用具有纖維素分解增強活性的多肽處理紡織品的工藝對序列表的援引本發(fā)明包含計算機可讀形式的序列表,所述計算機可讀形式通過提述并入本文。技術(shù)領(lǐng)域本發(fā)明涉及糖基水解酶家族61多肽在紡織品制造中作為纖維素酶的增強劑的用途,以及包含糖基水解酶家族61多肽和纖維素酶的紡織品組合物。發(fā)明背景纖維素酶有廣泛的產(chǎn)業(yè)用途。在紡織品工業(yè)上,在粗斜棉布(denim)的整理中使用纖維素酶,以通過生物石洗(biostoning)工藝在粗斜棉布中產(chǎn)生時尚的石洗(stonewash)外觀。纖維素酶還被用來例如清除棉制衣物的表面起毛和防止起球形成(formationofpill)。與酶石洗相關(guān)的一個普遍問題是在磨蝕(abrasion)之中或之后由去除的靛藍染料重新沉積導(dǎo)致的返沾色(backstaining)。靛藍染料的“返沾色”或稱“再沉積”(redeposition)導(dǎo)致白色和靛藍染色的紗線之間理想的反差減小,這最容易在粗斜棉布的反面和內(nèi)部口袋處見到(表現(xiàn)為藍色變深)。在正面,這可以表現(xiàn)為染色區(qū)域與生物石洗過程中去除染料的區(qū)域之間的反差減小。為了去除染料,粗斜棉布制造商在皂洗工藝中使用大量表面活性劑使得部分重新變白。重度洗滌條件可導(dǎo)致經(jīng)整理的粗斜棉布產(chǎn)品的變色或褪色問題。而且,在后續(xù)的皂洗工藝中必須使用額外的水。亦有通過將抗再沉積化學(xué)品(如表面活性劑或其它試劑)加入纖維素酶洗滌液來應(yīng)對在石洗過程中再沉積或返沾色的問題。還嘗試了使用對粗斜棉布具有較低比活性的不同纖維素酶。WO9407983描述了使用纖維素酶抑制粗斜棉布的返沾色。WO9429426和WO9325655描述了通過用再沉積纖維素酶組合物和添加的蛋白酶處理而抑制返沾色,作為相對于僅使用再沉積纖維素酶的改進。WO9709410描述了將某些類型的纖維素酶添加至另一種具有磨蝕(abrading)活性的纖維素酶可減少生物石洗。該添加的纖維素酶屬于家族5或7,但其自身不具有顯著的磨蝕效果。WO0192453公開了通過用角質(zhì)酶處理紡織品減少返沾色。然而,仍存在對于酶紡織品處理改善的益處,包括增強酶對其底物的效率的需求。具體而言,存在對于更有效的酶組合物以改善工藝的經(jīng)濟性的持續(xù)需求。本發(fā)明目的在于滿足這些需求。
技術(shù)實現(xiàn)要素:
本發(fā)明涉及在水溶液中在纖維素酶存在下用糖基水解酶家族61(GH61)多肽處理紡織品的方法。本發(fā)明亦涉及包含糖基水解酶家族61多肽和纖維素酶的紡織品組合物。在一個實施方案中,本發(fā)明可用于生物石洗工藝,通過使經(jīng)染色的纖維素性或含纖維素材料織物與糖基水解酶家族61多肽和纖維素酶接觸,在經(jīng)染色的纖維素性或含纖維素織物的表面形成局部的色密度(colordensity)的差異。在一個實施方案中,將本發(fā)明的工藝應(yīng)用于期望在其表面形成局部的色密度差異的任何類型的經(jīng)染色的纖維素性織物。一個特別有商業(yè)價值的實例是粗斜棉布,特別是用于藍色牛仔褲等中的靛藍染色的粗斜棉布。在一個實施方案中,可以將多種酶與纖維素酶和GH61在生物石洗工藝中一同使用,所述酶包括一種或多種選自下組的酶:蛋白酶、脂肪酶、角質(zhì)酶、淀粉酶、果膠酶、半纖維素酶、氧化還原酶、過氧化物酶、漆酶和轉(zhuǎn)移酶。在一個實施方案中,本方法可通過下述方式應(yīng)用于生物拋光(biopolishing)工藝以減少起球:在水溶液中在纖維素酶存在下將經(jīng)染色的纖維素性或含纖維素織物與糖基水解酶家族61多肽相接觸。在一個實施方案中,所述方法和組合物可以還包含輔助物質(zhì)(cosubstance),例如半胱氨酸。在一些實施方案中,提供了用于制造紡織品的方法。在一些實施方案中,將紡織品從織物制成衣物。在一些實施方案中,用于本發(fā)明的纖維素酶是具有磨蝕作用的纖維素酶。在一些實施方案中,所述纖維素酶是內(nèi)切葡聚糖酶。在本發(fā)明中,GH61多肽可增強纖維素酶對其底物的效率,帶來下述的至少一種效益:粗斜棉布磨蝕水平提高,返沾色水平低,促進染料從紡織品的釋放,使顏色清晰(colorclarification),和減少起球。GH61多肽之前應(yīng)用于烘烤,其中已顯示其具有防腐作用,WO04/031378。此外,GH61多肽應(yīng)用于將纖維素原料轉(zhuǎn)化為乙醇,WO05/074647,WO05/074656,WO07/089290,和WO09/033071。然而,在這些申請中并未表明GH61多肽能夠在紡織品制造工藝中增強效果。發(fā)明詳述下面將援引下述定義和實施例對發(fā)明進行詳細(xì)描述。在本文中涉及的所有專利和公開出版物,包括在此類專利和公開出版物中披露的所有序列,都明確地通過提述并入本文。如用于本文,除非上下文明確另有表示,單數(shù)形式“一個/一種”(“a”,“an”)和“所述(the)”包括對復(fù)數(shù)的引用。定義糖基水解酶家族61(GH61)多肽術(shù)語“家族61糖基水解酶”或“家族GH61”或“GH61”在本文中定義為根據(jù)HenrissatB.,1991,Aclassificationofglycosylhydrolasesbasedonamino-acidsequencesimilarities,Biochem.J.280:309-316,及HenrissatB.和BairochA.,1996,Updatingthesequence-basedclassificationofglycosylhydrolases,Biochem.J.316:695-696屬于糖苷水解酶家族61的多肽。本發(fā)明一般性地涉及分離的GH61多肽的應(yīng)用??捎糜诒景l(fā)明的GH61多肽可以獲得自任何屬的微生物。為本發(fā)明的目的,本文中與給定的來源關(guān)聯(lián)使用的術(shù)語“獲得自”/“從……獲得”,應(yīng)表示:由核苷酸序列編碼的多肽是由其天然存在的來源所產(chǎn)生的,或是由其中插入了來自所述來源的核苷酸序列的菌株產(chǎn)生的。在一個方面,從給定來源獲得的多肽是胞外分泌的。本發(fā)明的多肽可以是細(xì)菌多肽。例如,所述多肽可為革蘭氏陽性細(xì)菌多肽例如芽孢桿菌屬(Bacillus)多肽,例如嗜堿芽孢桿菌(Bacillusalkalophilus)、解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)、短芽孢桿菌(Bacillusbrevis)、環(huán)狀芽孢桿菌(Bacilluscirculans)、凝結(jié)芽孢桿菌(Bacilluscoagulans)、燦爛芽孢桿菌(Bacilluslautus)、遲緩芽孢桿菌(Bacilluslentus)、地衣芽孢桿菌(Bacilluslicheniformis)、巨大芽孢桿菌(Bacillusmegaterium)、嗜熱脂肪芽孢桿菌(Bacillusstearothermophilus)、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)或蘇云金芽孢桿菌(Bacillusthuringiensis)多肽;或鏈霉菌(Streptomyces)多肽,如淺青紫鏈霉菌(Streptomyceslividans)或鼠灰鏈霉菌(Streptomycesmurinus)多肽,或革蘭氏陰性細(xì)菌多肽如大腸桿菌(E.coli)或假單胞菌屬菌種(Pseudomonassp.)多肽。本發(fā)明的多肽亦可為真菌多肽,并更優(yōu)選酵母多肽如假絲酵母屬(Candida)、克魯維酵母屬(Kluyveromyces)、畢赤酵母屬(Pichia)、酵母屬(Saccharomyces)、裂殖酵母屬(Schizosaccharomyces)或西洋蓍霉屬(Yarrowia)多肽,或更優(yōu)選絲狀真菌多肽如枝頂孢霉屬(Acremonium)、曲霉屬(Aspergillus)、短梗霉屬(Aureobasidium)、毛殼屬(Chaetomium)、隱球菌屬(Cryptococcus)、Filibasidium、鐮孢屬(Fusarium)、腐質(zhì)霉屬(Humicola)、梨孢菌屬(Magnaporthe)、毛霉屬(Mucor)、毀絲霉屬(Myceliophthora)、新考瑪脂霉屬(Neocallimastix)、脈孢菌屬(Neurospora)、擬青霉屬(Paecilomyces)、青霉屬(Penicillium)、瘤胃壺菌屬(Piromyces)、孔座殼屬(Poronia)、裂褶菌屬(Schizophyllum)、踝節(jié)菌屬(Talaromyces)、嗜熱子囊菌屬(Thermoascus)、梭孢殼屬(Thielavia)、彎頸霉屬(Tolypocladium)、木霉屬(Trichoderma)或輪枝孢屬(Verticillium)多肽。在一個優(yōu)選方面,所述多肽是具有酶去污性增強作用的卡爾酵母(Saccharomycescarlsbergensis)、釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、糖化酵母(Saccharomycesdiastaticus)、道格拉氏酵母(Saccharomycesdouglasii)、克魯弗酵母(Saccharomyceskluyveri)、諾地酵母(Saccharomycesnorbensis)或卵形酵母(Saccharomycesoviformis)多肽。在另一個優(yōu)選方面,所述多肽是棘孢曲霉(Aspergillusaculeatus)、泡盛曲霉(Aspergillusawamori)、煙曲霉(Aspergillusfumigatus)、臭曲霉(Aspergillusfoetidus)、日本曲霉(Aspergillusjaponicus)、構(gòu)巢曲霉(Aspergillusnidulans)、黑曲霉(Aspergillusniger)、米曲霉(Aspergillusoryzae)、土曲霉(Aspergillusterreus)、球毛殼(Chaetomiumglobosum)、灰蓋鬼傘(Coprinuscinereus)、棉色二孢(Diplodiagossyppina)、桿孢狀鐮孢(Fusariumbactridioides)、禾谷鐮孢(Fusariumcerealis)、庫威鐮孢(Fusariumcrookwellense)、大刀鐮孢(Fusariumculmorum)、禾本科鐮孢(Fusariumgraminearum)、禾赤鐮孢(Fusariumgraminum)、異孢鐮孢(Fusariumheterosporum)、合歡木鐮孢(Fusariumnegundi)、尖鐮孢(Fusariumoxysporum)、多枝鐮孢(Fusariumreticulatum)、粉紅鐮孢(Fusariumroseum)、接骨木鐮孢(Fusariumsambucinum)、膚色鐮孢(Fusariumsarcochroum)、擬分枝孢鐮孢(Fusariumsporotrichioides)、硫色鐮孢(Fusariumsulphureum)、圓鐮孢(Fusariumtorulosum)、擬絲孢鐮孢(Fusariumtrichothecioides)、鑲片鐮孢(Fusariumvenenatum)、特異腐質(zhì)霉(Humicolainsolens)、疏棉狀腐質(zhì)霉(Humicolalanuginosa)、灰梨孢菌(Magnaporthegrisea)、米黑毛霉(Mucormiehei)、嗜熱毀絲霉(Myceliophthorathermophila)、粗糙脈孢菌(Neurosporacrassa)、產(chǎn)紫青霉(Penicilliumpurpurogenum)、黃孢平革菌(Phanerochaetechrysosporium)、點孔座殼(Poroniapunctata)、假黑盤菌(Pseudoplectanianigrella)、橙橘嗜熱子囊菌(Thermoascusaurantiacus)、土生梭孢霉(Thielaviaterrestris)、哈茨木霉(Trichodermaharzianum)、康寧木霉(Trichodermakoningii)、長枝木霉(Trichodermalongibrachiatum)、里氏木霉(Trichodermareesei)、綠色木霉(Trichodermaviride)、褐孢長毛盤菌(Trichophaeasaccata)、Verticilliumtenerum和Talaromycesstipitatus多肽。