1.一種復合微生物筍肥,其特征在于,制備該復合微生物筍肥的原料按重量份為:深褐芽孢桿菌菌粉10-30份,賴氨酸芽孢桿菌菌粉20-40份,瑞格鏈霉菌菌粉20-40份,秋田鏈霉菌菌粉10-30份,淡黃木霉菌粉20-40份,黃腐酸鉀20-60份,氨基酸原粉10-30份;其具體制備方法,包括以下步驟:
步驟一、深褐芽孢桿菌菌粉的制備
取出深褐芽孢桿菌保藏管,用營養(yǎng)肉汁固體培養(yǎng)基分別劃平板進行復蘇,30℃培養(yǎng)48小時,在平板下挑取單個菌落接種至裝有營養(yǎng)肉汁固體培養(yǎng)基,在30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時,用3000ml無菌水將三個茄子瓶中的菌苔洗脫,接種至裝有300L深褐芽孢桿菌液體種子培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中,開攪拌120r/min,前12小時通氣量為200L/min,12小時后通氣量為320L/min ,30℃培養(yǎng)16-24小時,待總菌含量不低于10億cfu/ml,即可作為深褐芽孢桿菌液體種子;
發(fā)酵:將上述制備的深褐芽孢桿菌液體種子加至深褐芽孢桿菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基中,混勻,在淺盤上發(fā)酵,堆料厚度為5-10cm,控制發(fā)酵溫度為30-40℃,發(fā)酵36-48小時,待芽孢含量不低于50億cfu/g,即可曬干,待水分含量低于10%,粉碎過40目篩,即得到深褐芽孢桿菌菌粉;
其中,所述營養(yǎng)肉汁固體培養(yǎng)基:蛋白胨5g,牛肉膏3g,氯化鈉5g,瓊脂20 g,水1000mL,pH7.2 %;
其中,所述深褐芽孢桿菌液體種子培養(yǎng)基:葡萄糖8g/L,玉米粉10 g/L, 豆粉10 g/L,硫酸鎂0.2 g/L,硫酸錳0.1 g/L,磷酸二氫鉀0.5 g/L,磷酸氫二鈉1.0 g/L,pH7.0;
其中,深褐芽孢桿菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基:啤酒糟60%, 玉米皮35%,菜粕粉2%,石粉3%,尿素0.4%,磷酸氫二鉀0.4%,硫酸鎂0.05%,硫酸錳0.01%,培養(yǎng)基含水量50%-60%,各培養(yǎng)基滅菌的條件為:0.10-0.15MPa,121℃滅菌30分鐘;
步驟二、賴氨酸芽孢桿菌菌粉的制備
取出賴氨酸芽孢桿菌保藏管,用無氮固體培養(yǎng)基分別劃平板進行復蘇,30℃培養(yǎng)72小時,在平板下挑取單個菌落接種至裝有無氮固體培養(yǎng)基,在30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時,用3000ml無菌水將三個茄子瓶中的菌苔洗脫,接種至裝有300L賴氨酸芽孢桿菌種子培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中,開攪拌120r/min,前8小時通氣量為100L/min,8-24小時后通氣量為200L/min ,24小時后通氣量為300L/min ,30℃培養(yǎng)32-48小時,待總菌數含量不低于20億cfu/ml,即可作為賴氨酸芽孢桿菌種子液;
發(fā)酵:將上述制備的賴氨酸芽孢桿菌種子液以10%-20%的比例接種至賴氨酸芽孢桿菌固體培養(yǎng)基上,混勻,在淺盤上發(fā)酵,堆料厚度為5-10cm,控制發(fā)酵溫度為30-40℃,發(fā)酵36-48小時,待芽孢含量不低于50億cfu/g,即可曬干,待水分含量低于10%,粉碎過100目篩,即得到賴氨酸芽孢桿菌菌粉;
其中,所述無氮培養(yǎng)基:蔗糖10g,磷酸氫二鉀0.2g,硫酸鎂0.2g,氯化鈉0.2g,硫酸鈣0.1g,碳酸鈣5g,瓊脂18g,蒸餾水1000mL,pH7.2;
其中,所述賴氨酸芽孢桿菌種子培養(yǎng)基:糖蜜20g/L,玉米淀粉10 g/L, 花生粕粉30 g/L,硫酸鎂0.4 g/L,硫酸錳0.6g/L,磷酸二氫鉀0.6 g/L,碳酸鈣10 g/L, pH7.0,各培養(yǎng)基滅菌的條件為:0.10-0.15MPa,121℃滅菌30分鐘;
賴氨酸芽孢桿菌固體培養(yǎng)基:玉米酒糟57%,麩皮35%,棉粕5%,石粉1%,粗玉米皮2%,尿素0.4%,磷酸氫二鉀0.4%,硫酸鎂0.05%,培養(yǎng)基含水量50%-60%,各培養(yǎng)基滅菌的條件為:0.10-0.15MPa,121℃滅菌30分鐘 ;
步驟三,瑞格鏈霉菌菌粉的制備
取出瑞格鏈霉菌菌種保藏管,用高氏一號固體培養(yǎng)基劃平板進行復蘇,30℃培養(yǎng)7天,在平板下挑取單個菌落劃線接種裝有150毫升高氏一號固體培養(yǎng)基的茄子瓶中,在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)6-8天,待菌苔長滿茄子瓶,產生大量孢子粉即可用500毫升的無菌生理鹽水洗脫,調節(jié)孢子濃度為0.1億cfu/ml,即為瑞格鏈霉菌種子液;
