表明Xi，Xi2 對響應(yīng)值的線性效應(yīng)極顯著，拉，X3，X/對響應(yīng)值的曲面效應(yīng)作用顯著，交互項Xi拉、M3作用 顯著。該模型的F = 82.84，P<0.000 1，表明該二次多元回歸模型極顯著，回歸方程相關(guān)系 數(shù)(r)0.9967，說明模型能解釋99.67%響應(yīng)值的變化，擬合情況良好。
[0046] 表2回歸模型方差分析
[0047]
[004引 1.2.3響應(yīng)面分析
[0049] 根據(jù)回歸方程，在保持1個因素編碼值為0時，運用Design-Expert. V8.0.6.1軟件 繪制另2個因素與麥角醬醇包封率關(guān)系的=維響應(yīng)面圖。響應(yīng)面為響應(yīng)值對兩兩交互因素 所構(gòu)成的=維空間曲線圖，效應(yīng)面曲線越睹峭，說明各自變量對響應(yīng)值的影響越明顯。取回 歸模型最大值點，對應(yīng)的實測值為卵憐脂與膽固醇比例為5:1，探頭超聲時間為20min，麥角 醬醇載藥量為10 %。
[0化0] 1.2.4驗證試驗
[0051 ] 為驗證模型方程的適用性，精密稱取卵憐脂98mg，膽固醇IOmg，麥角醬醇12mg，共3 份，按W下最佳制備工藝條件進行驗證試驗，結(jié)果3批脂質(zhì)體包封率的平均值為90.49 %， RSD 2.64%，與預(yù)測值90.40%的偏差0.10%，表明建立的數(shù)學模型具有良好的預(yù)測性，優(yōu) 選的工藝條件重復性好。
[0052] 麥角醬醇脂質(zhì)體最佳制備工藝為：卵憐脂與膽固醇摩爾比5:1，麥角醬醇載藥 10%、探頭超聲20min。
[0053] 具體工藝條件：卵憐脂98mg、膽固醇IOmg W及麥角醬醇12mg，用1 OmL氯仿充分溶解 后，置于40°C水浴的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上旋干，真空干燥化，加入IOmL氯化錠溶液(0.5mmol ? [I) 于室溫下置于水平搖床上水化30min，轉(zhuǎn)速14化pm ? mL-i。水化后，超聲脫膜，將脂質(zhì)體放置 于冰浴下，探頭超聲20min，超聲2s，停1S，超聲功率900W。依次采用0.8皿、0.45凹1、0.22皿微 孔濾膜過濾，最后用0.1 wii的聚碳酸醋膜高壓擠出(壓力為400-5(K)psi)，即得。
[0054] 二、麥角醬醇聯(lián)合順銷主動載藥脂質(zhì)體最佳制備工藝考察
[00對 2.1單因素試驗
[0056] 2.1.1麥角醬醇/順!銷質(zhì)量比的考察
[0057] 本實驗考察了麥角醬醇與順銷的質(zhì)量比，相當于順銷在脂質(zhì)體中的載藥量，按 1. 2.4制備最佳工藝麥角醬醇脂質(zhì)體后，將麥角醬醇脂質(zhì)體加入截留分子量為8000-14000化的透析袋中，封閉透析袋，投入蒸饋水中透析化，更換一次透析液(蒸饋水），繼續(xù)透 析化。按麥角醬醇脂質(zhì)體與不同濃度順銷溶液混合進行解育，設(shè)置二者的質(zhì)量比為0.313: 1、0.625:1、1.25:1、2.5:1、5:1，結(jié)果顯示當麥角醬醇與順銷的質(zhì)量比為2.5:1時，順銷的包 封率最大，達到35.33 %。
[0化引2.1.2解育時間的考察
[0059] 本實驗考察了順銷溶液解育時間分別為5、10、20、40111111時的包封率，結(jié)果顯示當 解育時間為20min時，順銷包封率為最大，31.07%。
[0060] 2.1.3解育溫度的考察
[0061 ] 本實驗考察了 40、50、60、80°C溫度對于順銷包封率的影響，結(jié)果顯示50°C與80°C 時的包封率最大，但是過高的溫度會導致卵憐脂發(fā)生氧化而產(chǎn)生溶血性。