在本發(fā)明的工藝中,可使用任何具有纖維素分解增強活性的GH61多肽。為本發(fā)明的目的,纖維素分解增強活性通過在如實施例1中所指定的條件下測量磨蝕水平的增加來確定,方式是將纖維素酶在Launder-O-Meter(LOM)中在55℃和pH6.5以0.05mg/g織物的纖維素酶劑量和0.042mg/g織物的GH61劑量處理2小時。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中,當(dāng)纖維素酶(或纖維素分解酶)與糖基水解酶家族61多肽組合時,與當(dāng)使用纖維素酶但無糖基水解酶家族時的結(jié)果相比,磨蝕水平增加至少0.08ΔL*單位,優(yōu)選至少0.1,更優(yōu)選至少0.2,更優(yōu)選至少0.4,更優(yōu)選至少0.5,更優(yōu)選至少0.6,更優(yōu)選至少0.7,更優(yōu)選至少0.8,更優(yōu)選至少0.9,甚至更優(yōu)選至少1,甚至更優(yōu)選至少1.2,和最優(yōu)選至少1.4ΔL*單位。在第一個方面,所述具有纖維素分解增強活性的GH61多肽具有下述基序:[ILMV]-P-X(4,5)-G-X-Y-[ILMV]-X-R-X-[EQ]-X(4)-[HNQ]和[FW]-[TF]-K-[AIV],其中X是任何氨基酸,X(4,5)是在4或5個連續(xù)位置上的任何氨基酸,且X(4)是在4個連續(xù)位置上的氨基酸。包含上述標(biāo)示的基序的多肽可進一步包含:H-X(1,2)-G-P-X(3)-[YW]-[AILMV],[EQ]-X-Y-X(2)-C-X-[EHQN]-[FILV]-X-[ILV],或H-X(1,2)-G-P-X(3)-[YW]-[AILMV]和[EQ]-X-Y-X(2)-C-X-[EHQN]-[FILV]-X-[ILV],其中X是任何氨基酸,X(1,2)是在1個位置或2個連續(xù)位置上的任何氨基酸,X(3)是在3個連續(xù)位置上的任何氨基酸,和X(2)是在2個連續(xù)位置上的任何氨基酸。在上述基序中,使用公認(rèn)的IUPAC單字母氨基酸縮寫。在一個優(yōu)選的方面,所述具有纖維素分解增強活性的分離的多肽還包含H-X(1,2)-G-P-X(3)-[YW]-[AILMV]。在另一個優(yōu)選的方面,所述具有纖維素分解增強活性的分離的GH61多肽還包含[EQ]-X-Y-X(2)-C-X-[EHQN]-[FILV]-X-[ILV]。在另一個優(yōu)選實施方案中,所述具有纖維素分解增強活性的分離的GH61多肽還包含H-X(1,2)-G-P-X(3)-[YW]-[AILMV]和[EQ]-X-Y-X(2)-C-X-[EHQN]-[FILV]-X-[ILV]。在第二個方面,具有纖維素分解增強活性的分離的多肽包含下述基序:[ILMV]-P-X(4,5)-G-X-Y-[ILMV]-X-R-X-[EQ]-X(3)-A-[HNQ],其中其中X是任何氨基酸,X(4,5)是在4或5個連續(xù)位置上的任何氨基酸,和X(3)是在3個連續(xù)位置上的任何氨基酸。在上述基序中,使用公認(rèn)的IUPAC單字母氨基酸縮寫。在第三個方面,所述具有纖維素分解增強活性的多肽包含這樣的氨基酸序列,所述氨基酸序列與SEQIDNO:1,SEQIDNO:2,SEQIDNO:3,SEQIDNO:4,SEQIDNO:5,SEQIDNO:6,SEQIDNO:7,SEQIDNO:8,SEQIDNO:9,SEQIDNO:10,SEQIDNO:11,SEQIDNO:12,SEQIDNO:13,SEQIDNO:14,SEQIDNO:15,SEQIDNO:16,SEQIDNO:17,SEQIDNO:18,SEQIDNO:19,SEQIDNO:20,SEQIDNO:21,SEQIDNO:22,SEQIDNO:23,SEQIDNO:24,SEQIDNO:25,SEQIDNO:26,SEQIDNO:27,SEQIDNO:28,SEQIDNO:29,SEQIDNO:30,SEQIDNO:31,SEQIDNO:32或SEQIDNO:33的成熟多肽具有至少60%,例如至少65%,至少70%,至少75%,至少80%,至少85%,至少90%,至少91%,至少92%,至少93%,至少94%,或至少95%,至少96%,至少97%,至少98%,至少99%,或至少100%的同一性程度。在第六個方面,所述具有纖維素分解增強活性的多肽是人工變體,其包含取代、缺失和/或插入一個或多個(如幾個)氨基酸的SEQIDNO:1,SEQIDNO:2,SEQIDNO:3,SEQIDNO:4,SEQIDNO:5,SEQIDNO:6,SEQIDNO:7,SEQIDNO:8,SEQIDNO:9,SEQIDNO:10,SEQIDNO:11,SEQIDNO:12,SEQIDNO:13,SEQIDNO:14,SEQIDNO:15,SEQIDNO:16,SEQIDNO:17,SEQIDNO:18,SEQIDNO:19,SEQIDNO:20,SEQIDNO:21,SEQIDNO:22,SEQIDNO:23,SEQIDNO:24,SEQIDNO:25,SEQIDNO:26,SEQIDNO:27,SEQIDNO:28,SEQIDNO:29,SEQIDNO:30,SEQIDNO:31,SEQIDNO:32,或SEQIDNO:33的成熟多肽;或其同源序列。更優(yōu)選地,所述GH61多肽是SEQIDNO:1至32的任一個成熟多肽的具有至少10,9,8,7,6,5,4,3,2或1個氨基酸的取代、缺失和/或插入的變體。本文中使用的參數(shù)“同一性”描述兩個氨基酸序列之間或兩個核苷酸序列之間的相關(guān)性。就本發(fā)明而言,兩個氨基酸序列之間的序列同一性程度使用如EMBOSS軟件包(EMBOSS:TheEuropeanMolecularBiologyOpenSoftwareSuite,Rice等,2000,TrendsGenet.16:276-277),優(yōu)選3.0.0或更高版本的Needle程序中所執(zhí)行的Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.48:443-453)來確定。使用的任選參數(shù)為缺口開放罰分(gappenalty)10,缺口延伸罰分(gapextensionpenalty)0.5和EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版)取代矩陣。使用Needle標(biāo)記為“最高同一性(longestidentity)”的輸出結(jié)果(使用-nobrief選項獲得)作為同一性百分比,并計算如下:(相同的殘基×100)/(比對長度-比對中缺口的總數(shù))就本發(fā)明而言,兩個核苷酸序列之間的序列同一性程度使用如EMBOSS軟件包(EMBOSS:TheEuropeanMolecularBiologyOpenSoftwareSuite,Rice等,2000,見上文),優(yōu)選3.0.0或更高版本的Needle程序中所執(zhí)行的Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch,1970,見上文)來測定。使用的任選參數(shù)為缺口開放罰分10,缺口延伸罰分0.5和EDNAFULL(NCBINUC4.4的EMBOSS版)取代矩陣。使用Needle標(biāo)記為“最高同一性”的輸出結(jié)果(使用-nobrief選項獲得)作為同一性百分比,并計算如下:(相同的脫氧核糖核苷酸×100)/(比對長度-比對中缺口的總數(shù))如上所述的序列的基本上同源的多肽表征為在成熟多肽中具有一個或多個氨基酸的取代、缺失和/或插入。優(yōu)選地,氨基酸改變的性質(zhì)是較不重要的(ofaminornature),即保守的氨基酸取代或插入,其不顯著影響蛋白質(zhì)的折疊和/或活性;通常為1至約9個氨基酸,優(yōu)選1至約15個氨基酸,和最優(yōu)選1至大約30個氨基酸的小缺失;小的氨基或羧基末端延伸,如氨基末端甲硫氨酸殘基;多至約5至10個殘基,優(yōu)選10至15個殘基,和最優(yōu)選20至25個殘基的小接頭肽;或通過改變凈電荷或其它功能來促進純化的小延伸,如多組氨酸序列(polyhistidinetract)、抗原表位(antigenicepitope)、蛋白A、CBM或其它結(jié)合域(bindingdomain)。保守取代的實例是在以下組之內(nèi):堿性氨基酸組(精氨酸、賴氨酸和組氨酸)、酸性氨基酸組(谷氨酸和天冬氨酸)、極性氨基酸組(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水氨基酸組(亮氨酸、異亮氨酸和纈氨酸)、芳族氨基酸組(苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)和小氨基酸組(甘氨酸、丙氨酸、絲氨酸、蘇氨酸和甲硫氨酸)。通常不改變比活性(specificactivity)的氨基酸取代是本領(lǐng)域已知的,并且由例如H.Neurath和R.L.Hill,1979,于TheProteins,AcademicPress,NewYork中描述。最普遍發(fā)生的交換是Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu和Asp/Gly。除了20個基本氨基酸,還可以用非基本氨基酸(如4-羥脯氨酸、6-N-甲基賴氨酸、2-氨基異丁酸、異纈氨酸和α-甲基絲氨酸)取代野生型多肽的氨基酸殘基??梢杂糜邢迶?shù)量的非保守氨基酸、不由遺傳密碼編碼的氨基酸和非天然氨基酸取代氨基酸殘基?!