一種生態(tài)婦科外用藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種生態(tài)婦科外用藥物組合物及其制備方法，特別是設(shè)及一種經(jīng)益生 菌發(fā)酵的婦科外用組合物及其制備方法，屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。 技術(shù)背景
[0002] 據(jù)世界衛(wèi)生組織不完全統(tǒng)計(jì)，婦女中，各種婦科疾病發(fā)病率65%W上，我國(guó)有關(guān)資 料調(diào)查顯示，育齡婦女婦科疾病發(fā)病率在70%W上，一生中，幾乎100%的女性患過(guò)不同程度 的陰道炎。陰道炎是婦科疾病中的常見病、多發(fā)病，易感染，發(fā)病率逐年上升，其具有復(fù)發(fā)率 高、根治困難等特點(diǎn)。與細(xì)菌性陰道病相關(guān)的并發(fā)癥已很明確，研究表明自然流產(chǎn)、早產(chǎn)、胎 膜早破、羊水感染、產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎、剖腹產(chǎn)后的切后感染、W及胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩的發(fā)生 因?yàn)槿焉锲诟腥炯?xì)菌性陰道炎病而增加。目前，對(duì)于細(xì)菌性陰道炎的治療是根據(jù)患者臨床 癥狀使用不同的抗生素治療，盡管見效快，但容易復(fù)發(fā)。隨著現(xiàn)代微生態(tài)學(xué)的研究發(fā)展，發(fā) 現(xiàn)陰道內(nèi)菌群失調(diào)、微生態(tài)環(huán)境素亂，是細(xì)菌性陰道炎發(fā)病的基礎(chǔ)。在1892年，Dederlein首 次發(fā)表了關(guān)于人類陰道微生態(tài)菌群的研究。人們發(fā)現(xiàn)健康女性的陰道菌群由多種厭氧菌和 需氧菌構(gòu)成。正常育齡婦女陰道分泌物中已分離到200種之多的微生物，其中最重要的是乳 桿菌，它在健康女性的陰道排出物標(biāo)本中分離率高達(dá)50%~80%。現(xiàn)已確定定植于正常陰道 內(nèi)的微生物群主要由主要是細(xì)菌、念珠菌、支原體等組成。它們主要棲居于陰道的側(cè)壁黏膜 皺權(quán)中，其次是寫隆，部分在宮頸。細(xì)菌主要有革蘭陽(yáng)性需氧菌及兼性厭氧菌、革蘭陰性需 氧菌及兼性厭氧菌有大腸桿菌。正常狀態(tài)下，陰道內(nèi)厭氧菌與需氧菌的比例為5:1，二者處 于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)。此外，還有一些病原體，如活動(dòng)彎曲桿菌、支原體及念珠菌等。在正常陰道 菌群中，乳桿菌占優(yōu)勢(shì)。乳桿菌為革蘭陽(yáng)性桿菌，微需氧，但在厭氧環(huán)境下生長(zhǎng)更好，最適生 長(zhǎng)溫度為35~38°C，每克陰道分泌物含有IO 7~IO8CFU乳桿菌。健康婦女陰道內(nèi)可分離出20 多種乳桿菌。陰道內(nèi)正常存在的乳桿菌對(duì)維持陰道正常菌群起著關(guān)鍵的作用。陰道鱗狀上 皮細(xì)胞內(nèi)的糖原經(jīng)乳桿菌的作用，分解成乳酸，使陰道局部形成弱酸性環(huán)境(pH含4.5，多 在3.8~4.4)，可W抑制其他寄生菌的過(guò)度生長(zhǎng)。此外，乳桿菌通過(guò)替代、競(jìng)爭(zhēng)排斥機(jī)制阻止 致病微生物粘附于陰道上皮細(xì)胞。