本發(fā)明涉及一種微生物菌肥，尤其涉及的是一種利用禽畜糞便制備復(fù)合微生物生態(tài)菌肥及其方法。
背景技術(shù)：
隨著我國畜禽養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展和“菜籃子工程”的實(shí)施，規(guī)模化、集約化畜禽養(yǎng)殖業(yè)迅速崛起，畜禽糞便的產(chǎn)生量逐年增加。大量禽畜糞便因得不到充分利用，造成巨大的污染,如侵占土地、污染土壤、污染水體、污染空氣、影響環(huán)境衛(wèi)生等，成為種植、養(yǎng)殖、農(nóng)副產(chǎn)品加工等生產(chǎn)企業(yè)及各級政府棘手的問題。因此，實(shí)現(xiàn)禽畜糞便的資源化利用，是我國發(fā)展生態(tài)養(yǎng)殖業(yè)亟需解決的重要問題之一。
近年來，化肥和農(nóng)藥大量使用帶來的環(huán)境污染、土壤板結(jié)、農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)降低等一系列問題日益引起人們重視。利用禽畜糞便、秸稈等廢棄物生產(chǎn)生物菌肥，不僅可以改良土壤結(jié)構(gòu)和地力，而且可以有效減少化肥和農(nóng)藥的用量，是當(dāng)前農(nóng)業(yè)環(huán)境領(lǐng)域發(fā)展方向之一。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供了一種利用禽畜糞便制備復(fù)合微生物生態(tài)菌肥及其方法，生產(chǎn)出有效氮磷鉀含量豐富的生物菌肥。
本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的，本發(fā)明包括以下步驟：
(1)輻照誘變：
將自土壤和豬糞便中分離得到圓褐固氮菌Azotobacterchroococcum和惡臭假單胞菌Pseudomonas putida進(jìn)行氮離子注入誘變，篩選高活性突變菌株；
(2)單株菌發(fā)酵：
將枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis CZ9、側(cè)孢芽孢桿菌Bacillus LateraporusHF12、圓褐固氮菌A.chroococcum cas1、惡臭假單胞菌P.putida cas8、酵母菌Sporobolomycesroseus CZ3、乳酸鏈球菌Streptococcus lactis CZ5六株菌株分別單獨(dú)發(fā)酵，獲得發(fā)酵菌液；
(3)復(fù)合菌液制備：
上述各單菌株發(fā)酵結(jié)束后，將枯草芽孢桿菌B.subtilis CZ9、側(cè)孢芽孢桿菌B.Lateraporus HF12、圓褐固氮菌A.chroococcum cas1、惡臭假單胞菌P.putida cas8、酵母菌S.roseus CZ3、乳酸鏈球菌S.lactis CZ5的新鮮發(fā)酵菌液，按照1～3：5～8：1～2：2～3：1.5～3：3～5的體積比混合，制得復(fù)合菌液，其中有效活菌數(shù)為1.35×109～2.4×109cfu/ml；
(4)新鮮培養(yǎng)基添加：
按質(zhì)量濃度2～5％向上述復(fù)合菌劑中加入甘蔗糖蜜新鮮培養(yǎng)基質(zhì)；
(5)保護(hù)劑添加：
按質(zhì)量濃度2～2.5‰向步驟(4)的液體中加入山梨酸鉀，攪拌均勻；
(6)載體添加：
向步驟(5)的菌液中添加0.4～1g/L的凹凸棒土，攪拌均勻，即制得活性菌劑；
(7)復(fù)合微生物生態(tài)菌肥制備：
在化糞池內(nèi)投入上述活性菌劑，待糞便分解處理完成后，干濕分離，固體部分為復(fù)合微生物菌肥。
所述步驟(1)中的圓褐固氮菌A.chroococcum氮離子注入誘變及篩選具體過程如下：