胺翘烊话被帷痹诘鞍踪|(zhì)合成后已經(jīng)過修飾,且/或在它們的側(cè)鏈具有不同于基本氨基酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)。非天然氨基酸能夠以化學(xué)方法合成,并且優(yōu)選是可商購的,且包括六氫吡啶羧酸(pipecolicacid)、噻唑烷羧酸(thiazolidinecarboxylicacid)、脫氫脯氨酸、3-和4-甲基脯氨酸,和3,3-二甲基脯氨酸?;蛘?,氨基酸改變具有使多肽的物理化學(xué)性質(zhì)改變的性質(zhì)。例如,氨基酸改變可改善多肽的熱穩(wěn)定性,改變底物特異性,改變最適pH等。能夠根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法,例如定位誘變或丙氨酸分區(qū)誘變法(Cunningham和Wells,1989,Science244:1081-1085)來鑒定親本多肽中的必需氨基酸。在后一技術(shù)中,將單一丙氨酸突變引入到分子中的每個殘基,并且測試所得突變分子的生物活性(即酶去污性增強作用)以鑒定對于所述分子的活性關(guān)鍵的氨基酸殘基。同樣參見Hilton等,1996,J.Biol.Chem.271:4699-4708。酶的三維結(jié)構(gòu)如α-螺旋,β-層疊,以及金屬結(jié)合位點或其它的生物相互作用也能夠通過結(jié)構(gòu)的物理分析而測定,如通過以下這些技術(shù):如核磁共振、晶體學(xué)、電子衍射或光親和標(biāo)記,連同推定的接觸位點氨基酸的突變來確定。參見例如deVos等,1992,Science255:306-312;Smith等,1992,J.Mol.Biol.224:899-904;Wlodaver等,1992,FEBSLett.309:59-64。特別是Karkehabadi等,2008J.Mol.Biol.383:144-15描述了來自Hypocreajecorina的GH61的晶體結(jié)構(gòu)。也可以分析與本發(fā)明的多肽的親緣多肽的同一性來推斷必需氨基酸的身份。可以使用已知的誘變、重組和/或改組(shuffling)方法接著進行有關(guān)的篩選方法,例如那些由Reidhaar-Olson和Sauer,1988,Science241:53-57;Bowie和Sauer,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:2152-2156;WO95/17413;或WO95/22625公開的那些方法來進行并測試單個或多個氨基酸取代、缺失和/或插入??梢允褂玫钠渌椒òㄒ族ePCR、噬菌體展示(例如,Lowman等,1991,Biochemistry30:10832-10837;美國專利號5,223,409;WO92/06204)和區(qū)域定向的誘變(Derbyshire等,1986,Gene46:145;Ner等,1988,DNA7:127)。誘變/改組方法可以與高通量、自動化的篩選方法組合以檢測由宿主細(xì)胞表達的克隆的、誘變的多肽的活性(Ness等,1999,NatureBiotechnology17:893-896)。能夠從宿主細(xì)胞回收編碼活性多肽的誘變的DNA分子,并且使用本領(lǐng)域中的標(biāo)準(zhǔn)方法快速測序。這些方法允許快速確定多肽中單個氨基酸殘基的重要性,并可應(yīng)用于未知結(jié)構(gòu)的多肽。輔助物質(zhì)與GH61多肽一同添加輔助物質(zhì)可進一步增強酶效率,帶來下述的至少一種益處:磨蝕作用增加,返沾色水平低,和起球減少等。在另一個方面,在根據(jù)WO2008/151043所述的可溶性活化性二價金屬陽離子(例如硫酸錳)的存在下使用所述具有纖維素分解增強活性的GH61多肽。在一個方面,在二氧化合物、二環(huán)化合物、雜環(huán)化合物、含氮化合物或含硫化合物的存在下使用所述具有纖維素分解增強活性的多肽。所述二氧化合物可包括任何含有兩個或更多氧原子的合適化合物。在一些方面,所述二氧化合物含有如本文中所述的經(jīng)取代的芳基模塊(moiety)。所述二氧化合物可包括一個或多個(幾個)羥基和/或羥基衍生物,但亦包括缺乏羥基和羥基衍生物的經(jīng)取代的芳基模塊。二氧化合物的非限定性實例包括鄰苯二酚或兒茶酚;咖啡酸;3,4-二羥基苯甲酸;4-叔丁基-5-甲氧基-1,2-苯二酚;聯(lián)苯三酚;沒食子酸;3,4,5-三羥基苯甲酸甲酯;2,3,4-三羥基二苯甲酮;2,6-二甲氧基苯酚;芥子酸;3,5-二羥基苯甲酸;4-氯-1,2-苯二酚;4-硝基-1,2-苯二酚;鞣酸;沒食子酸乙酯;羥乙酸甲酯;二羥基延胡索酸;2-丁炔-1,4-二醇;克酮酸;1,3-丙二醇;酒石酸;2,4-戊二醇;3-乙氧基-1,2-丙二醇;2,4,4’-三羥基二苯甲酮;順-2-丁烯-1,4-二醇;3,4-二羥基-3-環(huán)丁烯-1,2-二酮;二羥基丙酮;乙酰丙烯醛(acroleinacetal);甲基-4-羥基苯甲酸;4-羥基苯甲酸;和甲基-3,5-二甲氧基-4-羥基苯甲酸;或它們的鹽或溶劑合物(solvate)。所述二環(huán)化合物可包括任何如本文中所述的合適的取代稠環(huán)系統(tǒng)。所述化合物可包含一個或多個(幾個)另外的環(huán),且除非另行說明,不限于具體的環(huán)數(shù)。在一個方面,所述二環(huán)化合物是類黃酮。在另一個方面,所述二環(huán)化合物是任選取代的異類黃酮(isoflavonoid)。在另一個方面,所述二環(huán)化合物是任選取代的花色離子(flavyliumion),如任選取代的花色素或任選取代的花色苷,或其衍生物。二環(huán)化合物的非限定性實例包括表兒茶素(epicatechin);槲皮素(quercetin);楊梅黃酮(myricetin);黃杉素(taxifolin);山奈酚(kaempferol);桑素(morin);金合歡素(acacetin);柚皮素(naringenin);異鼠李黃素(isorhamnetin);芹菜苷配基(apigenin);花青素(cyanidin);花色素苷(cyanin);kuromanin;花青素鼠李葡糖苷(keracyanin);或它們的鹽或溶劑合物。所述雜環(huán)化合物可為任何合適的化合物,如本文中所述的任選取代的包含雜原子的芳環(huán)或非芳環(huán)。在一個方面,所述雜環(huán)是包含任選取代的雜環(huán)烷基模塊或任選取代的雜芳基模塊的化合物。在另一個方面,所述任選取代的雜環(huán)烷基模塊或任選取代的雜芳基模塊是任選取代的五元雜環(huán)烷基或任選取代的五元雜芳基模塊。在另一個方面,任選取代的雜環(huán)烷基或任選取代的雜芳基模塊是選自如下的任選取代的模塊:吡唑基、呋喃基、咪唑基、異噁唑基、噁二唑基、噁唑基、吡咯基、吡啶基、嘧啶基、噠嗪基、噻唑基、三唑基、噻吩基(thienyl)、二氫噻吩-吡唑基(dihydrothieno-pyrazolyl)、硫茚基、咔唑基、苯并咪唑基、苯并噻吩基(benzothienyl)、苯并呋喃基、吲哚基、喹啉基、苯并三唑基、苯并噻唑基、苯并噁唑基(benzooxazolyl)、苯并咪唑基、異喹啉基、異吲哚基、吖啶基、苯并異噁唑基(benzoisazolyl)、二甲基乙內(nèi)酰脲、吡嗪基、四氫呋喃基、吡咯啉基、吡咯烷基、嗎啉基、吲哚基、二氮雜環(huán)庚三烯基(diazepinyl)、氮雜環(huán)庚三烯基(azepinyl)、硫雜環(huán)庚三烯基(thiepinyl)、哌啶基和氧雜環(huán)庚三烯基(oxepinyl)。在另一個方面,所述任選取代的雜環(huán)烷基模塊或任選取代的雜芳基模塊是任選取代的呋喃基。雜環(huán)化合物的非限定性實例包括(1,2-二羥乙基)-3,4-二氫呋喃-2(5H)-酮;4-羥基-5-甲基-3-呋喃酮;5-羥基-2(5H)-呋喃酮;[1,2-二羥乙基]呋喃-2,3,4(5H)-三酮;α-羥基-γ-丁內(nèi)酯;核糖酸γ-內(nèi)酯;己醛糖酸γ-內(nèi)酯(aldohexuronicaldohexuronicacidγ-lactone);葡糖酸δ-內(nèi)酯;4-羥基香豆素;二氫苯并呋喃;5-(羥甲基)糠醛;糠偶姻(furoin);2(5H)-呋喃酮;5,6-二氫-2H-吡喃-2-酮;和5,6-二氫-4-羥基-6-甲基-2H-吡喃-2-酮;或它們的鹽或溶劑合物。所述含氮化合物可為任何具有一個或多個氮原子的合適化合物。在一個方面,所述含氮化合物包含胺、亞胺、羥胺或氧化亞氮(nitroxide)模塊。含氮化合物的非限定性實例包括丙酮肟;紫尿酸;吡啶-2-醛肟;2-氨基苯酚;1,2-苯二胺;2,2,6,6-四甲基-1-哌啶基氧(piperidinyloxy);5,6,7,8-四氫生物蝶呤;6,7-二甲基-5,6,7,8-四氫蝶呤;和馬來酰胺酸;或它們的鹽或溶劑合物。所述醌化合物可為任何本文中所述的包含醌模塊的合適的化合物。醌化合物的非限定性實例包括1,4-苯醌;1,4-萘醌;2-羥基-1,4-萘醌;2,3-二甲氧基-5-甲基-1,4-苯醌或輔酶Q0;2,3,5,6-四甲基-1,4-苯醌或四甲基對苯醌;1,4-二羥基蒽醌;3-羥基-1-甲基-5,6-二氫吲哚二酮或腎上腺色素;4-叔丁基-5-甲氧基-1,2-苯醌;吡咯并喹啉醌(pyrroloquinolinequinone);或它們的鹽或溶劑合物。所述含硫化合物可為任何包含一個或多個硫原子的合適的化合物。在一個方面,所述含硫化合物包含選自亞硫酰,硫醚,亞磺酰,磺酰,磺酰胺(sulfamide),磺酰胺(sulfonamide),磺酸和磺酸酯的模塊。含硫化合物的非限定性實例包括乙硫醇;2-丙硫醇;2-丙烯-1-硫醇;2-巰基乙磺酸;苯硫醇;苯-1,2-二硫醇;半胱氨酸;甲硫氨酸;谷胱甘肽;胱氨酸;或它們的鹽或溶劑合物。在一個方面此種如上所述的化合物對纖維素材料的量,作為對纖維素的糖單元的摩爾比例為約10-6至約10,例如約10-6至約7.5,約10-6至約5,約10-6至約2.5,約10-6至約1,約10-5至約1,約10-5至約10-1,約10-4至約10-1,約10-3至約10-1,和約10-3至約10-2。在另一個方面,此種如上所述的化合物的有效量為約0.1μM(微摩爾)至約1M,例如約0.5μM至約0.75M,約0.75μM至約0.5M,約1μM至約0.25M,約1μM至約0.1M,約5μM至約50mM,約10μM至約25mM,約50μM至約25mM,約10μM至約10mM,約5μM至約5mM,和約0.1mM至約1mM。術(shù)語“液”(liquor)是指溶液相,包括水性的、有機的,或其組合。在一個方面,所述液劑對纖維素的有效量為約10-6至約10g每g纖維素,例如約10-6至約7.5g,約10-6至約5,約10-6至約2.5g,約10-6至約1g,約10-5至約1g,約10-5至約10-1g,約10-4至約10-1g,約10-3至約10-1g,和約10-3至約10-2g每g纖維素。紡織品術(shù)語“紡織品”用于本文中意為包括纖維、紗線、織物和衣物。織物可通過織造(weaving)、針織(knitting)或無紡(non-woven)操作從纖維構(gòu)建??