]-[4111^]和^〇]-叉 -Y-X(2)-Ox-[EHQN] - [FILV]-X-[ILV] 〇
[0046] 在一個(gè)第二方面，該GH61多肽包含以下基序：
[0047][ILMV]-P-X(4, 5)-G-X-Y-[ILMV]-X-R-X-[EQ]-X(3)-A-[HNQ]，
[0048] 其中X是任何氨基酸，X(4, 5)是任何4個(gè)或5個(gè)連續(xù)氨基酸，并且X(3)是任何3 個(gè)連續(xù)氨基酸。在以上基序中，采用可接受的IUPAC單一字母氨基酸縮寫。
[0049] 在一個(gè)第三方面，該GH61多肽包含一種氨基酸序列，該氨基酸序列與SEQ IDNO:I(Acremoniumalcalophilum)、SEQIDNO:2(AcremoniumalcalophiIum)、 SEQIDN0:3(Acremoniumalcalophilum)、SEQIDN0:4(土生梭抱殼霉（Thielavia terrestris))、SEQIDN0:5( 土生梭孢殼霉）、SEQIDN0:6( 土生梭孢殼霉）、SEQID NO: 7( 土生梭孢殼霉）、SEQIDNO: 8( 土生梭孢殼霉）、SEQIDNO: 9( 土生梭孢殼霉）、SEQ IDN0:10(金黃色嗜熱子囊菌（Thermoascusaurantiacus))、SEQIDN0:11(里氏木霉 (Trichodermareesei))、SEQIDNO: 12(嗜熱毀絲霉（Myceliophthorathermophila))、 SEQIDNO:13(嗜熱毀絲霉）、SEQIDNO:14(嗜熱毀絲霉）、SEQIDNO:15(嗜熱毀絲霉）、 SEQIDNO: 16 (嗜熱毀絲霉）、SEQIDNO: 17 (金黃色嗜熱子囊菌）、SEQIDNO: 18 (煙曲霉 (Aspergillusfumigatus))、SEQIDN0:19(嗜松青霉（Penicilliumpinophilum))、SEQID N0:20(嗜熱子囊菌屬（Thermoascussp.))、SEQIDN0:21(青霉屬（Penicilliumsp.))、 SEQIDNO:22( 土生梭孢殼霉）、SEQIDNO:23( 土生梭孢殼霉）、SEQIDNO:24( 土生梭孢 殼霉）、3￡〇10勵(lì):25(土生梭孢殼霉）、3￡〇10勵(lì):26(土生梭孢殼霉）、3￡〇10勵(lì):27(土 生梭孢殼霉）、SEQIDNO:28( 土生梭孢殼霉）、SEQIDNO:29( 土生梭孢殼霉）、SEQID NO: 30 ( 土生梭孢殼霉）、SEQIDNO: 31 ( 土生梭孢殼霉）、SEQIDNO: 32 ( 土生梭孢殼霉）、 SEQIDNO: 33 (甲殼嗜熱子囊菌（Thermoascuscrustaceus))、SEQIDNO: 34 (甲殼嗜熱子 囊菌）或SEQIDN0:35(甲殼嗜熱子囊菌）的成熟多肽具有至少50%、例如至少55%、至 少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少 92%、至少93%、至少94%或至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或至少 100%的序列一致性。
[0050] 序列一致性：兩個(gè)氨基酸序列之間或者兩個(gè)核苷酸序列之間的關(guān)聯(lián)度通過參數(shù) "序列一致性"來描述。
[0051] 出于本發(fā)明的目的，使用如在EMBOSS包（EMBOSS:歐洲分子生物學(xué)開放軟件套件 (TheEuropeanMolecularBiologyOpenSoftwareSuite)，賴斯（Rice)等人，2000,遺 傳學(xué)趨勢(shì)（TrendsGenet.) 16:276-277)(優(yōu)選5.0.0版或更新版本）的尼德爾（Needle) 程序中所實(shí)施的尼德爾曼-翁施（Needleman-Wunsch)算法（Needleman(尼德爾曼）和 Wunsch(翁施），1970,分子生物學(xué)雜志（J.Mol.Biol. )48:443-453)來確定兩個(gè)氨基酸 序列之間的序列一致性。使用的這些參數(shù)是空位開放罰分10、空位延伸罰分0.5,以及EBLOSUM62 (BLOSUM62的EMBOSS版本）取代矩陣。尼德爾標(biāo)注的"最長(zhǎng)的一致性"的輸出 (使用-非簡(jiǎn)化選項(xiàng)獲得）被用作百分比一致性，并且如下計(jì)算：
