本發(fā)明屬于農業(yè)生物防治與微生物肥料
技術領域：
，具體涉及一種防治番茄灰霉病的復合微生物菌肥及其制備方法。
背景技術：
：番茄灰霉病作為現代栽培中為害番茄生產的真菌病害，常常造成巨大的損失。我國局部保護地番茄受灰霉病的為害嚴重地塊減產高達60%以上；許多保護地番茄受灰霉病的為害導致減產20%-30%，嚴重地塊超過50%；山東省膠東地區(qū)番茄幼果受灰霉病菌的侵害減產10%-30%，嚴重地塊甚至絕產。番茄灰霉是由灰葡萄孢菌引起的一種世界性的真菌病害，嚴重影響番茄的產量和品質。目前，對番茄灰霉病的主要防治方法有:一是化學防治?；瘜W防治雖有見效快、效率高等優(yōu)點，但是因長期使用會造成環(huán)境污染、危害害蟲的天敵等缺點，因此逐步被淘汰;其次是生物防治，由于生物防治藥效高、持效期長、不易產生抗藥性、環(huán)境友好等優(yōu)點日益受到人們的青睞。植物病害的生物防治是在農業(yè)生態(tài)系統中調節(jié)寄主作物的微生物環(huán)境，使其利于寄主作物而不利于病原物或者使其對寄主與病原物的相互作用發(fā)生有利于寄主而不利于病原物的影響，從而達到防治病害的目的。生物防治的實質是利用微生物種間或種內的抗生、競爭、重寄生、溶菌作用，或者通過微生物次級代謝產物誘導植物產生抗病性等，來抑制某些病原物的存活和活動。它是一種對環(huán)境生態(tài)友好，可持續(xù)的田間植物病害防治方法，愈來愈得到各國植病工作者的承認和重視，己獲得了長足的發(fā)展。近年來，生物防治于番茄灰霉防治方面，正在不斷地深入和擴大。目前，用于防治番茄灰霉病的微生物主要包括真菌、細菌和放線菌三大類。防治灰霉病的生防真菌近10種，研究和應用較廣的主要是木霉和酵母菌。潘亞妮等用綠色木霉防治溫室番茄灰霉病防治效果達92.6%，與未處理的植株相比，發(fā)病率降低了39.1%；Wilson等利用纖細假絲酵母和清酒假絲酵母使灰葡萄抱造成的蘋果傷口腐爛降低了50%?；颐共》乐窝芯亢蛻玫募毦灿?0多種，而芽孢桿菌則是目前灰霉菌生物防治中研究和應用的主要細菌菌株。童蘊慧等分離獲得的拮抗性強、抗菌譜廣的地衣芽抱桿菌W10,W3,Y2-11-1菌株，對番茄灰霉病葉片和果實的防效為70%-80%，優(yōu)于50%速克靈2000倍液。放線菌用于防治番茄灰霉主要是利用鏈霉菌科鏈霉菌屬產生的武夷菌素、磷氮霉素、白月太霉素、變構霉素、變構菌素和魚時霉素等抗生素，對灰霉病均有較好的抑制作用。目前，用于防治番茄灰霉病的芽孢桿菌主要有CGMCCNo.4777(專利號:ZL201210059785.0)，BA-KA3(專利申請?zhí)?201410618581.5)，SZ23(專利申請?zhí)?201410683826.2)，LH-1(專利申請?zhí)?201410735508.6)和NCPSJI7(專利申請?zhí)?201310112580.9)等。由于病原菌的多樣性和同步進化特性，單一拮抗菌株也無法達到很理想的防治效果，因此需要尋找不同種類的菌進行組合形成效果更好的防治番茄灰霉病的組合。由于病原菌的多樣性和同步進化特性，單一拮抗菌株也無法達到很理想的防治效果，因此，生防菌的很多生物功能需要依靠兩株或兩株以上的細菌間的協同作用，才能發(fā)揮出更好的作用。技術實現要素：本發(fā)明的第一目的在于提供一種防治番茄灰霉病的復合微生物菌肥。該復合微生物菌肥的原料配比為：生綠鏈霉菌發(fā)酵液10-30份，昌帕瓦底鏈霉菌發(fā)酵液20-40份，印度芽孢桿菌發(fā)酵液10-30份，摩加夫芽孢桿菌發(fā)酵液10-30份，卵孢木霉發(fā)酵液10-30份。在所述微生物菌劑中，生綠鏈霉菌，昌帕瓦底鏈霉菌，印度芽孢桿菌，摩加夫芽孢桿菌，卵孢木霉五種菌是從400多株微生物菌株中篩選得到的能共生共存，能產生多種抗菌素如四環(huán)素，7-金霉素，昌帕霉素A和B（七烯抗真菌的抗菌素）和昌帕瓦底菌素；它們對抑制番茄灰霉病--灰葡萄孢菌有特別強大的效果，從而達到防治番茄灰霉病的作用；另一方面，本發(fā)明的菌種能夠全面的利用微生物種間或種內的抗生、競爭、重寄生、溶菌作用，或者通過次級代謝產物誘導番茄產生抗病性，增強其防病效果；再次，本發(fā)明中所使用的這5株菌株都是可從土壤中直接分離得到，都具有根跡促生作用，可在作物表面、植株內部或土壤中繁殖生長的同時，并定向植物根際分泌某些次生代謝產物，能夠提高植物對養(yǎng)分的吸收、刺激植株生長起到肥料的效果。