椩旌歪樋椥枰喚€作為輸入,而無紡織物是纖維隨機接合的結(jié)果(紙可視為無紡的)。在本文的語境中,術(shù)語“織物”亦旨在包括纖維和其它類型的經(jīng)加工的織物。根據(jù)本發(fā)明,本發(fā)明的方法可適用于任何本領(lǐng)域中已知的紡織品(織造的、針織的或無紡的)。具體而言,本發(fā)明的工藝可適用于含纖維素紡織品或纖維素性紡織品,如棉、纖維膠、人造絲、苧麻、亞麻、lyocell(例如由CourtauldsFibers生產(chǎn)的Tencel),或其混合物,或任何這些纖維與合成纖維(例如聚酯、聚酰胺、尼龍)或其它天然纖維如羊毛和絲一同的混合物,如纖維膠/棉混紡紗(blend),lyocell/棉混紡紗,纖維膠/羊毛混紡紗,lyocell/羊毛混紡紗,棉/羊毛混紡紗;亞麻(flax/linen)、苧麻和其它基于纖維素纖維的織物,包括所有纖維素性織物與其它纖維如羊毛、聚酰胺、丙烯酸和聚酯纖維的混紡紗,例如纖維膠/棉/聚酯混紡紗,羊毛/棉/聚酯混紡紗,亞麻/棉混紡紗等等。紡織品制造工藝將織物如纖維素材料的織物加工就緒以供衣物制造涉及數(shù)個步驟:將纖維紡(spin)成紗線,從紗線構(gòu)建織造或針織織物;和后續(xù)的前處理(preparation)工藝,染色/印花,和織物整理操作。前處理工藝對于在例如染色/印花和織物整理之前,從織物去除天然和人為誘導(dǎo)的雜質(zhì)和改善其美學(xué)外觀和可加工性是必需的。一般的前處理工藝包括退漿(對于織造物),煮煉(scouring)和漂白,其產(chǎn)生適于染色或整理的織物??椩炜椢锿ㄟ^將在織機的縱向伸展的經(jīng)紗(warpyarn)之間織造“緯紗”(fillingyarn/weftyarn)來構(gòu)建。經(jīng)紗在織造之前必須經(jīng)上漿(size),以使其潤滑并保護其不在制造過程中受緯紗的高速插入而磨蝕。常見的上漿劑(sizeagent)為淀粉(或淀粉衍生物和修飾的淀粉),聚乙烯醇,羧甲基纖維素(即CMC),其中主要是淀粉。上漿混合物中經(jīng)常包含石蠟、丙烯酸粘合劑(acrylicbinder)和多種潤滑劑??蓪⒕暭喴浴耙簧?一下(overone-undernext)”的方式(平紋組織(plainweave))或通過“一上-二下(overone-undertwo)”的方式(斜紋(twill))或任何多種其它排列來穿過經(jīng)紗織造。一般而言,外套(dresses)、襯衫、短褲(pants)、被單(sheeting)、毛巾、綢緞(drapery)等從織造織物生產(chǎn)。在制造了織物之后,必需再次去除織物上的漿(即退漿)。針織是通過將咬合的紗線線圈連接在一起來形成織物。與從兩種類型的紗線構(gòu)建并具有許多“末端”的織造相對,針織的織物從單根連續(xù)的紗線股產(chǎn)生。與織造一樣,存在許多不同方法來將紗線環(huán)繞(loop)在一起,且最終織物性質(zhì)取決于紗線以及針織類型。內(nèi)衣、針織套衫(sweater)、襪子、運動衫(sportshirt/sweatshirt)等來源于針織織物。退漿退漿是在織成的織物中從經(jīng)紗降解和/或去除上漿化合物。淀粉通常通過酶退漿步驟去除。此外,有時使用氧化退漿和用酸或堿的化學(xué)退漿。在一些實施方案中,所述退漿酶是淀粉分解酶,如α-淀粉酶,β-淀粉酶,甘露聚糖酶,葡糖淀粉酶,或其組合。合適的α-和β-淀粉酶包括細(xì)菌或真菌來源的那些,以及此類淀粉酶的化學(xué)或遺傳修飾的突變體和變體。合適的α-淀粉酶包括可從芽孢桿菌屬種獲得的α-淀粉酶。合適的商業(yè)性淀粉酶包括但不限于NEXT,F(xiàn)LEXandCOOL(均來自GenencorInternationalInc.),以及DURAMYLTM,ERMAMYLTM,F(xiàn)UNGAMYLTMTERMAMYLTM,AUQAZYMETM和BANTM(均可從NovozymesA/S,Bagsvaerd,Denmark獲得)。其它合適的淀粉分解酶包括CGT酶(環(huán)糊精葡聚糖轉(zhuǎn)移酶(cyclodextringlucanotransferase),EC2.4.1.19),例如從芽孢桿菌屬、熱厭氧桿菌屬(Thermoanaerobactor或Thermoanaero-bacterium)獲得的那些。煮煉煮煉用于從纖維去除雜質(zhì),溶脹纖維,和去除種皮(seedcoat)。其為最關(guān)鍵的步驟之一。煮煉的主要目的是a)均勻地清潔織物;b)軟化塵屑(mote)和其它雜質(zhì)(trash),c)改善織物吸收性,d)皂化和溶解脂肪、油和蠟,和e)最大程度地減少未成熟的棉。在大約沸騰溫度進行的氫氧化鈉煮煉對于100%棉是確立的處理方法,而氫氧化鈣和碳酸鈣使用較少。合成纖維在溫和得多的條件下煮煉。表面活性劑和螯合劑對于堿煮煉是必需的。已引入了酶法煮煉,其中纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶、脂肪酶和蛋白酶均報道為具有煮煉作用。漂白漂白是對色素顏色和/或有色雜質(zhì)的破壞以及種皮碎片去除。它是最關(guān)鍵的化學(xué)處理,因為必須維持白度(degreeofwhiteness)與纖維損傷之間的平衡。漂白通過使用氧化或還原化學(xué)進行。氧化劑可進一步細(xì)分為采用或生成:a)次氯酸根(OCl-),b)二氧化氯(ClO2),和過氧化氫物種(OOH-和/或)的氧化劑。還原劑通常為二氧化硫,亞硫酸氫鹽/連二亞硫酸鹽(hydrosulfitesalt)等。已報道了使用葡糖氧化酶的酶法漂白。傳統(tǒng)上,在該工藝中使用過氧化氫。印花和染色紡織品的印花或染色通過將染料以任何將染色物質(zhì)(dyestuff)結(jié)合于紡織品中纖維的合適方法施于紡織品來進行。紡織品的染色例如通過如下過程來進行:將織物經(jīng)過染料的濃縮溶液,然后將濕織物儲藏于蒸汽密封的容器(vapourtightenclosure)以給予染料擴散和與織物物質(zhì)反應(yīng)的時間,然后漂洗掉未反應(yīng)的染料。或者,可將染料通過在漂洗之前紡織品的后續(xù)蒸煮來固定。染料包括合成和天然染料。通常的染料是具有陰離子型官能團者(例如酸性染料,直接染料,Mordant染料和活性染料(reactivedye)),具有陽離子型基團者(例如堿性染料),在施用之前需要化學(xué)反應(yīng)者(例如甕染料(vatdye),硫染料和偶氮染料),分散染料,和溶劑染料。過量的、未結(jié)合于纖維的可溶性染料在染色之后必須去除,以確保經(jīng)染色的紡織品的色牢度(fastness),并防止在消費者洗滌紡織品過程中不希望的染料轉(zhuǎn)移。一般地,完全去除過量的染料需要大量的水。在常規(guī)工藝中,首先將經(jīng)印花或染色的紡織品用冷水漂洗,然后添加用于減少返沾色的合適的添加劑(如聚乙烯基吡咯烷酮(PVP))在高溫洗滌。WO99/34054公開了一種用于從經(jīng)染色的織物用漂洗液去除過量染料的酶法工藝,所述液包含至少一種過氧化氫酶,氧化劑和至少一種介導(dǎo)物,如包含過氧化物酶,過氧化氫和如1-羥基-苯并三唑(1-hydroxy-benzotriazole)的介導(dǎo)物的液。生物拋光如用于本文中,術(shù)語“生物拋光”,“去球(depilling)”和“抗起球(anti-pilling)”可互換使用。若不施用整理組分,大多數(shù)棉織物和棉混紡織物的手感(handleappearance)相當(dāng)硬(hard)和僵(stiff)??椢锉砻嬉膊⑵交驗橛行〉慕q狀微纖維從該表面突出。此外,在相對較短時間的磨損之后,在織物表面出現(xiàn)起球,因此給予其無吸引力的、穿舊的(worn)外觀。生物拋光是在纖維素性織物的制造過程中通過酶如纖維素酶對其進行處理的方法,改善織物“起球形成減少”方面的品質(zhì)。生物拋光最重要的作用可表征為較少的起毛和起球,增加的光澤(gloss/luster),改善的織物手感,增加的可持續(xù)柔軟性(durablesoftness),和/或改善的水吸收性。生物拋光通常在針織和織造織物或衣物的制造的濕加工中進行。濕加工包括下述步驟例如退漿、煮煉、漂白、洗滌、染色/印花和整理等步驟。生物拋光可在任何濕法步驟之后作為單獨步驟,或與任何這些濕法步驟組合進行。本發(fā)明的在水溶液中在纖維素酶存在下用GH61多肽處理紡織品的方法可應(yīng)用于生物拋光工藝。在一個實施方案中,本發(fā)明提供了用于獲得具有減少的起球形成趨勢的纖維素性紡織品或含纖維素紡織品的方法,所述方法包括在水溶液中在纖維素酶存在下用GH61多肽處理紡織品。在該實施方案中,生物拋光方法可應(yīng)用于紗線、織物或衣物。在本文的語境中,術(shù)語“減少的起球形成”意指在根據(jù)本發(fā)明的方法處理(生物拋光)過的織物表面的表面上,與未經(jīng)酶處理的織物相比,對起球形成的抗性。就本發(fā)明的目的而言,所述起球形成可根據(jù)材料和方法部分中的“起球度測試(pillingnotestest)”來加以測試。該測試的結(jié)果表示為“起球度”的形式,其為從起球度1(嚴(yán)重起球形成)至起球度5(無起球形成)的量度的等級,允許1/4單位的起球度。由于本發(fā)明的酶催化纖維素性纖維表面的水解,酶作用最終會導(dǎo)致纖維或織物的重量損失。在一個優(yōu)選實施方案中,盡管以獲得纖維表面受控的部分水解的方式進行生物拋光,現(xiàn)已獲得不具有過分的織物強度損失的合適拋光作用。應(yīng)理解的是本發(fā)明的方法可在任何常規(guī)的濕法紡織品處理步驟中,優(yōu)選在紡織品織物的退漿或漂白之后,與常規(guī)的(公知的)工藝步驟同時進行或作為附加的工藝步驟進行。本方法通常在高速循環(huán)系統(tǒng)如溢流噴射染色機(jet-overflowdyeingmachine),高速卷揚機(high-speedwinch)和卷染機(jigger)中完成??捎玫母咚傧到y(tǒng)的實例是由Biancalani,Italy制造的“Aero1000”。本發(fā)明的方法可在分批、連續(xù)或半連續(xù)裝置如J-Box中,在軋卷機(Pad-Roll)上,或在軋浴(Pad-Bath)中進行。粗斜棉布織物的制造一些染色的織物,如粗斜棉布織物,需要紗線在織造之前染色。對于粗斜棉布織物,經(jīng)紗例如用靛藍染色,并在織造之前上漿。優(yōu)選地,粗斜棉布紗線的染色是環(huán)染。本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案是用甕染料如靛藍,或與靛藍相近的染料如硫靛藍,或硫染料,或直接染料,或活性染料,或萘酚對紗線進行環(huán)染。亦可用超過一種染料對紗線染色,例如首先用硫染料,然后用甕染料染色,或反之。優(yōu)選地,在對紗線進行染色之前對其進行煮煉和/或漂白,以取得更高品質(zhì)的粗斜棉布織物。一般而言,在織造為染色織物如粗斜棉布之后,對染色的織物或衣物繼續(xù)進行至退漿階段,優(yōu)選隨后進行生物石洗步驟和/或顏色調(diào)整步驟。