[0052](一致的殘基X100V(比對(duì)長(zhǎng)度-比對(duì)中的空位總數(shù)）
[0053] 出于本發(fā)明的目的，使用如在EMBOSS包（EMBOSS:歐洲分子生物學(xué)開放軟件套件， 賴斯（Rice)等人，2000,見上文）（優(yōu)選5. 0. 0版或更新版本）的尼德爾程序中所實(shí)施的尼 德爾曼-翁施算法（尼德爾曼（Needleman)和翁施（Wunsch)，1970,見上文）來確定兩個(gè) 脫氧核糖核苷酸序列之間的序列一致性。使用的這些參數(shù)是空位開放罰分10、空位延伸罰 分0. 5以及EDNAFULL(NCBINUC4. 4的EMBOSS版本）取代矩陣。尼德爾標(biāo)注的"最長(zhǎng)的一 致性"的輸出（使用-非簡(jiǎn)化選項(xiàng)獲得）被用作百分比一致性，并且如下計(jì)算：
[0054](-致的脫氧核糖核苷酸X100V(比對(duì)長(zhǎng)度-比對(duì)中的空位總數(shù)）
[0055]在一個(gè)第六方面，該GH61 多肽是包含SEQIDNO: 1、SEQIDNO: 2、SEQIDNO: 3、 SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQ IDNO: 10,SEQIDNO:IUSEQIDNO: 12,SEQIDNO: 13,SEQIDNO: 14,SEQIDNO: 15,SEQ IDNO: 16,SEQIDNO: 17,SEQIDNO: 18,SEQIDNO: 19,SEQIDN0:20,SEQIDN0:2USEQ IDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:24、SEQIDNO:25、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQ IDN0:28、SEQIDN0:29、SEQIDN0:30、SEQIDN0:31、SEQIDN0:32、SEQIDN0:33、SEQ IDNO: 34、或SEQIDNO: 35或一種其同源序列的成熟多肽的一個(gè)或多個(gè)（或若干）氨基酸 的取代、缺失和/或插入的一種人工變異體。
[0056] 優(yōu)選地，氨基酸改變的性質(zhì)較小，也就是說不會(huì)顯著影響蛋白質(zhì)折疊和/或活性 的保守氨基酸取代或插入；典型地是1個(gè)至大約30個(gè)氨基酸的小段缺失；小段氨基-或羧 基末端延伸，諸如氨基末端的甲硫氨酸殘基；多至大約20-25個(gè)殘基的小段接頭肽；或通過 改變凈電荷或另一功能而協(xié)助純化的小段延伸，諸如多組氨酸區(qū)段、抗原表位、或結(jié)合結(jié)構(gòu) 域。
[0057] 保守取代的實(shí)例是在下組的范圍內(nèi)：堿性氨基酸（精氨酸、賴氨酸及組氨酸）、酸 性氨基酸（谷氨酸和天冬氨酸）、極性氨基酸（谷氨酰胺和天冬酰胺）、疏水性氨基酸（亮 氨酸、異亮氨酸及纈氨酸）、芳香族氨基酸（苯丙氨酸、色氨酸及酪氨酸）及小氨基酸（甘 氨酸、丙氨酸、絲氨酸、蘇氨酸及甲硫氨酸）。一般不會(huì)改變特異性活性的氨基酸取代是本 領(lǐng)域已知的并且例如由H.諾伊拉特（Neurath)和R.L.希爾（Hill)，1979在蛋白質(zhì)（The Proteins)，學(xué)術(shù)出版社（AcademicPress)，紐約中描述。最常發(fā)生的交換是Ala/Ser、Val/ lie、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、 Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu、和Asp/Gly〇