發(fā)酵:將上述制備的瑞格鏈霉菌種子液以3%的接種量接種至滅菌的瑞格鏈霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基上,菌種與瑞格鏈霉菌固體培養(yǎng)基混合均勻后,將接好種的瑞格鏈霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基攤在發(fā)酵槽上,物料高度為3-6cm,控溫28-32℃,第一天空氣濕度保持為60%-75%,過后空氣濕度保持為40%-50%,發(fā)酵3-4天,檢測其孢子含量不低于20億CFU/g,即可低溫風干至水分低于8%,粉碎過40目篩,即得到瑞格鏈霉菌菌粉;
其中,所述的高氏一號固體培養(yǎng)基:硝酸鉀:1克,可溶性淀粉:20克,磷酸氫二鉀:0.5克,硫酸鎂:0.5克,氯化鈉:0.5克,硫酸亞鐵:0.01克,瓊脂:20克,蒸餾水補足1000ml ,PH7.2~7.4;
其中,所述的瑞格鏈霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基:甘蔗渣80%,豆粕2%,玉米芯粉1%,石粉10%,麩皮7%,硫酸錳0.004%,磷酸氫二鉀0.1%,硫酸鎂0.05%,固體培養(yǎng)基含水量為40%-60%;各培養(yǎng)基滅菌的條件為:0.10-0.15MPa,121℃滅菌30分鐘;
步驟四,秋田鏈霉菌菌粉的制備
取出秋田鏈霉菌菌種保藏管,用高氏一號固體培養(yǎng)基劃平板進行復蘇,30℃培養(yǎng)7天,在平板下挑取單個菌落劃線接種裝有150毫升高氏一號固體培養(yǎng)基的茄子瓶中,在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)6-8天,待菌苔長滿茄子瓶,產生大量孢子粉即可用500毫升的無菌生理鹽水洗脫,調節(jié)孢子濃度為0.1億cfu/ml,即為秋田鏈霉菌種子液;
發(fā)酵:將上述制備的秋田鏈霉菌種子液以5%的接種量接種至滅菌的秋田鏈霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基上,菌種與秋田鏈霉菌固體培養(yǎng)基混合均勻后,將接好種的秋田鏈霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基攤在發(fā)酵槽上,物料高度為5-8cm,控溫28-32℃,前兩天空氣濕度保持為60%-75%,過后空氣濕度保持為40%-50%,發(fā)酵4-6天,檢測其孢子含量不低于10億CFU/g,即可低溫風干水分低于8%,粉碎過40目篩,即得到秋田鏈霉菌菌粉;
其中,所述的高氏一號固體培養(yǎng)基與步驟三中的高氏一號固體培養(yǎng)基相同;
其中,所述的秋田鏈霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基:米糠80%,棉粕2%,玉米粉1%,石粉2%,麩皮15%,硫酸錳0.004%,磷酸氫二鉀0.1%,硫酸鎂0.05%,固體培養(yǎng)基含水量為40%-60%;各培養(yǎng)基滅菌的條件為:0.10-0.15MPa,121℃滅菌30分鐘;
步驟五,淡黃木霉菌粉的制備
淡黃木霉種子液的制備:取出淡黃木霉菌種保藏管,用PDA固體培養(yǎng)基劃平板進行復蘇,30℃培養(yǎng)6天,在平板下挑取單個菌落劃線接種裝有150毫升PDA固體培養(yǎng)基的茄子瓶中,在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)4-6天,待菌苔長滿茄子瓶,產生大量孢子即可用500毫升的無菌生理鹽水洗脫,調節(jié)孢子濃度為0.1億cfu/ml,即為淡黃木霉種子液;
發(fā)酵:將上述制備的淡黃木霉種子液以2%的接種量接種至滅菌的淡黃木霉固體發(fā)酵培養(yǎng)基上,菌種與淡黃木霉固體培養(yǎng)基混合均勻后,將接好種的淡黃木霉固體發(fā)酵培養(yǎng)基攤在發(fā)酵槽上,物料高度為5-10cm,控溫28-32℃,濕度保持為60%-75%,發(fā)酵4-6天,檢測其總孢子含量不低于30億CFU/g,即可低溫風干,待水分含量低于10%,粉碎過100目篩,即得到淡黃木霉菌粉;
其中,所述的PDA固體培養(yǎng)基:土豆200g,蔗糖20g,水1000mL,瓊脂20g;
其中,所述的淡黃木霉固體發(fā)酵培養(yǎng)基:甘蔗渣85%,芝麻渣粕2%,玉米芯5%,石粉4%,粗玉米皮2%,尿素0.4%,磷酸氫二鉀0.4%,硫酸鎂0.05%,培養(yǎng)基含水量50%-60%;各培養(yǎng)基滅菌的條件為:0.10-0.15MPa,121℃滅菌30分鐘;
步驟六,將上面制成的各種菌粉按深褐芽孢桿菌菌粉10-30份,賴氨酸芽孢桿菌菌粉20-40份,瑞格鏈霉菌菌粉20-40份,秋田鏈霉菌菌粉10-30份,淡黃木霉菌粉20-40份,黃腐酸鉀20-60份,氨基酸原粉10-30份;混合,均勻,即為復合微生物筍肥。
2.根據權利要求1所述的一種復合微生物筍肥,其特征在于,所述的復合微生物筍肥的使用方法為施肥開溝環(huán)施,每畝施用量為2-10kg。
3.根據權利要求1所述的一種復合微生物筍肥,其特征在于,所述的復合微生物筍肥的使用方法為全地灑施,每畝施用量為5-20kg。