本文中所用的退漿工藝是與在本文語境中上文提及的相同的工藝。在退漿之后,經(jīng)染色的織物進行生物石洗步驟。生物石洗步驟可用酶和/或浮石進行。如用于本文,術(shù)語“生物石洗”,“石洗”和“磨蝕”可互換使用,意指在含有機械磨蝕劑如浮石,磨蝕纖維素酶、或其組合的水性介質(zhì)中攪拌粗斜棉布,以提供“經(jīng)石洗的”外觀(即在粗斜棉布表面中局部的顏色密度的差異)。在所有情況下,去除染料都需要機械作用,且該處理通常在洗衣機如轉(zhuǎn)筒洗衣機(drumwasher)、滾筒洗衣機(bellywasher)中進行。作為不均勻的染料去除的結(jié)果,在染色區(qū)和染料去除區(qū)之間存在反差,這表現(xiàn)為局部的顏色密度差異。用纖維素酶處理可完全替代用浮石處理。然而,纖維素酶處理亦可與浮石處理組合,當(dāng)需要產(chǎn)生高度磨蝕的整理(finish)時。就本發(fā)明的目的而言,用磨蝕水平來指示顏色密度的局部差異。磨蝕水平是在實施例1中指明的條件下測量的。GH61的纖維素分解增強活性的作用通過測量在實施例1中指明的條件下磨蝕水平的增加來確定,即在LOM中在55℃和pH6.5處理纖維素分解酶2小時,其中纖維素酶劑量為0.05mg/g織物而GH61劑量為0.042mg/g織物。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中,磨蝕水平與當(dāng)纖維素酶不與GH61一同使用時的結(jié)果相比,增加至少0.08ΔL*單位,優(yōu)選至少0.1,更優(yōu)選至少0.2,更優(yōu)選至少0.4,更優(yōu)選至少0.5,更優(yōu)選至少0.6,更優(yōu)選至少0.7,更優(yōu)選至少0.8,更優(yōu)選至少0.9,甚至更優(yōu)選至少1,甚至更優(yōu)選至少1.2,和最優(yōu)選至少1.4ΔL*單位。在用纖維素酶處理或通過常規(guī)洗滌工藝之后從粗斜棉布去除的染料可導(dǎo)致靛藍在粗斜棉布材料上“返沾色”或“再沉積”,例如藍線的重新著色或白線著上藍色,導(dǎo)致藍線和白線之間的反差減少。一般而言,磨蝕水平越高會導(dǎo)致返沾色水平越高,因為更多染料被去除并重新沉積至織物。導(dǎo)致高磨蝕水平但低返沾色水平的工藝對于紡織品制造是理想的。為了測量工藝是否能夠?qū)崿F(xiàn)低返沾色水平,應(yīng)在當(dāng)兩個工藝均達到類似的磨蝕水平(即類似的ΔL*單位)時,將來自一個工藝的ΔL*單位與對照工藝相比,因為類似的磨蝕水平一般意指由工藝去除類似量的染料。磨蝕通常繼以第三步驟,后處理(after-treatment),其一般包括洗滌和漂洗步驟,在此過程中,可使用去污劑、光學(xué)增亮劑、漂白劑或軟化劑。本發(fā)明的在水溶液中在纖維素酶存在下用GH61多肽處理紡織品的方法可應(yīng)用于生物石洗工藝。在一個實施方案中,本發(fā)明提供了用于向經(jīng)染色的織物或衣物導(dǎo)入顏色密度的局部差異的方法,其中所述方法包括將織物或衣物在纖維素酶存在下與GH61多肽相接觸的步驟。優(yōu)選地,經(jīng)染色的織物或衣物是纖維素性或含纖維素的織物或衣物。更優(yōu)選地,經(jīng)染色的織物是粗斜棉布織物,甚至更優(yōu)選地,經(jīng)靛藍染色的粗斜棉布織物。在另一個實施方案中,本發(fā)明提供粗斜棉布制造工藝,其包括:a)將粗斜棉布織物退漿;b)在纖維素酶存在下用GH61多肽對粗斜棉布進行生物石洗;c)漂洗。本發(fā)明的工藝可在常規(guī)條件下在常規(guī)用于石洗的洗衣機中,例如洗衣機-脫水機(washer-extractor)、滾筒洗衣機等中進行。本發(fā)明的酶應(yīng)以有效量添加。酶纖維素酶在本文的語境中,術(shù)語“纖維素酶”或“纖維素分解酶”指催化纖維素至葡萄糖、纖維二糖、三糖和其它纖維寡糖的降解的酶,其中酶理解為包括成熟蛋白或其前體形式或其功能片段,例如催化活性域,其基本上具有全長酶的活性。此外,術(shù)語“纖維素分解”酶旨在包括所述酶的同源物或類似物。合適的纖維素酶包括動物、植物或微生物來源的那些。優(yōu)選微生物來源的。纖維素分解酶可為存在于由給定微生物產(chǎn)生的纖維素酶系統(tǒng)中的組分,此種纖維素酶系統(tǒng)主要包括幾種不同的纖維素酶組分,包括通常作為例如纖維二糖水解酶(E.C.3.2.1.91),內(nèi)切葡聚糖酶(E.C.3.2.1.4),和β-葡糖苷酶(E.C.3.2.1.21)鑒定的那些。測量纖維素分解活性的兩種基本方法包括:(1)測量總纖維素分解活性,和(2)測量單獨的纖維素分解活性(內(nèi)切葡聚糖酶、纖維二糖水解酶和β-葡糖苷酶),如Zhang等,Outlookforcellulaseimprovement:Screeningandselectionstrategies,2006,BiotechnologyAdvances24:452-481所綜述的??偫w維素分解活性通常是使用不溶性底物來測定的,所述底物包括Whatman1號濾紙、微晶纖維素、細(xì)菌纖維素、藻類纖維素、棉花、經(jīng)預(yù)處理的木素纖維素等。最常見的總纖維素分解活性測定法是使用WhatmanNo.1濾紙作為底物的濾紙測定法。該測定法是由InternationalUnionofPureandAppliedChemistry(IUPAC)(Ghose,1987,Measurementofcellulaseactivities,PureAppl.Chem.59:257-68)確立的。優(yōu)選地,本發(fā)明中的纖維素酶是具有磨蝕作用的纖維素酶(或纖維素分解酶)。就本發(fā)明的目的而言,磨蝕水平在實施例1中指明的條件下測量,即在Launder-O-Meter(LOM)中在55℃,pH6.5進行纖維素酶處理2小時,其中纖維素酶劑量為0.05mg/g。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中,具有磨蝕作用的纖維素酶顯示至少0.5ΔL*單位,優(yōu)選至少1,更優(yōu)選至少1.5,更優(yōu)選至少2,更優(yōu)選至少2.5,更優(yōu)選至少3,更優(yōu)選至少3.5,更優(yōu)選至少4,更優(yōu)選至少4.5,更優(yōu)選至少5,更優(yōu)選至少5.5,更優(yōu)選至少6,甚至更優(yōu)選至少6.5,和甚至最優(yōu)選至少7ΔL*單位。優(yōu)選地,在本發(fā)明中具有磨蝕作用的纖維素酶(或纖維素分解酶)是內(nèi)切葡聚糖酶。或者,所述纖維素分解酶可為單組分,即基本上不含其它通常在由給定微生物產(chǎn)生的纖維素酶系統(tǒng)中出現(xiàn)的纖維素酶的組分,所述單組分通常為重組組分,即由編碼所述單組分的DNA序列的克隆和后續(xù)用所述DNA序列轉(zhuǎn)化細(xì)胞,并在宿主中表達而產(chǎn)生,例如如描述于例如國際專利申請WO91/17243,且其通過提述并入本文。所述宿主優(yōu)選為異源宿主,但在某些條件下所述宿主亦可為同源宿主。根據(jù)本發(fā)明使用的纖維素酶可以是任何在酸性、中性或堿性pH范圍具有纖維素分解活性的纖維素酶組分。優(yōu)選地,所述組分是微生物內(nèi)切葡聚糖酶(EC3.2.1.4),優(yōu)選為真菌或細(xì)菌來源,其可從已知能夠產(chǎn)生纖維素分解酶的微生物衍生或分離和純化,所述微生物例如下文所提及的屬的種。衍生的纖維素酶可為同源或異源纖維素酶。優(yōu)選地,所述纖維素酶是同源的。然而,亦優(yōu)選來源于特定微生物、并與針對具有所需性質(zhì)的高度純化的纖維素酶組分培育的抗體具有免疫反應(yīng)性的異源組分。優(yōu)選地,本發(fā)明中使用的纖維素酶是內(nèi)切葡聚糖酶(EC3.2.1.4)。就本發(fā)明的目的而言,內(nèi)切葡聚糖酶活性使用羧甲基纖維素(CMC)作為底物根據(jù)Ghose,1987,PureandAppl.Chem.59:257-268第264頁中的部分VI的方法確定。根據(jù)本發(fā)明可用的特定內(nèi)切葡聚糖酶的實例為:來源于任何下述真菌屬的纖維素酶:枝頂孢霉屬(Acremonium)、糞盤菌屬(Ascobolus)、曲霉屬(Aspergillus)、毛殼屬(Chaetomium)、刺枝霉屬(Chaetostylum)、Cladorrhinum、刺盤孢屬(Colletotrichum)、鑲孢屬(Coniothecium)、鬼傘屬(Coprinus)、毛皮傘屬(Crinipellis)、柱孢屬(Cylindrocarpon)、間座殼屬(Diaporthe)、色二孢屬(Diplodia)、Disporotrichum、黑耳屬(Exidia)、層孔菌屬(Fomes)、鐮孢屬(Fusarium)、地霉屬(Geotrichum)、粘帚霉屬(Gliocladium)、腐質(zhì)霉屬(Humicola)、耙齒菌屬(Irpex)、殼球孢屬(Macrophomina)、Melanocarpus、小球殼孢屬(Microsphaeropsis)、毀絲霉屬(Myceliophthora)、叢赤殼屬(Nectia)、新考瑪脂霉屬(Neocallimastix)、黑孢屬(Nigrospora)、Nodulisporum、斑褶菇屬(Panaeolus)、青霉屬(Penicillium)、平革菌屬(Phanerochaete)、須霉屬(Phycomyces)、瘤胃壺菌屬(Piromyces)、孔座殼屬(Poronia)、根毛霉屬(Rhizomucor)、根囊壺菌屬(Rhizophyctis)、Saccobolus、裂褶菌屬(Schizophyllum)、柱頂孢屬(Scytalidium)、糞殼屬(Sordaria)、Spongopellis、Systaspospora、嗜熱霉屬(Thermomyces)、梭孢殼屬(Thielavia)、栓菌屬(Trametes)、單端孢屬(Trichothecium)、木霉屬(Trichoderma)、周刺座霉屬(Volutella)、Ulospora、黑粉菌屬(Ustilago)、炭角菌屬(Xylaria);特別是來源于下述真菌菌種的酸性纖維素酶:里氏木霉(Trichodermareesei)、綠色木霉(Trichodermaviride)、長枝木霉(Trichodermalongibrachiatum);來源于下述真菌菌種的纖維素酶:Ascobolusstictoides、棘孢曲霉(Aspergillusaculeatus)、管毛殼(Chaetomiumcuniculorum)、巴西毛殼(Chaetomiumbrasiliense)、突孢毛殼(Chaetomiummurorum)、Chaetomiumvirescens、弗雷生刺枝霉(Chaetostylumfresenii)、Cladorrhinumfoecundissimum、柱孢屬、Diaporthesyngenesia、棉色二孢(Diplodiagossypina)、黑耳(Exidiaglandulosa)、木蹄層孔菌(Fomesfomentarius)、尖鐮孢(Fusariumoxysporum)、早熟禾鐮孢(Fusariumpoae)、腐皮鐮孢(Fusariumsolani)、Fusariumanguioides、地霉屬、鏈孢粘帚霉(Gliocladiumcatenulatum)、黑腐質(zhì)霉(Humicolanigrescens)、灰腐質(zhì)霉(Humicolagrisea)、耙齒菌屬、Macrophominaphaseolina、Melanocarpusalbomyces、小球殼孢屬、嗜熱毀絲霉(Myceliophthorathermophila)、Nectriapinea、Neocallimastixpatriciarum、黑孢屬、Nodulisporum、網(wǎng)紋斑褶菇(Panaeolusretirugis)、產(chǎn)黃青霉(Penicilliumchrysogenum)、疣孢青霉(Penicilliumverruculosum)、平革菌屬、閃光須霉(Phycomycesnitens)、瘤胃壺菌屬、點孔座霉(Poroniapunctata)、微小根毛霉(Rhizomucorpusillus)、紅根囊壺菌(Rhizophlyctisrosea)、Saccobolusdilutellus、裂褶菌(Schizophyllumcommune)、Scytalidiumthermophilum、大孢糞殼(Sordariamacrospora)、Spongopellis、Syspastosporaboninensis、Thermomycesverrucosus、Thielaviathermophila、土生梭孢霉(Thielaviaterrestris)、血紅栓菌(Trametessanguinea)、粉紅單端孢(Trichotheciumroseum)、哈茨木霉(Trichodermaharzianum)、Volutellacolletotrichoides、Ulosporabilgramii、玉蜀黍黑粉菌(Ustilagomaydis)、團炭角菌(Xylariahypoxylon)、嗜熱毀絲霉(Myceliophthorathermophila)、特異腐質(zhì)霉(Humicolainsolens)、疏棉狀腐質(zhì)霉(Humicolalanuginosa)、灰腐質(zhì)霉(Humicolagrisea);和來源于特異腐質(zhì)霉的GH45內(nèi)切葡聚糖酶,其具有PCT專利申請?zhí)朩O91/17243,SEQIDNO:2中公開的氨基酸序列,或如WO96/29397中所述的來自土生梭孢霉的內(nèi)切葡聚糖酶,或具有與上述酶有至少60%,優(yōu)選至少70%,更優(yōu)選75%,更優(yōu)選至少80%,更優(yōu)選85%,特別是至少90%同一性的氨基酸序列的變體;和來自下述細(xì)菌屬:芽孢桿菌屬(Bacillus)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、糖絲菌屬(Saccharothrix)、纖維弧菌屬(Cellvibrio)、嗜熱單胞菌屬(Thermomonospora),特別是來自下述種:遲緩芽孢桿菌(Bacilluslentus)、Bacillusagaradhaerens、地衣芽孢桿菌(Bacilluslicheniformis)、Pseudomonascellulosa、澳大利亞糖絲菌(Saccharothrixaustraliensis)、德克薩斯糖絲菌(Saccharothrixtexasensis)、外外安德糖絲菌(Saccharothrixwaywayandensis)、喜冷糖絲菌(Saccharothrixcryophilis)、黃糖絲菌(Saccharothrixflava)、淡蘭褐糖絲菌(Saccharothrixcoeruleofusca)、長孢糖絲菌(Saccharothrixlongispora)、易變糖絲菌莢膜亞種(Saccharothrixmutabilisssp.capreolus)、氣生菌落糖絲菌(Saccharothrixaerocolonigenes)、易變糖絲菌易變亞種(Saccharothrixmutabilisssp.mutabilis)、丁香糖絲菌(Saccharothrixsyringae)、混合纖維弧菌(Cellvibriomixtus)、褐色高溫單胞菌(Thermomonosporafusca)的細(xì)菌的纖維素酶。對作為WO94/01532,WO94/14953,WO96/11262,WO96/19570和WO96/29397公開的國際專利申請中提及的纖維素酶的詳細(xì)公開進行了引用;其他實例是公開的EP271004中公開的纖維素酶。具有抗再沉積作用的內(nèi)切葡聚糖酶可從來自多種細(xì)菌來源的缺乏糖結(jié)合模塊(CBM)的真菌內(nèi)切葡聚糖酶獲得。一些來源是特異腐質(zhì)霉,作為DSM12648保藏的芽孢桿菌屬菌種,作為FERMP-16067保藏的芽孢桿菌屬菌種KSMS237,多粘類芽孢桿菌(Panibacilluspolymyxa)和Panibacilluspabuli。具體的抗再沉積內(nèi)切葡聚糖酶公開于WO91/17244(通過提述并入本文)的圖14,WO04/053039SEQIDNO:2(通過提述并入本文),JP2000210081的SEQIDNO:1的位置1至824(通過提述并入本文)??捎糜诒景l(fā)明的方法中的可商購的纖維素酶產(chǎn)品的實例為:Acid,Ultra(均可從NovoNordiskA/S,DK-2880Bagsvaerd,Denmark獲得);IndiageTM,PrimafastTM(兩者均來自GenencorInternationalInc.,U.S.A.);PowerstoneTM(fromIogen,Canada);EcostoneTM,BiotouchTM(兩者均來自ABEnzymes,F(xiàn)inland);RocksoftTM(來自CPN,U.S.A.),和SankoBioTM(來自Meiji/RakutoKaseiLtd.,Japan)。蛋白酶在一個優(yōu)選實施方案中,本發(fā)明中使用蛋白酶。合適的蛋白酶包括動物、植物或微生物來源的那些。優(yōu)選微生物來源。包括化學(xué)修飾或蛋白質(zhì)工程的突變體。所述蛋白酶可例如為金屬蛋白酶(EC3.4.17或EC3.4.24)或絲氨酸蛋白酶(EC3.4.21),優(yōu)選堿性微生物蛋白酶或胰蛋白酶樣蛋白酶。堿性蛋白酶的實例為枯草桿菌蛋白酶(EC3.4.21.62),特別是來源于芽孢桿菌屬的那些,例如枯草桿菌蛋白酶Novo,枯草桿菌蛋白酶Carlsberg,枯草桿菌蛋白酶309,枯草桿菌蛋白酶147和枯草桿菌蛋白酶168(描述于WO89/06279)。胰蛋白酶樣蛋白酶的實例為胰蛋白酶(例如豬或牛來源的)和描述于WO89/06270和WO94/25583的鐮孢屬蛋白酶。優(yōu)選的可商購的蛋白酶包括和(NovozymesA/S),PurafectFN2TM,和FN3TM(GenencorInternationalInc.)。脂肪酶在本發(fā)明的其它實施方案中,本發(fā)明中使用脂肪酶。合適的脂肪酶包括細(xì)菌或真菌來源的那些。就此而言,包括此類脂肪酶化學(xué)或遺傳修飾的變體。所述脂肪酶可例如為三?;视椭久?EC3.1.1.3),磷脂酶A2(EC3.1.1.4),溶血磷脂酶(EC3.1.1.5),甘油一酯脂肪酶(EC3.1.1.23),半乳糖脂肪酶(EC3.1.1.26),磷脂酶A1(EC3.1.1.32),脂蛋白脂肪酶(EC3.1.1.34)。可用的脂肪酶的實例包括疏棉狀腐質(zhì)霉(Humicolalanuginosa)脂肪酶,如公開于EP258068和EP305216;曼赫根毛霉(Rhizomucormiehei)脂肪酶,例如公開于EP238023,或來自特異腐質(zhì)霉,如公開于WO96/13580;假絲酵母屬(Candida)脂肪酶,如南極假絲酵母(C.antarctica)脂肪酶,例如描述于EP214761的南極假絲酵母脂肪酶A或B;假單胞菌屬脂肪酶,如描述于EP721981(例如,可從具有保藏登錄號FERMBP-4772的假單胞菌屬菌種SD705菌株獲得的脂肪酶),PCT/JP96/00426,PCT/JP96/00454(例如P.solanacearum脂肪酶),EP571982或WO95/14783(例如門多薩假單胞菌(P.mendocina)脂肪酶)的那些之一,產(chǎn)堿假單胞菌(P.alcaligenes)或假產(chǎn)堿假單胞菌(P.pseudoalcaligenes)脂肪酶,例如描述于EP218272,洋蔥假單胞菌(P.cepacia)脂肪酶,例如描述于EP331376,施氏假單胞菌(P.stutzeri)脂肪酶,例如描述于GB1372034,或螢光假單胞菌(P.fluorescens)脂肪酶;芽孢桿菌屬脂肪酶,例如枯草芽孢桿菌脂肪酶(Dartois等(1993)BiochemicaetBiophysicaActa1131:253-260),嗜熱脂肪芽孢桿菌(B.stearothermophilus)脂肪酶(JP64/744992)和微小芽孢桿菌(B.pumilus)脂肪酶(WO91/16422)。合適的可商購的脂肪酶包括和Lipolase(可從NovozymesA/S獲得),M1LipaseTM和LipomaxTM(可從GenencorInc.獲得)和LipaseP"Amano"(可從AmanoPharmaceuticalCo.Ltd.獲得)??缮藤彽慕琴|(zhì)酶包括來自GenencorInc.的LumafastTM。角質(zhì)酶在其他實施方案中,本發(fā)明中使用角質(zhì)酶。潛在可用類型的脂肪分解酶包括角質(zhì)酶(EC3.1.1.74),例如如WO88/09367中所述的來源于門多薩假單胞菌的角質(zhì)酶,或來源于豌豆腐皮鐮孢(Fusariumsolanipisi)(描述于,例如WO90/09446)。由于角質(zhì)酶的脂肪分解酶活性,其與脂肪酶對于相同的污跡可為有效的??缮藤彽慕琴|(zhì)酶包括來自GenencorInc.的LumafastTM。淀粉酶在其它實施方案中,本發(fā)明中使用淀粉酶。淀粉酶包括例如細(xì)菌或真菌來源的α-淀粉酶(EC3.2.1.1),β-淀粉酶(EC3.2.1.2)和/或葡糖淀粉酶(EC3.2.1.3)。就此而言包括此類淀粉酶的化學(xué)或遺傳修飾的突變體。對于本發(fā)明α-淀粉酶是優(yōu)選的。相關(guān)的α-淀粉酶包括,例如可從芽孢桿菌屬菌種,特別是地衣芽孢桿菌的特定菌株獲得的α-淀粉酶,其在GB1296839中更詳細(xì)描述??捎玫牡矸勖傅倪M一步實例是來源于芽孢桿菌屬菌種菌株WO95/26397(通過提述并入本文)的SEQIDNO:1和2中所示的α-淀粉酶;來源于芽孢桿菌屬菌種DSM12649、作為WO00/60060(通過提述并入本文)中的SEQIDNO:2公開的AA560α-淀粉酶,和AA560α-淀粉酶的變體,包括實施例7和8(通過提述并入本文)中公開的AA560變體。相關(guān)的可商購的淀粉酶包括TermamylTMUltra,和(均可從fromNovozymesA/S,Bagsvaerd,Denmark獲得),以及和P(可從DSM,Holland獲得)以及PurastarOxAm和PoweraseTM(可從DaniscoA/S獲得)。