圓褐固氮菌A.chroococcum采用Ashby培養(yǎng)平板上培養(yǎng)48～72h，挑取單菌落至Ashby液體培養(yǎng)基中，120rpm，震蕩培養(yǎng)48～72h，菌液離心洗滌3～4次，制成單細(xì)胞懸液，使細(xì)胞濃度在108～109個(gè)/mL；取0.1mL菌懸液均勻涂布到無菌培養(yǎng)皿中，置于超凈工作臺風(fēng)干制成菌膜。在N+注入機(jī)中進(jìn)行離子注入，注入能量為12～18KeV，注入劑量為4.6×1014～27.6×1014N+/cm2，獲得固氮能力相比出發(fā)菌株提高361％的菌株cas1，命名為A.chroococcumcas1。
所述步驟(1)中的惡臭假單胞菌P.putida氮離子注入誘變及篩選具體過程如下：
惡臭假單胞菌P.putida采用LB培養(yǎng)平板上培養(yǎng)24～48h，挑取單菌落至LB液體培養(yǎng)基中，120rpm，震蕩培養(yǎng)36～48h，菌液離心洗滌3～4次，制成單細(xì)胞懸液，使細(xì)胞濃度在108～109個(gè)/mL。取0.1mL菌懸液均勻涂布到無菌培養(yǎng)皿中，置于超凈工作臺風(fēng)干制成菌膜，在N+注入機(jī)中進(jìn)行離子注入，注入能量10～12KeV，注入劑量為3.8×1014～24.8×1014N+/cm2，獲得解磷能力相比出發(fā)菌株提高285％的菌株cas8，命名為P.putida cas8。
所述步驟(2)中，枯草芽孢桿菌B.subtilis CZ9和側(cè)孢芽孢桿菌B.Lateraporus HF12采用LBG培養(yǎng)基培養(yǎng)24-36h：接種量為1～2％，搖床轉(zhuǎn)速為180～200rpm，所述LBG培養(yǎng)基包括葡萄糖50g，蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化鈉10g，純水1000ml。
所述步驟(2)中，圓褐固氮菌A.chroococcum cas1采用Ashby培養(yǎng)基)培養(yǎng)24～36h：接種量為1～2％，搖床轉(zhuǎn)速為180～200rpm，所述Ashby培養(yǎng)基包括葡萄糖10g，磷酸氫二鉀0.2g，硫酸鎂0.2g，氯化鈉0.2g，硫酸鈣0.2g，碳酸鈣5g，純水1000ml。
所述步驟(2)中，惡臭假單胞菌P.putidacas8采用LB培養(yǎng)基培養(yǎng)24～36h：接種量為1～2％，搖床轉(zhuǎn)速為180～200rpm，所述LB培養(yǎng)基包括胰蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化鈉10g，純水1000ml。
所述步驟(2)中，酵母菌S.roseus CZ3采用YPD培養(yǎng)基培養(yǎng)24～36h：接種量為1～2％，搖床轉(zhuǎn)速為180～200rpm，所述YPD培養(yǎng)基包括酵母提取物10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，純水1000ml。
所述步驟(2)中，乳酸鏈球菌S.lactis CZ5采用發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)24～36h：接種量為1～2％，搖床轉(zhuǎn)速為180～200rpm，所述發(fā)酵培養(yǎng)基包括蔗糖10g，蛋白胨20g，酵母膏10g，磷酸二氫鉀30g，氯化鈉2g，硫酸鎂0.2g，純水1000ml。
所述步驟(7)包括以下步驟：
(71)在裝有禽畜糞便、沼液的化糞池中，按照1～2公斤/噸的用量，添加步驟(6)制得的活性菌劑，每天向化糞池中供氧2～4h，提供微生物所需的氧氣；
(72)3～5d后，化糞池中布滿氣泡，同時(shí)臭味消失，表明糞便分解處理完成；
(73)然后將化糞池中的糞便抽取上來，進(jìn)行干濕分離，其中固體部分即為復(fù)合微生物菌肥，按照常規(guī)有機(jī)肥施用方式運(yùn)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中。