本發(fā)明的第二目的在于提供一種防治番茄灰霉病的復合微生物菌肥的制備方法，該方法步驟簡單，確保微生物菌肥的藥肥效果突出。為了達到上述目的，該防治番茄灰霉病的復合微生物菌肥的制備方法，包括以下步驟：步驟一：生綠鏈霉菌發(fā)酵液的制備取出生綠鏈霉菌菌種保藏管，用高氏一號固體培養(yǎng)基劃平板進行復蘇，30℃培養(yǎng)7天。在平板下挑取單個菌落劃線接種裝有150毫升高氏一號固體培養(yǎng)基的茄子瓶中，在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)6-8天，待菌苔長滿茄子瓶，產生大量孢子粉即可用500毫升的無菌生理鹽水洗脫，調節(jié)孢子濃度為0.1億cfu/ml，即為生綠鏈霉菌種子液；發(fā)酵：將上述制備的生綠鏈霉菌種子液以1%的接種量接種至裝有滅菌的600L的生綠鏈霉菌發(fā)酵培養(yǎng)基的1000L發(fā)酵罐中，控溫28-32℃，前24小時，通氣量為每分鐘為200L空氣，24-36小時，通氣量為400L，36小時后，通氣量為600L，開攪拌200r/min，培養(yǎng)40-48小時，待菌體含量達到60g/L，即可停罐，即得到生綠鏈霉菌發(fā)酵液；其中，所述的高氏一號固體培養(yǎng)基：硝酸鉀：1克，可溶性淀粉：20克，磷酸氫二鉀：0.5克，硫酸鎂：0.5克，氯化鈉：0.5克，硫酸亞鐵：0.01克，瓊脂：20克，蒸餾水補足1000ml，PH7.2～7.4；其中，所述的生綠鏈霉菌發(fā)酵培養(yǎng)基：花生粕粉3%，葡萄糖1%，石粉1%，大豆糖蜜2%，磷酸氫二鉀0.04%，硫酸鎂0.05%，各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘；步驟二：昌帕瓦底鏈霉菌發(fā)酵液的制備取出昌帕瓦底鏈霉菌菌種保藏管，用高氏一號固體培養(yǎng)基劃平板進行復蘇，30℃培養(yǎng)7天。在平板下挑取單個菌落劃線接種裝有150毫升高氏一號固體培養(yǎng)基的茄子瓶中，在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)6-8天，待菌苔長滿茄子瓶，產生大量孢子粉即可用500毫升的無菌生理鹽水洗脫，調節(jié)孢子濃度為0.1億cfu/ml，即為昌帕瓦底鏈霉菌種子液；發(fā)酵：將上述制備的昌帕瓦底鏈霉菌種子液以1%的接種量接種至裝有滅菌的600L的昌帕瓦底鏈霉菌發(fā)酵培養(yǎng)基的1000L發(fā)酵罐中，控溫28-30℃，前18小時，通氣量為每分鐘為300L空氣，18-32小時，通氣量為500L，32小時后，通氣量為700L，開攪拌200r/min，培養(yǎng)40-48小時，待菌體含量達到80g/L，即可停罐，即得到昌帕瓦底鏈霉菌發(fā)酵液；其中，所述的高氏一號固體培養(yǎng)基：硝酸鉀：1克，可溶性淀粉：20克，磷酸氫二鉀：0.5克，硫酸鎂：0.5克，氯化鈉：0.5克，硫酸亞鐵：0.01克，瓊脂：20克，蒸餾水補足1000ml，PH7.2～7.4；其中，所述的昌帕瓦底鏈霉菌發(fā)酵培養(yǎng)基：芝麻粕粉3%，棉粕1%，玉米淀粉2%，石粉1%，甘蔗糖蜜3%，硫酸錳0.002%，磷酸氫二鉀0.01%，硫酸鎂0.02%，各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。步驟三，印度芽孢桿菌發(fā)酵液的制備取出印度芽孢桿菌保藏管，用LB固體培養(yǎng)基分別劃平板進行復蘇，30℃培養(yǎng)48小時。