其它可用的淀粉酶為CGT酶(環(huán)糊精葡聚糖轉(zhuǎn)移酶,EC2.4.1.19),例如可從芽孢桿菌屬、熱厭氧桿菌屬(Thermoanaerobactor或Thermoanaerobacterium)的菌種獲得的那些。半纖維素酶在其他實施方案中,本發(fā)明中使用半纖維素酶。半纖維素酶是植物細(xì)胞壁中最復(fù)雜的一類非淀粉多糖。它們由木糖、阿拉伯糖、半乳糖、甘露糖和/或葡萄糖的聚合物組成,通常高度支化,并與其它細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)相連。本發(fā)明的半纖維素酶因此包括具有木聚糖分解活性,阿拉伯糖分解活性,半乳糖分解活性和/或甘露糖分解活性的酶。本發(fā)明的半纖維素酶可例如選自木聚糖酶(EC3.2.1.8,EC3.2.1.32,和EC3.2.1.136),木葡聚糖酶(EC3.2.1.4和EC3.2.1.151),阿拉伯呋喃糖苷酶(EC3.2.1.55),乙酰木聚糖酯酶(EC3.1.1.72),葡糖醛酸糖苷酶(EC3.2.1.31,EC3.2.1.56,EC3.2.1.128和EC3.2.1.139),葡聚糖水解酶(EC3.2.1.11,EC3.2.1.83和EC3.2.1.73),阿魏酸酯酶(EC3.1.1.73),香豆酸酯酶(EC3.1.1.73),甘露聚糖酶(EC3.2.1.25;EC3.2.1.78和EC3.2.1.101),阿拉伯糖苷酶(EC3.2.1.88),阿拉伯聚糖酶(EC3.2.1.99),半乳聚糖酶(EC3.2.1.89,EC3.2.1.23和EC3.2.1.164)和苔聚糖酶(lichenases)(EC3.2.1.73)。然而,這不應(yīng)認(rèn)為是窮舉性的列表。甘露聚糖酶對于本發(fā)明是優(yōu)選的半纖維素酶。甘露聚糖酶水解由半乳甘露聚糖構(gòu)成的生物聚合物。含有甘露聚糖的污跡常常包括瓜爾膠和刺槐豆膠,它們在食品和化妝品中廣泛用作穩(wěn)定劑。合適的甘露聚糖酶包括細(xì)菌或真菌來源的那些。包括化學(xué)或遺傳修飾的突變體。在一個優(yōu)選實施方案中,所述甘露聚糖酶來源于芽孢桿菌屬的菌株特別是芽孢桿菌屬菌種I633,公開于WO99/64619(通過提述并入本文)的SEQIDNO:2的位置31至330或SEQIDNO:5,或來源于Bacillusagaradhaerens,例如來自模式株DSM8721。合適的可商購的甘露聚糖酶是由NovozymesA/S生產(chǎn)的或Genencor(Danisco的一個部門)生產(chǎn)的PurabriteTM。木聚糖酶對于本發(fā)明是優(yōu)選的半纖維素酶。合適的可商購的木聚糖酶是HC(可從NovozymesA/S獲得)。果膠酶在其他實施方案中,本發(fā)明中使用果膠酶。術(shù)語果膠酶或果膠分解酶旨在包括任何根據(jù)本領(lǐng)域定義的果膠酶,其中果膠酶是一組催化糖苷鍵切割的酶?;旧洗嬖谌N類型的果膠分解酶:果膠酯酶,其僅從果膠去除甲氧基殘基,多種解聚酶,和原果膠酶,其溶解原果膠以形成果膠(Sakai等,(1993)AdvancesinAppliedMicrobiologyvol.39pp213-294)??捎糜诒景l(fā)明的果膠酶或果膠分解酶的實例是果膠酸裂合酶(EC4.2.2.2和EC4.2.2.9),多聚半乳糖醛酸酶(EC3.2.1.15和EC3.2.1.67),多聚甲基半乳糖醛酸酶,果膠裂合酶(EC4.2.2.10),半乳聚糖酶(EC3.2.1.89),阿拉伯聚糖酶(EC3.2.1.99)和/或果膠酯酶(EC3.1.1.11)。合適的果膠分解酶包括描述于WO99/27083,WO99/27084,WO00/55309和WO02/092741的那些。合適的果膠酸裂合酶包括細(xì)菌或真菌來源的那些。包括化學(xué)或遺傳修飾的突變體。在一個優(yōu)選實施方案中,所述果膠酸裂合酶來源于芽孢桿菌屬的菌株,特別是枯草芽孢桿菌(Bacillussubstilis)的菌株,特別是在WO02/092741的實施例6中公開的SEQIDNO:2或其變體所公開的枯草芽孢桿菌DSM14218(通過提述并入本文)或WO03/095638中公開的變體(通過提述并入本文)?;蛘?,所述果膠酸裂合酶來源于地衣芽孢桿菌(Bacilluslicheniformis)的菌株,特別是WO99/27083中作為SEQIDNO:8公開的果膠酸裂合酶(通過提述并入本文)或如WO02/06442中所述的其變體。合適的可商購的果膠酸裂合酶為NovozymesA/S生產(chǎn)的或X紡織品組合物本發(fā)明亦涵蓋包含GH61多肽和纖維素酶的紡織品組合物。所述紡織品組合物可適于特定用途,如生物石洗或生物拋光。將GH61多肽與纖維素酶一同使用可提供改善的紡織品性能如提高粗斜棉布磨蝕水平,降低返沾色水平,促進染料從紡織品釋放,使顏色清晰和減少起球。在本發(fā)明中,GH61多肽通過減少達到相同程度的磨蝕或去球所需的纖維素酶的量來增強纖維素酶活性。在本發(fā)明的一些實施方案中,含有GH61多肽和纖維素酶的組合物進一步包含增強生物拋光和/或生物石洗工藝,和/或提供涉及例如可染色性(dyeability)和/或可潤濕性(wettability)方面的較佳作用的其它組分,包括但不限于其它酶,以及表面活性劑、漂白劑、消泡劑、洗滌助劑系統(tǒng)(buildersystem)等中的一種或多種。適用于本發(fā)明的酶包括但不限于蛋白酶、脂肪酶、角質(zhì)酶、淀粉酶、果膠酶、半纖維素酶、氧化酶、過氧化物酶、漆酶和轉(zhuǎn)移酶。在一個實施方案中,所述紡織品組合物包含一種或多種GH61多肽,其選自下組:與SEQIDNO:1,SEQIDNO:2,SEQIDNO:3,SEQIDNO:4,SEQIDNO:5,SEQIDNO:6,SEQIDNO:7,SEQIDNO:8,SEQIDNO:9,SEQIDNO:10,SEQIDNO:11,SEQIDNO:12,SEQIDNO:13,SEQIDNO:14,SEQIDNO:15,SEQIDNO:16,SEQIDNO:17,SEQIDNO:18,SEQIDNO:19,SEQIDNO:20,SEQIDNO:21,SEQIDNO:22,SEQIDNO:23,SEQIDNO:24,SEQIDNO:25,SEQIDNO:26,SEQIDNO:27,SEQIDNO:28,SEQIDNO:29,SEQIDNO:30,SEQIDNO:31,或SEQIDNO:32的成熟多肽具有至少60%,例如至少65%,至少70%,至少75%,至少80%,至少85%,至少90%,至少91%,至少92%,至少93%,至少94%,或至少95%,至少96%,至少97%,至少98%,至少99%,或至少100%的同一性程度的氨基酸序列。在一個甚至更優(yōu)選的方面,所述紡織品組合物進一步包含輔助物質(zhì),如半胱氨酸。所述紡織品組合物可為任何形式,如固體、液體、糊、凝膠或其任意組合。工藝條件GH61多肽與纖維素酶的組合可在紡織品制造工藝過程中,特別是在生物石洗或生物拋光工藝中使用。建議在本發(fā)明中使用的合適的液/紡織品比例可為約20:1至約1:1的范圍,優(yōu)選約15:1至約3:1的范圍,更優(yōu)選15:1至5:1的范圍(體積/重量,ml/mg)。在常規(guī)“生物石洗”或“生物拋光”工藝中,反應(yīng)時間通常在約10分鐘至約8小時的范圍,優(yōu)選所述反應(yīng)時間在約20分鐘至約180分鐘的范圍,更優(yōu)選反應(yīng)時間在約30分鐘至約150分鐘的范圍,最優(yōu)選反應(yīng)時間在約45分鐘至約120分鐘的范圍。反應(yīng)介質(zhì)的pH極大地取決于所討論的酶。優(yōu)選地,本發(fā)明的工藝在約pH3至約pH11的范圍,優(yōu)選約pH4至約pH8的范圍,或約pH4.5至約pH7.5的范圍的pH進行。本發(fā)明的工藝能夠在低于90℃,優(yōu)選低于75℃,更優(yōu)選低于65℃,更優(yōu)選低于50℃,更優(yōu)選低于40℃,甚至更優(yōu)選低于30℃的溫度起作用。在一些實施方案中,本發(fā)明的工藝在5至90℃,優(yōu)選10至90℃,優(yōu)選10至80℃,更優(yōu)選10至75℃,更優(yōu)選15至65℃,更優(yōu)選20至65℃,更優(yōu)選30至65℃,和甚至更優(yōu)選30至55℃的溫度范圍進行。酶劑量極大地取決于酶反應(yīng)時間,即相對較短的酶反應(yīng)時間需要相對增加的酶劑量,反之亦然。一般而言,可以根據(jù)可用的反應(yīng)時間規(guī)定酶劑量。根據(jù)本發(fā)明的方法要使用的GH61多肽的量取決于許多因素,但根據(jù)本發(fā)明水性介質(zhì)中GH61多肽的濃度可為約0.001至約10毫克酶蛋白每克織物,優(yōu)選0.02-5毫克酶蛋白每克織物,優(yōu)選0.05-2毫克酶蛋白每克織物,更優(yōu)選0.04-0.6毫克酶蛋白每克織物。根據(jù)本發(fā)明的方法待施用的纖維素酶(或纖維素分解酶)的量取決于許多因素,但根據(jù)本發(fā)明水性介質(zhì)中纖維素分解酶的濃度可為約0.001至約10毫克酶蛋白每克織物,優(yōu)選0.02-5毫克酶蛋白每克織物,更優(yōu)選0.05-2毫克酶蛋白每克織物。根據(jù)本發(fā)明,輔助物質(zhì),如L-半胱氨酸在水性介質(zhì)中的濃度可為優(yōu)選0.1-50mM,更優(yōu)選0.5-25mM,更優(yōu)選1-10mM,甚至更優(yōu)選4-8mM。本發(fā)明的方法中使用的水性組合物可進一步包括一種或多種選自下組的酶:蛋白酶,脂肪酶,角質(zhì)酶,纖維素酶,半纖維素酶,果膠酶,淀粉酶,氧還酶,過氧化物酶,漆酶和轉(zhuǎn)移酶。本發(fā)明的工藝與不用糖基水解酶家族61多肽處理的紡織品組合物相比可提供增加的磨蝕水平和/或低返沾色水平的作用。本發(fā)明的工藝亦可增強從織物的染料釋放,這會給予織物在處理之后不同的風(fēng)格。實施例材料和方法CellusoftNeupolish(土生梭孢霉單組分內(nèi)切葡聚糖酶產(chǎn)品,可從NovozymesA/S商購)Carezyme(單組分特異腐質(zhì)霉GH45內(nèi)切葡聚糖酶產(chǎn)品,可從NovozymesA/S商購)(里氏木霉多組分纖維素酶產(chǎn)品,可從NovozymesA/S商購)TaGH61的成熟多肽:SEQIDNO:1的氨基酸22至249所示的橙橘嗜熱子囊菌(Thermoascusaurantiacus)GH61A多肽(描述于WO2005/074656)AfGH61的成熟多肽:SEQIDNO:2的氨基酸22至250所示的煙曲霉(Aspergillusfumigatus)GH61B多肽(描述于US2010124769)TsGH61的成熟多肽:SEQIDNO:33的氨基酸22至320所示的TalaromycesstipitatusGH61多肽(UNIPROT:B8M2G3)顏色測量粗斜棉布的磨蝕水平和返沾色水平通過用預(yù)校正的DataColorSF450X測量反射率來確定,或者可使用等效的裝置。