如所述的一種利用禽畜糞便制備復(fù)合微生物生態(tài)菌肥的方法制備得到的復(fù)合微生物菌肥。
通過多種秸稈降解菌/解磷菌/解鉀菌的協(xié)同作用，直接在化糞池中快速分解禽畜糞便，同時(shí)殺死糞便中殘留的病原菌，從而生產(chǎn)出有效氮磷鉀含量豐富的生物菌肥。
本發(fā)明相比現(xiàn)有技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明利用六種秸稈降解菌/解磷菌/解鉀菌的協(xié)同作用，解決了傳統(tǒng)禽畜糞便堆肥處理需預(yù)先糞尿分離、糞便降解慢、肥效差等問題，具有菌株組合新、結(jié)構(gòu)穩(wěn)、活性強(qiáng)、有機(jī)物降解程度高、有效氮磷鉀含量高等特點(diǎn)，大大提高了糞便資源化利用的處理速度和效率，制得的微生物復(fù)合菌肥施用到農(nóng)田中，可顯著改善土壤結(jié)構(gòu)，提高土壤肥力，減少化肥和農(nóng)藥的使用，具有明顯的生態(tài)效益和經(jīng)濟(jì)效益。本發(fā)明提供的微生物復(fù)合菌肥制造工藝簡單，且制備過程中采用的保護(hù)劑和載體均環(huán)境友好，保證了菌肥的安全性。
具體實(shí)施方式
下面對本發(fā)明的實(shí)施例作詳細(xì)說明，本實(shí)施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進(jìn)行實(shí)施，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和具體的操作過程，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于下述的實(shí)施例。
實(shí)施例1
本實(shí)施例的復(fù)合微生物菌肥的菌株構(gòu)成如下：
枯草芽孢桿菌B.subtilis CZ9，1.0×108cfu/ml；
惡臭假單胞菌P.putida cas8，5.0×108cfu/ml；
側(cè)孢芽孢桿菌B.Lateraporus HF12，1.0×108cfu/ml；
圓褐固氮菌A.chroococcum cas1，2.0×108cfu/ml；
酵母菌S.roseus CZ3，1.5×108cfu/ml；
乳酸鏈球菌S.lactis CZ5，3.0×108cfu/ml。
本實(shí)施例的制備方法如下：
(1)單株菌發(fā)酵：將枯草芽孢桿菌B.subtilis CZ9、側(cè)孢芽孢桿菌B.Lateraporus HF12、圓褐固氮菌A.chroococcum cas1、惡臭假單胞菌P.putida cas8、酵母菌S.roseusCZ3、乳酸鏈球菌S.lactis CZ5六株菌分別單獨(dú)進(jìn)行發(fā)酵，獲得發(fā)酵菌液。
具體發(fā)酵過程如下：
枯草芽孢桿菌B.subtilis CZ9和側(cè)孢芽孢桿菌B.Lateraporus HF12采用LBG培養(yǎng)基(葡萄糖50g，蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化鈉10g，純水1000ml)培養(yǎng)；接種量為1％，180rpm，培養(yǎng)24h。
圓褐固氮菌A.chroococcum cas1采用Ashby培養(yǎng)基(葡萄糖10g，磷酸氫二鉀0.2g，硫酸鎂0.2g，氯化鈉0.2g，硫酸鈣0.2g，碳酸鈣5g，純水1000ml)培養(yǎng)；接種量為1％，180rpm，培養(yǎng)24h。
惡臭假單胞菌P.putida cas8采用LB培養(yǎng)基(胰蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化鈉10g，純水1000ml)培養(yǎng)。接種量為1％，180rpm，培養(yǎng)24h。
酵母菌S.roseus CZ3采用YPD培養(yǎng)基(酵母提取物10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，純水1000ml)培養(yǎng)；接種量為1％，180rpm，培養(yǎng)24h。