同時(shí)，分泌過(guò)氧化氨、細(xì)菌素、類細(xì)菌素和生物表面活性 劑等抑制致病微生物生長(zhǎng)，從而維持陰道微生態(tài)環(huán)境的平衡。隨著年齡的增加、衰老的出 現(xiàn)，陰道的酸性環(huán)境被破壞，使白色假絲酵母菌、棒狀桿菌和乳桿菌減少，相反陰道內(nèi)站矣鏈 球菌、金黃色葡萄球菌和大腸桿菌升高，導(dǎo)致陰道炎的發(fā)生。通過(guò)調(diào)整婦女陰道的微生態(tài)環(huán) 境，為陰道炎的治療提供了新的治療方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種W乳酸菌發(fā)酵培養(yǎng)物為主要成分制備的生態(tài)婦科 外用藥物組合物，該組合物由含有W下原料藥的乳酸菌發(fā)酵培養(yǎng)物制成： 葡萄糖:2.0~4. Og/lOOml 吐溫80:0.06~0.15ml/100ml 憐酸氨二鐘:0.15 ~0.30g/100ml 乙酸鋼:0.3 ~0.8g/100ml 7分子結(jié)晶水硫酸儀:0. (n~0.05g/100ml 硫酸儘:0.003~0.008g/100ml 巧樣酸S錠:0.1~0.4g/100ml 可溶性淀粉:0.3~0.5g/100ml 酵母膏:0.36~1. Og/lOOml 上述原料滅菌，接種兩種或兩種W上益生菌菌液，經(jīng)發(fā)酵后，得乳酸菌發(fā)酵培養(yǎng)物;在 培養(yǎng)物中加入一種或多種醫(yī)藥上可接受的添加劑，即得到所述的生態(tài)婦科外用藥物組合 物。
[0004] 本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種生態(tài)婦科外用藥物組合物的制備方法，其步驟如 下： 上述原料調(diào)整pH值7.0并115°C滅菌40分鐘，溫度降至39°C時(shí)，接種預(yù)培養(yǎng)的體積比各 為1.0%的兩種或兩種W上益生菌菌液，37±rC發(fā)酵22-26小時(shí)，抑降至4.0時(shí)，將發(fā)酵溫度 降至32 ± TC，繼續(xù)發(fā)酵70-74小時(shí)，經(jīng)檢測(cè)，還原糖耗盡，結(jié)束發(fā)酵;將發(fā)酵液離屯、，收集離 屯、液，得乳酸菌發(fā)酵培養(yǎng)物;加入一種或多種醫(yī)藥上可接受的添加劑，即得到所述的生態(tài)婦 科外用藥物組合物。
[0005] 上述藥物組合物可W制成洗劑，也可W與醫(yī)藥上可W接受的輔料做成藥學(xué)上常用 的婦科外用制劑:栓劑、凝膠劑。
[0006] 本發(fā)明的優(yōu)選方案，所述的添加劑為苯扎漠錠、洗必泰、薄荷腦;醫(yī)藥上可接受的 輔料為徑丙甲纖維素、卡波姆、泊洛沙姆、甲殼素、甘油，W及選自常規(guī)賦形劑、防腐劑的其 他常規(guī)添加劑。
[0007] 按照0.05~0.18ml/100ml的濃度加入苯扎漠錠，與乳酸菌發(fā)酵培養(yǎng)物的離屯、液混 合均勻，即得該藥物組合物的洗劑。
[000引將離屯、液加熱至90 ± 2°C，在攬拌下，加入徑丙甲纖維素1.6~4. OmVlOOml，繼續(xù)攬 拌并加熱至微沸，保持微沸30分鐘，不斷攬拌冷卻至55±2°C，再加入苯扎漠錠溶液0.05~ 0.18ml/100ml，薄荷腦0. . 3ml/100ml、甘油溶液 10~20ml/100ml，繼續(xù)攬拌冷卻至30°C W 下，即得該藥物組合物的凝膠劑。
[0009] 用于本發(fā)明的益生菌是指嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌，干酪乳桿菌干酪亞種、德氏乳 桿菌保加利亞亞種，均由人體腸道菌群篩選分離得到，并在常規(guī)培養(yǎng)基中進(jìn)行常規(guī)預(yù)培養(yǎng)。