[0058] 可替代地，氨基酸改變具有這樣一種性質(zhì)：改變多肽的物理化學(xué)特性。例如，氨基 酸改變可以提高多肽的熱穩(wěn)定性、改變底物特異性、改變最適PH，等等。
[0059] -種親本多肽中的必需氨基酸可以根據(jù)本領(lǐng)域中已知的程序來鑒定，諸如 定點(diǎn)誘變或丙氨酸掃描誘變（坎寧安（Cunningham)和韋爾斯（Wells)，1989,科學(xué) (Science) 244:1081-1085)。在后一技術(shù)中，在分子中的每個(gè)殘基中引入單個(gè)丙氨酸突變， 并且針對(duì)纖維素分解增強(qiáng)活性測(cè)試所得突變分子，以鑒定對(duì)于該分子的活性關(guān)鍵的氨基酸 殘基。還參見，希爾頓（Hilton)等人，1996,生物化學(xué)雜志（J.Biol.Chem.) 271:4699-4708。 也可結(jié)合假定接觸位點(diǎn)氨基酸的突變，如通過以下技術(shù)例如核磁共振、結(jié)晶學(xué)、電子衍射、 或光親和標(biāo)記進(jìn)行確定的對(duì)結(jié)構(gòu)進(jìn)行物理學(xué)分析，從而確定酶的活性位點(diǎn)或其他生物學(xué) 相互作用。參見，例如，德弗斯（deVos)等人，1992,科學(xué)（Science)255:306-312;史密斯 (Smith)等人，1992,分子生物學(xué)雜志（J.Mol.Biol. )224:899-904;烏樂達(dá)維爾（Wlodaver) 等人，1992,歐洲生化學(xué)會(huì)聯(lián)合會(huì)快報(bào)（FEBSLett.) 309:59-64。還可以從與親本多肽相關(guān) 的多肽的一致性分析推斷必需氨基酸的一致性。
[0060]可以做出單個(gè)或多個(gè)氨基酸取代、缺失和/或插入并且使用誘變、重組和 /或改組的已知方法進(jìn)行測(cè)試，隨后進(jìn)行相關(guān)篩選程序，諸如由里德哈爾-奧爾森 (Reidhaar-Olson)和薩奧爾（Sauer)，1988，科學(xué)（Science) 241:53-57 ;博維（Bowie) 和薩奧爾，1989,美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊（Proc.Natl.Acad.Sci.USA) 86:2152-2156 ;W0 95/17413;或WO95/22625披露的那些。其他可以使用的方法包括易錯(cuò)PCR、噬菌體展示 (例如洛曼（Lowman)等人，1991，生物化學(xué)（Biochemistry) 30:10832-10837 ;美國(guó)專利號(hào) 5, 223, 409 ;W0 92/06204)以及區(qū)域定向誘變（德比什爾（Derbyshire)等人，1986,基因 (Gene) 46:145;內(nèi)爾（Ner)等人，1988,DNA7:127)〇
[0061]可以結(jié)合誘變/改組方法與高通量自動(dòng)化篩選方法來檢測(cè)由宿主細(xì)胞表 達(dá)的克隆的、誘變的多肽的活性（內(nèi)斯（Ness)等人，1999,自然生物技術(shù)（Nature Biotechnology) 17:893-896)。編碼活性多肽的誘變的DNA分子可以回收自宿主細(xì)胞，并且 使用本領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)方法對(duì)其進(jìn)行迅速測(cè)序。這些方法允許迅速確定多肽中單個(gè)氨基酸殘基 的重要性。
[0062]SEQIDN0:1、SEQIDN0:2、SEQIDN0:3、SEQIDN0:4、SEQIDN0:5、SEQID N0:6,SEQIDN0:7,SEQIDN0:8,SEQIDN0:9,SEQIDNO:10,SEQIDNO:IUSEQID NO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQID NO: 18,SEQIDNO: 19,SEQIDN0:20,SEQIDN0:2USEQIDN0:22,SE