乳酸鏈球菌S.lactis CZ5發(fā)酵培養(yǎng)基(蔗糖10g，蛋白胨20g，酵母膏10g，磷酸二氫鉀30g，氯化鈉2g，硫酸鎂0.2g，純水1000ml)，接種量為1％，180rpm，培養(yǎng)24h。
(2)復(fù)合菌液制備：上述各單菌株發(fā)酵結(jié)束后，將枯草芽孢桿菌B.subtilis CZ9、側(cè)孢芽孢桿菌B.Lateraporus HF12、圓褐固氮菌A.chroococcum cas1和惡臭假單胞菌P.putida cas8、酵母菌S.roseus CZ3、乳酸鏈球菌S.lactis CZ5六株菌新鮮發(fā)酵菌液按照1:5:1:2:1.5:3的體積比混合，制得復(fù)合菌液，其中有效活菌數(shù)為1.35×109cfu/ml。
(3)新鮮培養(yǎng)基添加：按質(zhì)量濃度2.0％向復(fù)合菌劑中加入新鮮培養(yǎng)基質(zhì)-甘蔗糖蜜(含糖分50％以上，錘度Bx85％以上)。
(4)保護(hù)劑添加：按質(zhì)量濃度2.0‰向步驟(3)中得到的液體中加入山梨酸鉀(純度98％以上)，攪拌均勻(120rpm，1h)。
(5)載體添加：向步驟(4)中得到的菌液中添加100目凹凸棒土(0.4g/L)，攪拌均勻(120rpm，1h)，即制得活性菌劑。
(6)復(fù)合微生物生態(tài)菌肥制備：在裝有禽畜糞便、沼液的化糞池中，按照2公斤/噸的用量，添加活性菌劑，同時(shí)采用移動(dòng)式污水處理鼓風(fēng)機(jī)(章丘信德制造有限公司生產(chǎn)，型號ZCSR200，功率45kw，風(fēng)量30m3/min，風(fēng)機(jī)風(fēng)管直徑25公分)，每天向化糞池中供氧2h，提供微生物所需的氧氣，45d后，化糞池中布滿氣泡，同時(shí)臭味消失，表明糞便分解處理完成。隨后，通過干濕分離機(jī)(成都莘明過濾設(shè)備有限公司生產(chǎn)，型號XM-2，功率5.5kw)，將化糞池中的糞便抽取上來，進(jìn)行干濕分離，其中固體部分即為復(fù)合微生物菌肥，可按照常規(guī)有機(jī)肥施用方式運(yùn)用(250公斤/畝)于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中。
本實(shí)施例制備的復(fù)合微生物菌肥試驗(yàn)效果研究：
試驗(yàn)地點(diǎn)：安徽省亳州市渦陽縣楚店鎮(zhèn)麥田。
試驗(yàn)作物：小麥。
試驗(yàn)材料：本實(shí)施例制備的復(fù)合微生物菌肥，普通復(fù)合肥(N-P2O5-K2O＝25-13-7)。
試驗(yàn)設(shè)計(jì)：設(shè)置三個(gè)處理，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，小區(qū)面積為200m2。
具體處理如下：
處理1：施用普通復(fù)合肥，每畝40kg，后期追肥(每畝8kg尿素)。
處理2：施用本實(shí)施例制備的復(fù)合微生物生態(tài)菌肥，每畝250kg，后期不追肥。
對照：不施用任何肥料。
試驗(yàn)方法：在小麥乳熟期采集0～20cm耕層土樣測定土壤有機(jī)質(zhì)、N、P、K含量及脲酶、堿性磷酸酶活性。
試驗(yàn)結(jié)果：本實(shí)施例中，與對照(不施用任何肥料)相比，處理1和處理2均可以大幅提高土壤有機(jī)質(zhì)，全氮量、速效磷、速效鉀的含量以及脲酶和堿性磷酸酶活性，且處理2提高幅度更大。復(fù)合微生物菌肥對土壤理化性質(zhì)的改善更優(yōu)于普通復(fù)合肥。
表1實(shí)施例1的復(fù)合微生物生態(tài)菌肥處理對土壤理化性質(zhì)的改善
實(shí)施例2
本實(shí)施例的復(fù)合微生物菌肥的菌株構(gòu)成如下：
枯草芽孢桿菌B.subtilis CZ9，2.0×108cfu/ml；