[0010] 發(fā)明的再一個(gè)目的是提供本發(fā)明所述的生態(tài)婦科外用藥物組合物在制備調(diào)節(jié)婦 女外生殖道生態(tài)平衡、預(yù)防和治療婦女陰道炎的外用藥物中的應(yīng)用。
[0011] 為檢測(cè)本發(fā)明藥物組合物對(duì)引起婦科炎癥的病源微生物的抑殺作用，根據(jù)衛(wèi)生部 2002年版《消毒技術(shù)規(guī)范》，試驗(yàn)了藥物組合物洗劑與凝膠劑對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、 白色念珠菌的抑菌作用。試驗(yàn)結(jié)果顯示，本發(fā)明的藥物組合物洗劑與凝膠劑對(duì)金黃色葡萄 球菌、大腸桿菌、白色念珠菌均具有抑殺作用。同時(shí)試驗(yàn)了對(duì)多次完整皮膚刺激試驗(yàn)、陰道 黏膜刺激試驗(yàn)、和皮膚變態(tài)反應(yīng)。試驗(yàn)結(jié)果顯示:藥物組合物凝膠劑家兔多次完整皮膚刺激 試驗(yàn)每天每只動(dòng)物積分均值為0，根據(jù)皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分和刺激強(qiáng)度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，本發(fā)明的藥 物組合物凝膠劑家兔多次完整皮膚刺激屬無(wú)刺激性;藥物組合物凝膠劑家兔陰道黏膜試驗(yàn) 刺激指數(shù)為0.89，根據(jù)陰道黏膜刺激反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)和刺激強(qiáng)度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，本發(fā)明的藥物組 合物凝膠劑家兔陰道黏膜刺激屬無(wú)刺激性;本發(fā)明的藥物組合物凝膠劑豚鼠皮膚變態(tài)反應(yīng) 試驗(yàn)致敏率為0%，屬未見皮膚變態(tài)反應(yīng)。
[0012] 實(shí)施例1生態(tài)婦科外用藥物組合物A的制備 (1)乳酸菌發(fā)酵培養(yǎng)物A的制備 取葡萄糖3.OgAOOml、吐溫80 0. lOml/lOOml、憐酸氨二鐘0.20g/100ml、乙酸鋼0.5g/ 100ml、硫酸儀（7分子結(jié)晶水）0.03g/100ml、硫酸儘0.005g/100ml、巧樣酸S錠0.25g/ 100mL、可溶性淀粉0.4g/100ml、酵母膏0.68g/100ml，溶解后，調(diào)整抑7.0，115°C、40分鐘滅 菌。當(dāng)如上制備的發(fā)酵營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基的溫度降低至39°C左右時(shí)，向其中接種預(yù)培養(yǎng)的嗜酸乳 桿菌、植物乳桿菌菌液。兩個(gè)菌種的接種量均為1.0%(體積/體積）。37± TC發(fā)酵約24小時(shí)， 再將溫度降至32±rC繼續(xù)培養(yǎng)72小時(shí)，經(jīng)檢測(cè)還原糖耗盡，結(jié)束發(fā)酵，將發(fā)酵液離屯、，收集 離屯、液，得到所說(shuō)的益生菌發(fā)酵培養(yǎng)物A。
[OOU] (2)本發(fā)明生態(tài)婦科外用藥物組合物洗劑A的制備 發(fā)酵完成后加入苯扎漠錠，使苯扎漠錠的濃度為〇.115ml/100ml，攬拌均勻，即得到本 發(fā)明的藥物組合物洗劑A。