在平板下挑取單個菌落接種至裝有LB固體培養(yǎng)基，在30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時，用3000ml無菌水將三個茄子瓶中的菌苔洗脫，接種至裝有300L印度芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中，開攪拌120r/min，前12小時通氣量為200L/min，12小時后通氣量為320L/min，30℃培養(yǎng)26-36小時，待總芽孢含量不低于60億cfu/ml，即可作為印度芽孢桿菌發(fā)酵液；其中，所述LB培養(yǎng)基：酵母提取物5.0g，蛋白胨10.0，NaCl10.0g，瓊脂20g，水1000mL，pH7.2；其中，所述印度芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖8g/L，玉米淀粉22g/L，豆粕粉50g/L，硫酸鎂0.4g/L，硫酸錳0.5g/L，磷酸二氫鉀0.5g/L，碳酸鈣5g/L，pH7.0。各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。步驟四，摩加夫芽孢桿菌發(fā)酵液的制備取出摩加夫芽孢桿菌保藏管，用營養(yǎng)肉湯固體培養(yǎng)基分別劃平板進行復蘇，30℃培養(yǎng)48小時。在平板下挑取單個菌落接種至裝有營養(yǎng)肉湯固體培養(yǎng)基，在30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時，用3000ml無菌水將三個茄子瓶中的菌苔洗脫，接種至裝有300L摩加夫芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中，開攪拌120r/min，前8小時通氣量為200L/min，8小時后通氣量為300L/min，30℃培養(yǎng)24-36小時，待總芽孢含量不低于80億cfu/ml，即可作為摩加夫芽孢桿菌發(fā)酵液；其中，所述營養(yǎng)肉湯固體培養(yǎng)基：蛋白胨10.0g/L,牛肉膏3.0g/L，氯化鈉5.0g/L，瓊脂20g/L，pH7.2±0.2；其中，所述摩加夫芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖8g/L，木薯粉20g/L，菜粕粉30g/L，硫酸鎂0.4g/L，硫酸錳0.5g/L，磷酸二氫鉀0.2g/L，碳酸鈣5g/L，pH7.0。各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。步驟五，卵孢木霉發(fā)酵液的制備取出卵孢木霉菌種保藏管，用PDA固體培養(yǎng)基劃平板進行復蘇，30℃培養(yǎng)7天。在平板下挑取單個菌落劃線接種裝有150毫升PDA固體培養(yǎng)基的茄子瓶中，在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)6-8天，待菌苔長滿茄子瓶，產生大量孢子粉即可用500毫升的無菌生理鹽水洗脫，調節(jié)孢子濃度為0.05億cfu/ml，即為卵孢木霉種子液；發(fā)酵：將上述制備的卵孢木霉種子液以2%的接種量接種至裝有300L卵孢木霉發(fā)酵培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中，開攪拌200r/min，前8小時通氣量為120L/min，8-24小時后通氣量為240L/min，24小時后通氣量為360L/min，30℃培養(yǎng)32-48小時，待菌體含量達到80g/L，即可停罐，即可作為卵孢木霉發(fā)酵液；其中，所述的PDA固體培養(yǎng)基：土豆200g，蔗糖20g，水1000mL，瓊脂20g；其中，所述的卵孢木霉發(fā)酵培養(yǎng)基：菜粕2%，棉粕2%，甘薯粉2%，石粉1%，大豆糖蜜3%，硫酸錳0.001%，磷酸氫二鉀0.04%，硫酸鎂0.02%，各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。