一種治療溫?zé)嵝岸痉感男托募⊙椎乃幬锝M合物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種治療溫?zé)嵝岸痉竿汀⑿屯?、肌炎的藥物組合物及其制備方法，屬于保 健食品、中醫(yī)藥領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 病毒性屯、肌炎是指嗜屯、肌性病毒感染引起的W屯、肌非特異性間質(zhì)性炎癥為主要 病變的屯、肌炎。病毒性屯、肌炎是感染性屯、肌病中最主要的一種疾病，其發(fā)病與病毒感染、細(xì) 胞免疫及自身免疫異常等相關(guān)。目前認(rèn)為，病毒性屯、肌炎主因柯薩奇B組病毒侵犯屯、臟所 致，W屯、肌炎性壞死和間質(zhì)單個(gè)核細(xì)胞浸潤(rùn)為主要病理變化，是臨床上常見的屯、血管疾病 之一。多發(fā)于兒童及青少年，發(fā)病率高、病程長(zhǎng)。
[0003] 臨床上W急性病毒性感染后出現(xiàn)或發(fā)病，同時(shí)出現(xiàn)屯、惇、胸悶、胸痛、氣急等屯、臟 癥狀，W及屯、電圖異常改變?yōu)橹饕卣?。本病可發(fā)生于任何年齡，但W青少年多見，男性多 于女性，夏秋季為高發(fā)季節(jié)。發(fā)病六個(gè)月W內(nèi)為急性期，六個(gè)月至一年為恢復(fù)期，一年W上 為慢性期。屯、肌炎患者大多可痊愈，部分患者有一定程度的屯、臟異常改變的體征和屯、電圖， 但病情歷久不變，多為屯、肌炎急性期后的屯、惇癒痕所致，成為屯、肌炎后遺癥。極少數(shù)患者在 急性期因嚴(yán)重屯、律失常、急性屯、衰及屯、源性休克而死亡。
[0004] 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)本病治療主要采用對(duì)癥處理、控制癥狀、營(yíng)養(yǎng)屯、肌等方法，尚無(wú)特效， 而中醫(yī)藥治療顯出明顯優(yōu)勢(shì)。在中藥治療病毒性屯、肌炎的研究中，使用頻率較高的有45味 中藥，主要為補(bǔ)虛藥、活血化疲藥、清熱藥、解表藥、化疲藥、安神藥、溫里藥?？偨Y(jié)出，病毒性 屯、肌炎用藥主要W益氣養(yǎng)陰、清熱解毒、活血化疲、燥濕化疲為主。
[0005] 許多中草藥具有抗病毒、抗炎、提高機(jī)體免疫力等作用，利用中草藥防治病毒性疾 病成為當(dāng)今的研究熱點(diǎn)。中藥復(fù)方新藥是中藥新藥研究的主體，體現(xiàn)中醫(yī)藥理論特色，復(fù)方 新藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究是藥學(xué)研究的主要內(nèi)容之一，也是新藥藥學(xué)評(píng)價(jià)的重點(diǎn)內(nèi)容。近年來(lái)中 藥復(fù)方新藥的研究水平有了較大的提高。尤其是近幾年由于中藥制備工藝的改進(jìn)，中藥提 取物或中藥有效成分治療病毒性屯、肌炎的研究逐漸增多，有一些研制成了中成藥制劑。
[0006] 中醫(yī)理論認(rèn)為，風(fēng)為百病之長(zhǎng)，善行而數(shù)變，常挾溫?zé)嵝岸緩目诒嵌?，而咽喉?肺系之口戶，邪毒入侵，首當(dāng)其沖，逆犯于屯、。臨床上發(fā)現(xiàn)病毒性屯、肌炎患者多數(shù)有慢性咽 炎病史，經(jīng)常受外邪的侵襲，不斷繁衍聚毒侵襲于屯、，抑制屯、之體用俱損，發(fā)為本病。所W必 須徹底切斷運(yùn)一感染途徑。在治療方面特別注意慢性咽炎的治療。因此有"咽炎一日不除， 病毒性屯、肌炎一日不綴"之言。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是提供一種治療屯、肌炎的中藥組合物。
[000引本發(fā)明的另外一個(gè)目的是提供了該制劑的制備方法。