惡臭假單胞菌P.putida cas8，7.0×108cfu/ml；
側(cè)孢芽孢桿菌B.Lateraporus HF12，1.5×108cfu/ml；
圓褐固氮菌A.chroococcum cas1，2.5×108cfu/ml；
酵母菌S.roseus CZ3，2.0×108cfu/ml；
乳酸鏈球菌S.lactis CZ5，4.0×108cfu/ml。
本實(shí)施例的制備方法如下：
(1)單株菌發(fā)酵：將枯草芽孢桿菌B.subtilis CZ9、側(cè)孢芽孢桿菌B.Lateraporus HF12,圓褐固氮菌A.chroococcum cas1和惡臭假單胞菌P.putida cas8、酵母菌S.roseus CZ3、乳酸鏈球菌S.lactis CZ5六株菌分別單獨(dú)進(jìn)行發(fā)酵，獲得發(fā)酵菌液。
枯草芽孢桿菌B.subtilis CZ9和側(cè)孢芽孢桿菌B.Lateraporus HF12采用LBG培養(yǎng)基(葡萄糖50g，蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化鈉10g，純水1000ml)培養(yǎng)；接種量為1.5％，190rpm，培養(yǎng)30h。
圓褐固氮菌A.chroococcum cas1采用Ashby培養(yǎng)基(葡萄糖10g，磷酸氫二鉀0.2g，硫酸鎂0.2g，氯化鈉0.2g，硫酸鈣0.2g，碳酸鈣5g，純水1000ml)培養(yǎng)；接種量為1.5％，190rpm，培養(yǎng)30h。
惡臭假單胞菌P.putida cas8采用LB培養(yǎng)基(胰蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化鈉10g，純水1000ml)培養(yǎng)。接種量為1.5％，190rpm，培養(yǎng)30h。
酵母菌S.roseus CZ3采用YPD培養(yǎng)基(酵母提取物10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，純水1000ml)培養(yǎng)；接種量為1.5％，190rpm，培養(yǎng)30h。
乳酸鏈球菌S.lactis CZ5發(fā)酵培養(yǎng)基(蔗糖10g，蛋白胨20g，酵母膏10g，磷酸二氫鉀30g，氯化鈉2g，硫酸鎂0.2g，純水1000ml)，接種量為1.5％，190rpm，培養(yǎng)30h。
(2)復(fù)合菌液制備：上述各單菌株發(fā)酵結(jié)束后，將枯草芽孢桿菌B.subtilisCZ9、側(cè)孢芽孢桿菌B.LateraporusHF12、圓褐固氮菌A.chroococcumcas1和惡臭假單胞菌P.putida cas8、酵母菌S.roseus CZ3、乳酸鏈球菌S.lactis CZ5六株菌新鮮發(fā)酵菌液按照2:7:1.5:2.5:2:4的體積比混合，制得復(fù)合菌液，其中有效活菌數(shù)為1.9×109cfu/ml。
(3)新鮮培養(yǎng)基添加：按質(zhì)量濃度3.5％向復(fù)合菌劑中加入新鮮培養(yǎng)基質(zhì)-甘蔗糖蜜(含糖分50％以上，錘度Bx85％以上)。
(4)保護(hù)劑添加：按質(zhì)量濃度2.3‰向步驟(3)中得到的液體中加入山梨酸鉀(純度98％以上)，攪拌均勻(120rpm，1.5h)。
(5)載體添加：向步驟(4)中得到的菌液中添加100目凹凸棒土(0.6g/L)，攪拌均勻(120rpm，1.5h)，即制得活性菌劑。
(6)復(fù)合微生物生態(tài)菌肥制備：在裝有禽畜糞便、沼液的化糞池中，按照2公斤/噸的用量，添加活性菌劑，同時(shí)采用移動(dòng)式污水處理鼓風(fēng)機(jī)(章丘信德制造有限公司生產(chǎn)，型號ZCSR200，功率45kw，風(fēng)量30m3/min，風(fēng)機(jī)風(fēng)管直徑25公分)，每天向化糞池中供氧3h，提供微生物所需的氧氣。4d后，化糞池中布滿氣泡，同時(shí)臭味消失，表明糞便分解處理完成。隨后，通過干濕分離機(jī)(成都莘明過濾設(shè)備有限公司生產(chǎn)，型號XM-2，功率5.5kw)，將化糞池中的糞便抽取上來，進(jìn)行干濕分離，其中固體部分即為復(fù)合微生物菌肥，可按照常規(guī)有機(jī)肥施用方式運(yùn)用(300公斤/畝)于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中。