步驟六，混合發(fā)酵液將前五個步驟制備的菌液按生綠鏈霉菌發(fā)酵液10-30份，昌帕瓦底鏈霉菌發(fā)酵液20-40份，印度芽孢桿菌發(fā)酵液10-30份，摩加夫芽孢桿菌發(fā)酵液10-30份，卵孢木霉發(fā)酵液10-30份?；靹颍吹玫椒乐畏鸦颐共〉膹秃衔⑸锞?。其中，該復合微生物菌肥在防治番茄灰霉病的方法為葉面噴施每次2-5L/畝，其稀釋的倍數為100-200倍，連續(xù)使用2-3次，每7-10天使用一次。本發(fā)明具有的優(yōu)點和有益效果：、本發(fā)明中包含的生綠鏈霉菌，昌帕瓦底鏈霉菌，印度芽孢桿菌，摩加夫芽孢桿菌，卵孢木霉五種菌是從400多株微生物菌株中篩選得到的能共生共存，能在植株的根，莖，葉以及土壤中能夠生長繁殖，能產生多種抗菌素如四環(huán)素，7-金霉素，昌帕霉素A和B（七烯抗真菌的抗菌素）和昌帕瓦底菌素；它們對抑制番茄灰霉病--灰葡萄孢菌有特別強大的效果，從而達到超強防治番茄灰霉病的效果，其對番茄灰霉病的藥效高，平均防效在90.0%以上，且針對性強；、本發(fā)明的菌種能夠全面的利用微生物種間或種內的抗生、競爭、重寄生、溶菌作用，或者通過次級代謝產物誘導番茄產生抗病性，增強其防病效果；、本發(fā)明中所使用的這5株菌株都是可從土壤中直接分離得到，都具有根跡促生作用，可在作物表面、植株內部或土壤中繁殖生長的同時，并定向植物根際分泌某些次生代謝產物，能夠提高植物對養(yǎng)分的吸收、刺激植株生長起到肥料的效果；(4)、本發(fā)明復合微生物菌肥對人、畜安全，屬于環(huán)境友好型，利用本發(fā)明方法防治番茄灰霉病不易產生抗藥性，本發(fā)明制備方法簡單、菌種多，產生的拮抗物質廣泛，效果顯著，成本低、使用簡單。具體實施方式實施例1一種防治番茄灰霉病的復合微生物菌肥，其特征在于，該微生物菌肥的原料配比為：生綠鏈霉菌發(fā)酵液20份，昌帕瓦底鏈霉菌發(fā)酵液30份，印度芽孢桿菌發(fā)酵液20份，摩加夫芽孢桿菌發(fā)酵液20份，卵孢木霉發(fā)酵液20份。該防治番茄灰霉病的復合微生物菌肥的制備方法，包括以下步驟：步驟一：生綠鏈霉菌發(fā)酵液的制備取出生綠鏈霉菌菌種保藏管，用高氏一號固體培養(yǎng)基劃平板進行復蘇，30℃培養(yǎng)7天。在平板下挑取單個菌落劃線接種裝有150毫升高氏一號固體培養(yǎng)基的茄子瓶中，在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)6-8天，待菌苔長滿茄子瓶，產生大量孢子粉即可用500毫升的無菌生理鹽水洗脫，調節(jié)孢子濃度為0.1億cfu/ml，即為生綠鏈霉菌種子液；發(fā)酵：將上述制備的生綠鏈霉菌種子液以1%的接種量接種至裝有滅菌的600L的生綠鏈霉菌發(fā)酵培養(yǎng)基的1000L發(fā)酵罐中，控溫28-32℃，前24小時，通氣量為每分鐘為200L空氣，24-36小時，通氣量為400L，36小時后，通氣量為600L，開攪拌200r/min，培養(yǎng)44小時，測得菌體含量為65g/L，停罐，即得到生綠鏈霉菌發(fā)酵液；其中，所述的高氏一號固體培養(yǎng)基：硝酸鉀：1克，可溶性淀粉：20克，磷酸氫二鉀：0.5克，硫酸鎂：0.5克，氯化鈉：0.5克，硫酸亞鐵：0.01克，瓊脂：20克，蒸餾水補足1000ml，PH7.2～7.4；其中，所述的生綠鏈霉菌發(fā)酵培養(yǎng)基：花生粕粉3%，葡萄糖1%，石粉1%，大豆糖蜜2%，磷酸氫二鉀0.04%，硫酸鎂0.05%，各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。步驟二：昌帕瓦底鏈霉菌發(fā)酵液的制備取出昌帕瓦底鏈霉菌菌種保藏管，用高氏一號固體培養(yǎng)基劃平板進行復蘇，30℃培養(yǎng)7天。