[0009]本發(fā)明是通過W下幾種技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的： 技術(shù)方案一包括W下步驟： (I)提取:將柴胡、桂枝藥材加水保持微沸4~IOh，水蒸氣蒸饋法提取混合揮發(fā)油，將揮 發(fā)油、藥渣及提取水溶液備用;取玄參等剩余原料，與提揮發(fā)油后的藥渣合并，煎煮提取1~ 3次，分別分取提取液，合并，濾過;濾液與上述水溶液合并，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.00~ 1.2(K 50~90°C)的清膏，放冷;取上述濃縮液，加乙醇至含醇量達(dá)50~80%，靜置，濾過;濾液 減壓回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度約1.10~1.4(K 50~90 °C)的清膏，加入一定量水，加熱，過 濾，得溶液i。
[0010] (2)將溶液!;|、揮發(fā)油混合，加入適當(dāng)輔料，按常規(guī)工藝制成合劑、片劑、膠囊劑、顆 粒劑、丸劑、糖漿劑、煎膏劑等口服制劑。
[0011] 技術(shù)方案二包括W下步驟： (1)提取:將柴胡、桂枝藥材加水保持微沸4~IOh，水蒸氣蒸饋法提取混合揮發(fā)油，將揮 發(fā)油、藥渣及提取水溶液備用;取玄參等剩余原料，與提揮發(fā)油后的藥渣合并，煎煮提取1~ 3次，分別分取提取液，合并，濾過;濾液與上述水溶液合并，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.00~ 1.2(K 50~90°C )的清膏，放冷;加入一定量水，加熱，過濾，得溶液口。
[0012] (2)將溶液技、揮發(fā)油混合，加入適當(dāng)輔料，按常規(guī)工藝制成合劑、片劑、膠囊劑、顆 粒劑、丸劑、糖漿劑、煎膏劑等口服制劑。
[0013] 技術(shù)方案=包括W下步驟： (1)提取:按處方稱取藥材，煎煮提取1~3次，分別分取提取液，合并，濾過;濾液與上述 水溶液合并，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.00~1.20 (50~90°C )的清膏，放冷;取上述濃縮液， 加乙醇至含醇量達(dá)50~80%，靜置，濾過;濾液減壓回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度約1.10~1.40 巧0~90°C )的清膏，加入一定量水，加熱，過濾，得溶液虹。
[0014] (2)將溶液虹加入適當(dāng)輔料，按常規(guī)工藝制成合劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、糖 漿劑、煎膏劑等口服制劑。
[0015] 技術(shù)方案四包括W下步驟： (1)提取:按處方稱取藥材，煎煮提取1~3次，分別分取提取液，合并，濾過;濾液與上述 水溶液合并，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.00~1.20(50~90°C)的清膏，放冷;加入一定量水， 加熱，過濾，得溶液IV。
[0016] (2)將溶液IV，加入適當(dāng)輔料，按常規(guī)工藝制成合劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、 糖漿劑、煎膏劑等口服制劑。
[0017]
【具體實(shí)施方式】： W下通過實(shí)驗(yàn)例來(lái)說(shuō)明本發(fā)明的有益效果。
[0018] 用本發(fā)明具體實(shí)施例的合劑進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
[0019] 本發(fā)明體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 材料與方法 1細(xì)胞株:大鼠 H9c2屯、肌細(xì)胞購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)。
[0020] 藥物由長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)中屯、提供。根據(jù)實(shí)驗(yàn)所需藥物濃度，計(jì)算相 應(yīng)的中藥藥液提及，加入細(xì)胞培養(yǎng)皿中。