本實(shí)施例制備的復(fù)合微生物菌肥試驗(yàn)效果研究：
試驗(yàn)地點(diǎn)：安徽省亳州市渦陽縣楚店鎮(zhèn)麥田。
試驗(yàn)作物：小麥。
試驗(yàn)材料：本實(shí)施例制備的復(fù)合微生物菌肥，普通復(fù)合肥(N-P2O5-K2O＝25-13-7)。
試驗(yàn)設(shè)計(jì)：設(shè)置三個(gè)處理，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，小區(qū)面積為200m2。
處理1：施用普通復(fù)合肥，每畝40kg，后期追肥(每畝8kg尿素)。
處理2：施用實(shí)施例2制備的復(fù)合微生物生態(tài)菌肥，每畝300kg，后期不追肥。
對照：不施用任何肥料。
試驗(yàn)方法：在小麥乳熟期采集0-20cm耕層土樣測定土壤有機(jī)質(zhì)、N、P、K含量及脲酶、堿性磷酸酶活性。
試驗(yàn)結(jié)果：本實(shí)施例中，與對照(不施用任何肥料)相比，處理1和處理2均可以大幅提高土壤有機(jī)質(zhì)，全氮量、速效磷、速效鉀的含量以及脲酶和堿性磷酸酶活性，且處理2提高幅度更大。復(fù)合微生物菌肥對土壤理化性質(zhì)的改善更優(yōu)于普通復(fù)合肥。
表2實(shí)施例2的復(fù)合微生物生態(tài)菌肥處理對土壤理化性質(zhì)的改善
實(shí)施例3
本實(shí)施例的復(fù)合微生物菌肥的菌株構(gòu)成如下：
枯草芽孢桿菌B.subtilisCZ9，3.0×108cfu/ml；
惡臭假單胞菌P.putida cas8，8.0×108cfu/ml；
側(cè)孢芽孢桿菌B.Lateraporus HF12，2.0×108cfu/ml；
圓褐固氮菌A.chroococcum cas1，3.0×108cfu/ml；
酵母菌S.roseus CZ3，3.0×108cfu/ml；
乳酸鏈球菌S.lactis CZ5，5.0×108cfu/ml。
本實(shí)施例的制備方法如下：
(1)單株菌發(fā)酵：將枯草芽孢桿菌B.subtilis CZ9、側(cè)孢芽孢桿菌B.Lateraporus HF12,圓褐固氮菌A.chroococcum cas1和惡臭假單胞菌P.putida cas8、酵母菌S.roseus CZ3、乳酸鏈球菌S.lactis CZ5六株菌分別單獨(dú)進(jìn)行發(fā)酵，獲得發(fā)酵菌液。
枯草芽孢桿菌B.subtilis CZ9和側(cè)孢芽孢桿菌B.Lateraporus HF12采用LBG培養(yǎng)基(葡萄糖50g，蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化鈉10g，純水1000ml)培養(yǎng)；接種量為2.0％，200rpm，培養(yǎng)36h。
圓褐固氮菌A.chroococcum cas1采用Ashby培養(yǎng)基(葡萄糖10g，磷酸氫二鉀0.2g，硫酸鎂0.2g，氯化鈉0.2g，硫酸鈣0.2g，碳酸鈣5g，純水1000ml)培養(yǎng)；接種量為2.0％，200rpm，培養(yǎng)36h。
惡臭假單胞菌P.putida cas8采用LB培養(yǎng)基(胰蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化鈉10g，純水1000ml)培養(yǎng)；接種量為2.0％，200rpm，培養(yǎng)36h。