在平板下挑取單個菌落劃線接種裝有150毫升高氏一號固體培養(yǎng)基的茄子瓶中，在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)6-8天，待菌苔長滿茄子瓶，產生大量孢子粉即可用500毫升的無菌生理鹽水洗脫，調節(jié)孢子濃度為0.1億cfu/ml，即為昌帕瓦底鏈霉菌種子液；發(fā)酵：將上述制備的昌帕瓦底鏈霉菌種子液以1%的接種量接種至裝有滅菌的600L的昌帕瓦底鏈霉菌發(fā)酵培養(yǎng)基的1000L發(fā)酵罐中，控溫28-30℃，前18小時，通氣量為每分鐘為300L空氣，18-32小時，通氣量為500L，32小時后，通氣量為700L，開攪拌200r/min，培養(yǎng)46小時，測得菌體含量為82g/L，停罐，即得到昌帕瓦底鏈霉菌發(fā)酵液；其中，所述的高氏一號固體培養(yǎng)基：硝酸鉀：1克，可溶性淀粉：20克，磷酸氫二鉀：0.5克，硫酸鎂：0.5克，氯化鈉：0.5克，硫酸亞鐵：0.01克，瓊脂：20克，蒸餾水補足1000ml，PH7.2～7.4；其中，所述的昌帕瓦底鏈霉菌發(fā)酵培養(yǎng)基：芝麻粕粉3%，棉粕1%，玉米淀粉2%，石粉1%，甘蔗糖蜜3%，硫酸錳0.002%，磷酸氫二鉀0.01%，硫酸鎂0.02%，各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。步驟三，印度芽孢桿菌發(fā)酵液的制備取出印度芽孢桿菌保藏管，用LB固體培養(yǎng)基分別劃平板進行復蘇，30℃培養(yǎng)48小時。在平板下挑取單個菌落接種至裝有LB固體培養(yǎng)基，在30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時，用3000ml無菌水將三個茄子瓶中的菌苔洗脫，接種至裝有300L印度芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中，開攪拌120r/min，前12小時通氣量為200L/min，12小時后通氣量為320L/min，30℃培養(yǎng)28小時，測得總芽孢含量為61億cfu/ml，即作為印度芽孢桿菌發(fā)酵液；其中，所述LB培養(yǎng)基：酵母提取物5.0g,蛋白胨10.0,NaCl10.0g，水1000mL，pH7.2，固體培養(yǎng)基中加入瓊脂2%；其中，所述印度芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖8g/L，玉米淀粉22g/L，豆粕粉50g/L，硫酸鎂0.4g/L，硫酸錳0.5g/L，磷酸二氫鉀0.5g/L，碳酸鈣5g/L，pH7.0。各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。步驟四，摩加夫芽孢桿菌發(fā)酵液的制備取出摩加夫芽孢桿菌保藏管，用營養(yǎng)肉湯固體培養(yǎng)基分別劃平板進行復蘇，30℃培養(yǎng)48小時。在平板下挑取單個菌落接種至裝有營養(yǎng)肉湯固體培養(yǎng)基，在30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時，用3000ml無菌水將三個茄子瓶中的菌苔洗脫，接種至裝有300L摩加夫芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中，開攪拌120r/min，前8小時通氣量為200L/min，8小時后通氣量為300L/min，30℃培養(yǎng)29小時，檢測總芽孢含量為83億cfu/ml，即作為摩加夫芽孢桿菌發(fā)酵液；其中，所述營養(yǎng)肉湯固體培養(yǎng)基：蛋白胨10.0g/L,牛肉膏3.0g/L，氯化鈉5.0g/L，瓊脂20g/L，pH7.2±0.2；其中，所述摩加夫芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖8g/L，木薯粉20g/L，菜粕粉30g/L，硫酸鎂0.4g/L，硫酸錳0.5g/L，磷酸二氫鉀0.2g/L，碳酸鈣5g/L，pH7.0。