的透明質(zhì)酸修飾的Cu納米材料的制備方法，包括以下步驟:
[0026]利用直接沉積法制備棒狀ZnO;
[0027]將Ni鍍?cè)赯nO上，其包括以下步驟:將ZnO在二氯化錫和鹽酸的溶液中敏化，再放入到二氯化鈀和鹽酸溶液中活化，活化后的ZnO用去離子水清洗，然后再將ZnO放入到含有硫酸鎳、次磷酸鈉、氯化銨、檸檬酸鈉、丁二酸和乳酸的化學(xué)鍍池中進(jìn)行化學(xué)鍍，最后將鍍過鎳的ZnO過濾并用去離子水洗滌并烘干，即得到鍍鎳的ZnO。
[0028]用Cu包覆鍍鎳的ZnO，其包括以下步驟:將制備的鍍鎳ZnO移入去離子水中，加入聚乙二醇，在超聲條件下分散得到鍍鎳ZnO的懸濁液;將氧化亞銅粉末移入去離子水中充分溶解，得到氧化亞銅懸濁液;將氧化亞銅懸濁液與鍍鎳ZnO懸濁液混合，經(jīng)過靜置、過濾、水洗、醇洗后烘干，即得到Cu包覆的鍍鎳ZnO納米材料。
[0029]采用透明質(zhì)酸對(duì)Cu包覆的鍍鎳ZnO納米材料進(jìn)行修飾，其包括以下步驟:將透明質(zhì)酸與緩沖液置于水浴中攪拌，使透明質(zhì)酸分散于溶液后再加入Cu包覆的鍍鎳ZnO，持續(xù)攪拌，采用超濾管除去多余的透明質(zhì)酸，從而得到透明質(zhì)酸修飾的Cu包覆的鍍鎳ZnO納米材料。
[0030]實(shí)施例2癌細(xì)胞檢測(cè)方法
[0031 ]本發(fā)明的癌細(xì)胞檢測(cè)方法包括以下步驟:
[0032]a)熒光素標(biāo)記，將所述的Cu納米材料溶解在去離子水中，加入異硫氰酸熒光素進(jìn)行標(biāo)記，所述Cu納米材料的粒徑范圍為40-60nm，透明質(zhì)酸在Cu納米材料表面的載量為0.4?0.5mmol/g;
[0033]b)癌細(xì)胞的培養(yǎng)，所述癌細(xì)胞為肺癌細(xì)胞、肝癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞或胃癌細(xì)胞中的一種，具體辦法為:將傳代后達(dá)到80 %?90 %匯合的癌細(xì)胞，以5 X 105個(gè)/孔接種于孔板，30?37°C，5%C02條件下孵化24h后，用堿性磷酸鹽溶液洗滌，加入異硫氰酸熒光素標(biāo)記的銅納米材料溶液，孵化24h后，用堿性磷酸鹽溶液充分洗滌，每孔加入lml 4%多聚甲醛溶液固定20min后，用堿性磷酸鹽溶液洗滌，加入等量的2 %亞鐵氰化鉀溶液和2 %氯化氫混合液后靜置5min，在37°C條件下，避光孵化30min，去離子水洗去染色液，核固紅復(fù)染，去除上清液，用堿性磷酸鹽溶液再次洗滌。采用50%、75%、85%、95%和100%乙醇梯度脫水各1次，二甲苯透明2次，每次lOmin。中性樹膠封片，置于倒置顯微鏡下觀察并拍照。
[0034]最后說明的是，以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的宗旨和范圍，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍當(dāng)中。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.Cu納米材料的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: 利用直接沉積法制備棒狀ZnO; 將Ni鍍?cè)赯nO上，得到鍍鎳的ZnO; 用Cu包覆鍍鎳的ZnO，即得到Cu包覆的鍍鎳ZnO納米材料； 采用透明質(zhì)酸對(duì)Cu包覆的鍍鎳ZnO納米材料進(jìn)行修飾，其包括以下步驟:將透明質(zhì)酸與緩沖液置于水浴中攪拌，使透明質(zhì)酸分散于溶液后再加入Cu包覆的鍍鎳ZnO，持續(xù)攪拌，采用超濾管除去多余的透明質(zhì)酸，從而得到透明質(zhì)酸修飾的Cu包覆的鍍鎳ZnO納米材料。