[0014] (3)本發(fā)明生態(tài)婦科外用藥物組合物凝膠劑A的制備 將益生菌發(fā)酵培養(yǎng)物800ml，加熱至90 ± 2°C，在攬拌下狀態(tài)下，加入徑丙甲纖維素28g， 繼續(xù)攬拌并加熱至微沸，保持微沸30min，不斷攬拌，溫度降至55±2°C時(shí)，加入苯扎漠錠溶 液，使終濃度為0.115%，取薄荷腦2g，研細(xì)，加入甘油150ml，研勻溶解，并加入到益生菌發(fā)酵 培養(yǎng)物中，不斷攬拌，溫度降至30°C W下時(shí)，結(jié)束攬拌，即得生態(tài)婦科外用藥物組合物凝膠 劑A。
[0015] 實(shí)施例2生態(tài)婦科外用藥物組合物B的制備 (1)乳酸菌發(fā)酵培養(yǎng)物B的制備 取葡萄糖 2. OgAOOml、吐溫80 0.15ml/100ml、憐酸氨二鐘 0.15g/100ml、乙酸鋼 0.3g/ 100mL、硫酸儀(7分子結(jié)晶水)0.05g/100ml、硫酸儘0.003g/100ml、巧樣酸S錠0.4g/100ml、 可溶性淀粉0.3g/100ml、酵母膏1.Og/lOOml，溶解后，調(diào)整pH7.0，115°C、40分鐘滅菌。當(dāng)如 上制備的發(fā)酵營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基的溫度降低至39°C左右時(shí)，向其中接種預(yù)培養(yǎng)的嗜酸乳桿菌、植 物乳桿菌、德氏乳桿菌保加利亞亞種菌液，S株菌種的接種量均為1.0%(體積/體積）。37±1 °C發(fā)酵約26小時(shí)，再將溫度降至32±rC繼續(xù)培養(yǎng)74小時(shí)，經(jīng)檢測(cè)還原糖耗盡，結(jié)束發(fā)酵，將 發(fā)酵液離屯、，收集離屯、液，得到所說(shuō)的益生菌發(fā)酵培養(yǎng)物B。
[0016] (2)本發(fā)明生態(tài)婦科外用藥物組合物洗劑B的制備 發(fā)酵完成后加入苯扎漠錠，使苯扎漠錠的濃度為0.OSmlAOOml，攬拌均勻，即得到本發(fā) 明的藥物組合物洗劑B。
[0017] (3)本發(fā)明生態(tài)婦科外用藥物組合物凝膠劑B的制備 將益生菌發(fā)酵培養(yǎng)物800ml，加熱至90 ± 2°C，在攬拌下狀態(tài)下，加入徑丙甲纖維素16g， 繼續(xù)攬拌并加熱至微沸，保持微沸30min，不斷攬拌，溫度降至55±2°C時(shí)，加入苯扎漠錠溶 液，使終濃度為0.05%，取薄荷腦1. Og，研細(xì)，加入甘油100mL，研勻溶解，并加入到益生菌發(fā) 酵培養(yǎng)物中，不斷攬拌，溫度降至30°C W下時(shí)，結(jié)束攬拌，即得生態(tài)婦科外用藥物組合物凝 膠劑B。
[0018]實(shí)施例3生態(tài)婦科外用藥物組合物C的制備 (1)乳酸菌發(fā)酵培養(yǎng)物C的制備 取葡萄糖 4. OgAOOml、吐溫80 0.06ml/100ml、憐酸氨二鐘 0.30g/100ml、乙酸鋼 0. Sg/ 100mL、硫酸儀(7分子結(jié)晶水)0.0 lg/lOOml、硫酸儘0.008g/100ml、巧樣酸S錠0.1 g/lOOml、 可溶性淀粉0.5g/100ml、酵母膏0.36g/100ml，溶解后，調(diào)整抑7.0，115°C、40分鐘滅菌。當(dāng)如 上制備的發(fā)酵營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基的溫度降低至39°C左右時(shí)，向其中接種預(yù)培養(yǎng)的嗜酸乳桿菌、植 物乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種菌液，S株菌種的