對于每個樣品取四個讀數(shù),并使用讀數(shù)的平均值。用CIEL*指標(biāo)在樣品的藍色面(正面)上評價磨蝕水平,而用CIEb*指標(biāo)在樣品的背面上評價返沾色水平。L*表示黑白(white/black)在0至100的尺度上的變化,L*的減少意味著黑色的增加(白色的減少),而L*的增加意味著白色的增加(黑色的減少)。ΔL*單位=用某種纖維素酶處理過的樣品(swatch)的L*-在纖維素酶處理之前樣品的L*。ΔL*單位越大,粗斜棉布的磨蝕水平越高,例如ΔL*單位為4的磨蝕水平比ΔL*單位為3更高。b*表示藍/黃的變化,b*的減少意味著藍色的增加(黃色的減少),而b*的增加意味著黃色的增加(藍色的減少)。Δb*單位=用某種纖維素酶處理過的樣品的b*-在纖維素酶處理之前樣品的b*。Δb*單位越大對應(yīng)的返沾色水平越低,例如Δb*單位為-1.5的返沾色水平比Δb*單位為-2.5更低。染料釋放染料釋放能力用預(yù)校正的分光光度計UV1700確定。收集來自每個燒杯的處理液,并在4000rpm離心15分鐘,以進一步收集上清供在590nm的吸收測定。更高的OD590值意味著更多染料從織物釋放至溶液中,這會給予織物新的整理風(fēng)格。蛋白含量酶產(chǎn)物中的酶蛋白可用BCATM蛋白質(zhì)測定試劑盒(產(chǎn)品號23225,商業(yè)上可從ThermoFisherScientificInc.獲得)根據(jù)產(chǎn)品說明書來測量。實施例1:在Launder-O-meter中用纖維素酶和TaGH61進行的粗斜棉布磨蝕在Launder-O-Meter(SDL-AtlasLP2)中測試TaGH61的成熟多肽對CellusoftNeupolish磨蝕粗斜棉布的作用,包括磨蝕、返沾色和處理浴的顏色。將生粗斜棉布退漿并切割為12.5cm高和23cm長。對粗斜棉布進行剪切和縫紉,形成高12.5cm、重約14g的管。將管置于經(jīng)調(diào)理的房間(65%相對濕度,20℃)24小時,然后將它們編號,用分析天平稱重,并記錄。在每個500ml燒杯中放置一根經(jīng)調(diào)理的管,藍色面向內(nèi)。對于每個燒杯,使用30個大螺母(M10M6M-SR-A4-80,耐酸的),10個小螺母(M6M6M-SR-A4-80,耐酸的),7個大的星形磁鐵(直徑17mm,產(chǎn)品號3-CO-411117,Cowie,SchweizviaBie&Berntsen),和3個小的星形磁鐵(直徑14mm,產(chǎn)品號3-CO-11117,Cowie,SchweizviaBie&Berntsen)提供機械協(xié)助。然后根據(jù)表1基于實際織物重量的計算添加緩沖液(50mM磷酸鹽緩沖液,pH=6.5)和酶溶液,以使總體積為大約50ml,可構(gòu)成3.8:1(v/w)的液體對織物比。將Launder-O-Meter(LOM)機器在選擇所需程序之后啟動,該機器當(dāng)溫度達到55℃時會保持。給每個燒杯蓋上內(nèi)襯有2個氯丁橡膠(neoprin)墊圈的蓋,并用金屬卡裝裝置(clampingdevice)緊密封閉。將燒杯加載入經(jīng)預(yù)熱的LOM。使用金屬架容納6個燒杯并將它們以水平姿勢固定于4個筒(drum)位置的每一個中。封閉LOM蓋,并繼續(xù)洗滌程序,并開始計時。2小時之后,移出所有燒杯,并將粗斜棉布樣品轉(zhuǎn)移至滅活溶液(2g/L碳酸鈉)在85℃保持10分鐘。然后將樣品在熱水中漂洗2次,并在冷水中漂洗2次。將粗斜棉布樣品滾筒烘干(tumbledry)(AEG,LAVATHERM37700,Germany),然后在20℃,65%相對濕度調(diào)理24小時,再進行評估。亦收集來自每個燒杯的處理液,并在4000rpm離心15分鐘,以進一步收集上清以供在590nm用SpectrophotometerUV1700的吸收測定。粗斜棉布樣品的磨蝕和返沾色水平通過用預(yù)校正的DataColorSF450X測量反射率來確定。對于每個樣品取四個讀數(shù)。用指標(biāo)CIEL*在樣品的藍色面上評估磨蝕水平,而用指標(biāo)CIEb*在樣品的背面上評價返沾色水平。對于L*和b*兩者,對于每個織物進行4次讀數(shù),并使用四次讀數(shù)的平均值。通過BCATM蛋白質(zhì)測定試劑盒來測量來自CellusoftNeupolish的纖維素酶。如表1中所示,與0.05mg酶蛋白/g織物的來自CellusoftNeupolish的纖維素酶一起添加0.042或0.672mgTaGH61/g織物使磨蝕水平從7.11增加至8.73或8.14(表示為織物正面的ΔL*),而使得返沾色保持或甚至從-3.58略微減少至-3.41或-3.21(表示為織物背面的Δb*)。另一個值得注意的作用是,隨著TaGH61的添加,處理浴的顏色顯著變深。且浴顏色的增加作用與TaGH61的劑量一致。在粗斜棉布磨蝕過程中觀察到纖維素酶和TaGH61之間在增加浴顏色方面的協(xié)同作用,其中與纖維素酶一同使用更高劑量的GH61給出0.62的OD590結(jié)果。表1:在LOM中在55℃,pH6.5,2小時的粗斜棉布磨蝕的結(jié)果備注:對于每個酶組合為三次樣品的平均值實施例2:在LOM中用纖維素酶和添加的AfGH61進行的粗斜棉布磨蝕亦用與實施例1相同的實驗方案測試了AfGH61的成熟多肽對CellusoftNeupolish磨蝕粗斜棉布的作用。此處處理時間為2小時。如表2中所示,發(fā)現(xiàn)與0.016mg酶蛋白/g織物的來自CellusoftNeupolish的纖維素酶一起添加0.032mgAfGH61/g織物增強了磨蝕,這表現(xiàn)為隨著AfGH61的添加,ΔL*從7.1增加至8.1。且AfGH61亦使得浴更加帶藍色(bluish),表明染料從織物至上清的釋放增加,這表現(xiàn)為溶液中更高的OD590值。表2:在LOM中在55℃,pH6.5,2小時的粗斜棉布磨蝕的結(jié)果備注:對于每個酶組合為三個樣品的平均值實施例3:在LOM中用纖維素酶,TaGH61和L-半胱氨酸進行的粗斜棉布磨蝕在LOM中測試L-半胱氨酸對CellusoftNeupolish和CellusoftNeupolish/TaGH61成熟多肽的混合物磨蝕粗斜棉布的作用。測試條件與實施例1相同,只是將0-20mML-半胱氨酸與CellusoftNeupolish或CellusoftNeupolish/TaGH61混合物一同添加。該實施例中處理時間設(shè)為0.5小時。如表3中所示,確認(rèn)了與0.05mg酶蛋白/g織物的來自CellusoftNeupolish的纖維素酶一同添加0.05mgTaGH61/g織物可將磨蝕從1.14改善至1.59,而將返沾色水平從-1.54減少至-1.36。隨著TaGH61的添加,浴也變得更帶藍色。而且在CellusoftNeupolish/TaGH61中進一步添加5mML-半胱氨酸作為輔助物質(zhì)可將磨蝕從1.59增強至1.80的更高水平,并將返沾色從-1.36減少至-1.26。發(fā)現(xiàn)5mM是L-半胱氨酸作為混合物的增強劑,以實現(xiàn)更高水平的磨蝕和更帶藍色的浴的合適濃度。當(dāng)濃度進一步增加至10或20mM時,L-半胱氨酸喪失了其增強作用,或甚至成為混合物的抑制劑。表3:在55℃,pH6.5,0.5小時在LOM中重懸于磨蝕的結(jié)果備注:對于每個酶組合為三個樣品的平均值實施例4:在Wascator中用纖維素酶和TaGH61進行的粗斜棉布磨蝕在Wascator(Electrolux,Switzerland)中進行粗斜棉布磨蝕試驗。對于每次試驗,將五根兩種類型的粗斜棉布管加上一小片粗斜棉布填充物(filler)(其重至約1kg)一同加載。使用1.0g/L乙酸鈉和乙酸將溶液控制在pH6-7。使用DatacolorSF450,用指標(biāo)CIEL*在樣品的藍色面上評估磨蝕水平,并用指標(biāo)CIEb*在樣品的背面上評估返沾色水平。對于L*和b*兩者,對于每個織物均進行了8次讀數(shù)。為比較洗滌樣式亦應(yīng)用了肉眼檢查。試驗條件如下所述:如表4中所示,通過將8.25mgTaGH61與來自CellusoftNeupolish的纖維素酶或來自Carezyme的纖維素酶一同添加,顯著地提高了磨蝕水平并降低了返沾色水平。對于CellusoftNeupolishTaGH61的添加使粗斜棉布正面L*增加了1.52,但僅使得粗斜棉布返沾色b*略微增加了0.19。對于Carezyme4500T,TaGH61的添加同時使得磨蝕增加0.74L*并使得返沾色減少0.09。并且,肉眼檢查確認(rèn)了TaGH61對于兩種纖維素酶的提高磨蝕和降低返沾色作用。表4:在Wascator中55℃,pH6-6.5,2小時粗斜棉布磨蝕的結(jié)果備注:對于每個酶組合為兩個重復(fù)樣品的平均值實施例5:在LOM用纖維素酶和添加的TsGH61進行的粗斜棉布磨蝕在與實施例1相同的實驗方案下用CellusoftNeupolish測試TsGH61(TalaromycesstipitatusGH61)。處理時間為2小時。如表5中所示,使用0.016mg酶蛋白/g織物的來自CellusoftNeupolish的纖維素酶,發(fā)現(xiàn)0.032mgTsGH61/g織物的添加增強磨蝕水平。表5:在55℃,pH6.5,2小時在LOM中粗斜棉布磨蝕的結(jié)果備注:對于每個酶組合為三個樣品的平均值如表5中所示,與僅用纖維素酶相比,TsGH61與纖維素酶的組合物根據(jù)織物正面的ΔL*使得磨蝕水平從6.6增加至7.5。實施例6:在LOM中用纖維素酶和添加的TaGH61a的粗斜棉布磨蝕按照與實施例1相同的實驗方案測試TaGH61與(多組分纖維素酶產(chǎn)品)一同對粗斜棉布磨蝕性能的作用。處理時間為2小時。如表6中所示,使用0.8mg酶蛋白/g織物的纖維素酶,發(fā)現(xiàn)0.032或0.128mgTaGH61a/g織物的添加對于CellusoftL.提高了磨蝕并降低了返沾色。表6:在LOM中55℃,pH5,2小時粗斜棉布磨蝕的結(jié)果備注:對于每個酶組合為三個樣品的平均值如表6中所示,與僅使用0.8mg纖維素酶/g織物相比,添加0.032或0.128mgTaGH61/g織物與纖維素酶一起使得磨蝕水平從7.8分別增加至8.1和8.7(表現(xiàn)為織物正面的ΔL*)。此外,TaGH61a的添加可降低在粗斜棉布背面上的返沾色水平,表現(xiàn)為當(dāng)TaGH61a劑量分別為0、0.032、0.128mg/g時,Δb*從-3.8增加至-3.0和-3.5。本文描述和要求保護的本發(fā)明并不局限于本文公開的具體方面的范圍內(nèi),因為這些方面旨在作為本發(fā)明幾個方面的說明。旨在將任何等同的方面包含于本發(fā)明的范圍內(nèi)。實際上,從前面的說明中,除本文所顯示和描述的之外,本發(fā)明的多種修改對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說是顯而易見的。這些修改也旨在落入所附的權(quán)利要求的范圍內(nèi)。在沖突的情況下,以包括定義的本公開為準(zhǔn)。