酵母菌S.roseus CZ3采用YPD培養(yǎng)基(酵母提取物10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，純水1000ml)培養(yǎng)；接種量為2.0％，200rpm，培養(yǎng)36h。
乳酸鏈球菌S.lactis CZ5發(fā)酵培養(yǎng)基(蔗糖10g，蛋白胨20g，酵母膏10g，磷酸二氫鉀30g，氯化鈉2g，硫酸鎂0.2g，純水1000ml)培養(yǎng)；接種量為2.0％，200rpm，培養(yǎng)36h。
(2)復(fù)合菌液制備：上述各單菌株發(fā)酵結(jié)束后，將枯草芽孢桿菌B.subtilis CZ9、側(cè)孢芽孢桿菌B.Lateraporus HF12、圓褐固氮菌A.chroococcum cas1和惡臭假單胞菌P.putida cas8、酵母菌S.roseus CZ3、乳酸鏈球菌S.lactis CZ5六株菌新鮮發(fā)酵菌液按照3:8:2:3:3:5的體積比混合，制得復(fù)合菌液，其中有效活菌數(shù)為2.4×109cfu/ml。
(3)新鮮培養(yǎng)基添加：按質(zhì)量濃度5％向復(fù)合菌劑中加入新鮮培養(yǎng)基質(zhì)-甘蔗糖蜜(含糖分50％以上，錘度Bx85％以上)。
(4)保護(hù)劑添加：按質(zhì)量濃度2.5‰向步驟(3)中得到的液體中加入山梨酸鉀(純度98％以上)，攪拌均勻(120rpm，2h)。
(5)載體添加：向步驟(4)中得到的菌液中添加100目凹凸棒土(1.0g/L)，攪拌均勻(120rpm，2h)，即制得活性菌劑。
(6)復(fù)合微生物生態(tài)菌肥制備：在裝有禽畜糞便、沼液的化糞池中，按照2公斤/噸的用量，添加活性菌劑，同時(shí)采用移動(dòng)式污水處理鼓風(fēng)機(jī)(章丘信德制造有限公司生產(chǎn)，型號ZCSR200，功率45kw，風(fēng)量30m3/min，風(fēng)機(jī)風(fēng)管直徑25公分)，每天向化糞池中供氧3h，提供微生物所需的氧氣。5d后，化糞池中布滿氣泡，同時(shí)臭味消失，表明糞便分解處理完成。隨后，通過干濕分離機(jī)(成都莘明過濾設(shè)備有限公司生產(chǎn)，型號XM-2，功率5.5kw)，將化糞池中的糞便抽取上來，進(jìn)行干濕分離，其中固體部分即為復(fù)合微生物菌肥，可按照常規(guī)有機(jī)肥施用方式運(yùn)用(300公斤/畝)于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中。
本實(shí)施例制備的復(fù)合微生物菌肥試驗(yàn)效果研究：
試驗(yàn)地點(diǎn)：安徽省亳州市渦陽縣楚店鎮(zhèn)麥田。
試驗(yàn)作物：小麥。
試驗(yàn)材料：本實(shí)施例制備的復(fù)合微生物菌肥，普通復(fù)合肥(N-P2O5-K2O＝25-13-7)。
試驗(yàn)設(shè)計(jì)：設(shè)置三個(gè)處理，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，小區(qū)面積為200m2。
處理1：施用普通復(fù)合肥，每畝40kg，后期追肥(每畝8kg尿素)。
處理2：施用實(shí)施例3制備的復(fù)合微生物生態(tài)菌肥，每畝300kg，后期不追肥。
對照：不施用任何肥料。
試驗(yàn)方法：在小麥乳熟期采集0-20cm耕層土樣測定土壤有機(jī)質(zhì)、N、P、K含量及脲酶、堿性磷酸酶活性。
試驗(yàn)結(jié)果：本實(shí)施例中，與對照(不施用任何肥料)相比，處理1和處理2均可以大幅提高土壤有機(jī)質(zhì)，全氮量、速效磷、速效鉀的含量以及脲酶和堿性磷酸酶活性，且處理2提高幅度更大。復(fù)合微生物菌肥對土壤理化性質(zhì)的改善更優(yōu)于普通復(fù)合肥。
表3實(shí)施例3的復(fù)合微生物生態(tài)菌肥處理對土壤理化性質(zhì)的改善
以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。