[0021] 試劑及儀器 高糖細(xì)胞培養(yǎng)基(DMEM)和0.25%膜蛋白酶購(gòu)自Gibco ;胎牛血清(MRC)購(gòu)自北京美萊博 公司；TNF-a、化-10、化-6 ELISA試劑盒及二甲亞諷(DMSO)購(gòu)自Sigma;大腸桿菌脂多糖 購(gòu)自上海紀(jì)寧實(shí)業(yè)有限公司；C02培養(yǎng)箱購(gòu)自日本SANYO,肥RA cell 240，ThermoELECT ROW CO RPOR ATIOW，超凈工作臺(tái)購(gòu)自AIRTECH蘇靜集團(tuán)安泰公司，酶標(biāo)儀購(gòu)自 SpectraMax M 2〇 [0022] 方法 4.1大鼠 H9c2屯、肌細(xì)胞培養(yǎng)及傳代:朋c2屯、肌細(xì)胞常規(guī)復(fù)蘇后移入細(xì)胞培養(yǎng)皿中靜置 培養(yǎng)。培養(yǎng)基由體積分?jǐn)?shù)為10%FBS、青鏈霉素和DMBl組成。培養(yǎng)瓶置于體積分?jǐn)?shù)為5%C02， 37°C飽和濕度的條件下培養(yǎng)2~3天，用2. 5 g/L膜蛋白酶消化細(xì)胞傳代。采用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期 地細(xì)胞，制成一定濃度的單細(xì)胞懸液，接種于96孔板或6孔板置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
[0023] 造模：按照細(xì)胞懸液IOX 1〇6 /mL密度種植于6孔板中，于37°C、5%0)2培養(yǎng)箱中培 養(yǎng)，在光鏡下觀察細(xì)胞貼壁后，待細(xì)胞長(zhǎng)至90%單層時(shí)，培養(yǎng)基中可W加入濃度為20ug/ml的 大腸桿菌脂多糖，刺激大鼠朋c2屯、肌細(xì)胞2地。置于37 °C5%C0 2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2地。分組給 藥:感染24小時(shí)后，加藥干預(yù)。正常組:常規(guī)細(xì)胞液培養(yǎng)。模型對(duì)照組:LPS刺激。制劑中劑量 組：加制劑濃度為50mg/ml后繼續(xù)培養(yǎng)；制劑高劑量組：加制劑濃度為lOOmg/ml后繼續(xù)培 養(yǎng)。
[0024] 朋c2上清中TNF-a、化-10、化-6的含量:采用雙抗夾屯、酶聯(lián)免疫吸附化LISA)法檢 巧蜘胞上清中TNF-a、化-10、比-6地含量。將大鼠冊(cè)c2屯、肌細(xì)胞W5X10 4 .血一1接種到6 孔培養(yǎng)板中，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合后，同步化24 h。按照實(shí)驗(yàn)分組，培養(yǎng)24 h后分別收 集各組細(xì)胞培養(yǎng)上清液等待檢測(cè)。ELISA法測(cè)定上清液中的TNF-a、化-10、比-6濃度。按試 劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線后，每組設(shè)6孔，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算相應(yīng)的含量。
[0025] 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用SPSS 13. 0統(tǒng)計(jì)軟件，多個(gè)樣本均數(shù)的比較采用單因素方差 分析(one - way AN0-VA)，兩兩比較采用SNK - q檢驗(yàn)。
[0026] 結(jié)果 5.1朋c2上清中TNF-a的含量比較(表1):經(jīng)WS刺激24 h后的朋c2屯、肌細(xì)胞分泌的 TNF-a因子濃度明顯高于正常組，經(jīng)濃度為50mg/ml和100 mg/ml的制劑處理后的干預(yù) 組中的TNF-a濃度較LI^刺激組有明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P < 0.