[0062] 2.2正交試驗
[0063] 在單因素試驗考察的基礎(chǔ)上，采用=因素=水平正交設(shè)計優(yōu)化麥角醬醇聯(lián)合順銷 主動載藥脂質(zhì)體，選用L9(34)正交表安排試驗。選擇解育時間、解育溫度、順銷濃度3個因素 作為考察因素確定最佳麥角醬醇聯(lián)合順銷主動載藥脂質(zhì)體制備工藝。正交設(shè)計因素水平表 見，正交設(shè)計試驗方案及實驗結(jié)果分析見表3，表4。
[0064] 表 3L9(34)正交表
[0066]表化9(34)實驗計劃表
[0068] 采用單指標正交設(shè)計試驗結(jié)果的極差分析法。結(jié)果表明：各因素對順銷包封率的 影響程度為C〉A(chǔ)〉B，最佳組合為麥角醬醇聯(lián)合順銷主動載藥脂質(zhì)體最佳工藝為AiBsCi,即 銷濃度為0.150mg ? mL-i，解育溫度70°C，解育時間lOmin?？紤]到70°C位于大豆卵憐脂的相 變溫度W上，且解育溫度運一因素對包封率的影響不大，因此將最佳工藝調(diào)整為順銷濃度 為0.150mg ? mL-i，解育溫度50°C，解育時間lOmin，對調(diào)整前后的最佳工藝進行驗證。
[0069] 2.3正交試驗驗證
[0070] 按正交試驗最佳工藝及調(diào)整后最佳工藝分別制備3批麥角醬醇聯(lián)合順銷主動載藥 脂質(zhì)體，通過超濾法對順銷包封率、平均粒徑、Zeta電位進行測定。3批脂質(zhì)體平均包封率結(jié) 果分別為49.04%及52.24%。表5、表6結(jié)果表明，最佳工藝及調(diào)整后最佳工藝的包封率、平 均粒徑、Zeta電位均無顯著性差異，因此，后續(xù)實驗采用調(diào)整后最佳工藝，即順銷濃度 0.150mg ? mL-i，解育溫度50°C，解育時間IOmin進行麥角醬醇聯(lián)合順銷主動載藥脂質(zhì)體的制 備。
[0071] 表5最佳工藝驗證結(jié)果
[0072]
[0073] 表6調(diào)整后最佳工藝驗證結(jié)果
[0075] =、麥角醬醇聯(lián)合順銷主動載藥脂質(zhì)體質(zhì)量評價
[0076] 3.1形態(tài)觀察
[0077] 3.1.1外觀形態(tài)
[0078] 麥角醬醇聯(lián)合順銷主動載藥脂質(zhì)體溶液呈乳白色，色澤均勻。
[0079] 3.1.2顯微形態(tài)
[0080] 采用負染法制備樣品。在室溫條件下，取麥角醬醇聯(lián)合順銷主動載藥脂質(zhì)體，蒸饋 水稀釋至略顯渾濁，滴至專用230目銅網(wǎng)上，濾紙吸干多余脂質(zhì)體，靜置Imin。用1%憐鶴酸 負染，靜置40s，使粒子在銅網(wǎng)上沉積，用濾紙吸取銅網(wǎng)邊緣多余染液，自然揮干，電鏡觀察 并照相。圖1的結(jié)果表明，各脂質(zhì)體形態(tài)圓整，粒徑分布均勻。
[0081 ] 3.1.3包封率與載藥量
[0082] 3批麥角醬醇聯(lián)合順銷主動載藥脂質(zhì)體中，其中麥角醬醇的平均包封率為 90.49%，載藥量為0.1401111肖.111[1;順銷的平均包封率為52.24%，載藥量為0.1382111肖.1111 -1 O
[0083] 3.1.4粒徑及其分布
[0084] 室溫條件下，取麥角醬醇聯(lián)合順銷主動載藥脂質(zhì)體，稀釋20倍，注入樣品池，激光 粒度儀測定平均粒徑及其分布。結(jié)果表明，空白脂質(zhì)體的平均粒徑為145.8nm，多分散系數(shù) PDI為0.168，小于0.3,麥角醬醇脂質(zhì)體的平均粒徑為131.4皿，PDI為0.152,小于0.3,麥角 醬醇聯(lián)合順銷主動載藥脂質(zhì)體的