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的Cu納米材料的制備方法，其特征在于，所述將Ni鍍?cè)赯nO上，其包括以下步驟:將ZnO在二氯化錫和鹽酸的溶液中敏化，再放入到二氯化鈀和鹽酸溶液中活化，活化后的ZnO用去離子水清洗，然后再將ZnO放入到含有硫酸鎳、次磷酸鈉、氯化銨、檸檬酸鈉、丁二酸和乳酸的化學(xué)鍍池中進(jìn)行化學(xué)鍍，最后將鍍過鎳的ZnO過濾并用去離子水洗滌并烘干，即得到鍍鎳的ZnO。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的Cu納米材料的制備方法，其特征在于，所述用Cu包覆鍍鎳的ZnO，其包括以下步驟:將制備的鍍鎳ZnO移入去離子水中，加入聚乙二醇，在超聲條件下分散得到鍍鎳ZnO的懸濁液;將氧化亞銅粉末移入去離子水中充分溶解，得到氧化亞銅懸濁液;將氧化亞銅懸濁液與鍍鎳ZnO懸濁液混合，經(jīng)過靜置、過濾、水洗、醇洗后烘干，即得到Cu包覆的鍍鎳ZnO納米材料。4.一種如權(quán)利要求1-3中任意一項(xiàng)所述的癌細(xì)胞檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟: a)熒光素標(biāo)記，將Cu納米材料溶解在去離子水中，加入異硫氰酸熒光素進(jìn)行標(biāo)記； b)癌細(xì)胞的培養(yǎng)，將傳代后達(dá)到80%?90%匯合的癌細(xì)胞，接種于孔板，孵化24h后，用堿性磷酸鹽溶液洗滌，加入異硫氰酸熒光素標(biāo)記的Cu納米材料的溶液，并采用多聚甲醛溶液固定后，用堿性磷酸鹽溶液洗滌，加入等量的2 %亞鐵氰化鉀溶液和2 %氯化氫混合液后靜置，避光孵化18?30min，洗去染色液，核固紅復(fù)染，去除上清液，用堿性磷酸鹽溶液再次洗滌;采乙醇梯度脫水，二甲苯透明2次，每次10?15min;中性樹膠封片，置于激光顯微鏡下觀察，腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)有陽性熒光染色，可根據(jù)染色數(shù)量定量檢測(cè)出癌細(xì)胞的數(shù)量。5.如權(quán)利要求4所述癌細(xì)胞檢測(cè)方法，其特征在于:所述Cu納米材料的粒徑范圍為40-60nm，透明質(zhì)酸在Cu包覆的鍍鎳ZnO納米材料表面的載量為0.4-0.5mmo 1 /g。6.如權(quán)利要求4所述癌細(xì)胞檢測(cè)方法，其特征在于:所述癌細(xì)胞為肺癌細(xì)胞、肝癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞或胃癌細(xì)胞中的一種。
【專利摘要】本發(fā)明公開了Cu納米材料的制備方法，包括以下步驟：利用直接沉積法制備棒狀ZnO，再將Ni鍍?cè)赯nO上，再用Cu包覆鍍鎳的ZnO，最后采用透明質(zhì)酸對(duì)Cu包覆的鍍鎳ZnO納米材料進(jìn)行修飾；所述的癌細(xì)胞檢測(cè)方法，包括以下步驟：對(duì)所述的Cu納米材料進(jìn)行熒光素標(biāo)記，然后與癌細(xì)胞共培養(yǎng)，再置于激光顯微鏡下觀察，根據(jù)染色數(shù)量定量檢測(cè)出癌細(xì)胞的數(shù)量。通過上述方法制備的Cu納米材料，具有制備簡(jiǎn)單、生物相容性好、能與癌細(xì)胞特異性受體CD44的結(jié)合等優(yōu)勢(shì)；利用Cu納米材料檢測(cè)癌細(xì)胞的方法只需采集患者的血液進(jìn)行體外檢測(cè)，且在極少的樣本中就能夠識(shí)別癌細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)患病初期能夠準(zhǔn)確、靈敏、無創(chuàng)傷的診斷癌癥。
【IPC分類】B22F1/02, C23C18/36, C23C18/18, G01N33/574
【公開號(hào)】CN105478754
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610004429
【發(fā)明人】鄧怡, 鄧大才
【申請(qǐng)人】重慶醫(yī)科大學(xué)附屬永川醫(yī)院
【公開日】2016年4月13日
【申請(qǐng)日】2016年1月6日