各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。步驟五，卵孢木霉發(fā)酵液的制備取出卵孢木霉菌種保藏管，用PDA固體培養(yǎng)基劃平板進行復蘇，30℃培養(yǎng)7天。在平板下挑取單個菌落劃線接種裝有150毫升PDA固體培養(yǎng)基的茄子瓶中，在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)6-8天，待菌苔長滿茄子瓶，產生大量孢子粉即可用500毫升的無菌生理鹽水洗脫，調節(jié)孢子濃度為0.05億cfu/ml，即為卵孢木霉種子液；發(fā)酵：將上述制備的卵孢木霉種子液以2%的接種量接種至裝有300L卵孢木霉發(fā)酵培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中，開攪拌200r/min，前8小時通氣量為120L/min，8-24小時后通氣量為240L/min，24小時后通氣量為360L/min，30℃培養(yǎng)36小時，檢測菌體含量為81g/L，停罐，即可作為卵孢木霉發(fā)酵液；其中，所述的PDA固體培養(yǎng)基：土豆200g，蔗糖20g，水1000mL，瓊脂20g；其中，所述的卵孢木霉發(fā)酵培養(yǎng)基：菜粕2%，棉粕2%，甘薯粉2%，石粉1%，大豆糖蜜3%，硫酸錳0.001%，磷酸氫二鉀0.04%，硫酸鎂0.02%，各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。步驟六，混合發(fā)酵液將前五個步驟制備的菌液按生綠鏈霉菌發(fā)酵液20份，昌帕瓦底鏈霉菌發(fā)酵液30份，印度芽孢桿菌發(fā)酵液20份，摩加夫芽孢桿菌發(fā)酵液20份，卵孢木霉發(fā)酵液20份?；靹?，即得到防治番茄灰霉病的復合微生物菌肥。實施例2本發(fā)明復合微生物菌肥對番茄灰霉菌的拮抗作用試驗(一)試驗時間和地點:2014年4月，在佛山市艷暉生物科技有限公司微生物實驗室內進行；(二)試驗方法：(1)供試番茄灰霉菌來源：番茄灰霉菌病原菌-灰葡萄孢菌為廣西大學農學院贈送，致病力測定表現為強致病力；(2)平板對峙實驗:首先將灰葡萄孢菌在PDA平板上活化，培養(yǎng)4天后在菌落邊緣區(qū)域，用打孔器(6mm)打孔制成菌片，將灰葡萄孢菌菌片轉接在另一個PDA平板中央，再將實施例1步驟(1)中制備的復合微生物菌液稀釋100倍，點接在距指示菌菌片2.5厘米處，設空白對照(不點接復合微生物菌肥的番茄灰霉菌生長情況)。25℃恒溫培養(yǎng)，待空白對照即將長滿整個培養(yǎng)皿時，測量灰葡萄孢菌的對照生長量(菌落半徑)和處理生長量，拮抗作用用抑菌率表示。計算公式為:抑菌率(%)=(對照生長量一處理生長量)/對照生長量X100結果：如表1，復合微生物菌肥對灰葡萄孢菌的抑制率達91.79%；透明的抑菌帶寬達21.5毫米，說明本發(fā)明復合微生物菌肥對番茄灰霉菌抑菌性強，具有防治番茄灰霉病的生防潛力。表1復合微生物菌肥對灰葡萄孢菌的拮抗作用試驗結果處理對照生長量（mm）處理生長量（mm）抑菌率（%）復合微生物菌肥393.291.79實施例3防治番茄灰霉病的復合微生物菌肥在大棚中的試驗效果(一)試驗處理:試驗組：實施例1制備的該復合微生物菌肥在防治番茄灰霉病的方法為葉面噴施每次4L/畝，其稀釋的倍數為100-200倍，連續(xù)使用2次，每7天使用一次；化學藥劑：嘧菌酯懸浮劑(250克/升)(英國先正達有限公司)，用水稀釋500倍；空白對照：清水(二)試驗方法：2015年3月一7月在河北省滄州市滄縣某番茄大棚進行。開始試驗時整個棚內番茄葉部灰霉病中度發(fā)生，施藥前摘除病葉。每小區(qū)三行，四次重復，隨機區(qū)組排列。采用背負式電動噴霧器接種實施例1所制備的復合微生物菌肥；另設對照藥劑和空白對照。首次施藥7天后再噴施1次，二次施藥后的第7天調查各個處理小區(qū)的單株病葉數與采摘成熟果實，并計算防效與增產率；結果：從表2可以看出，復合微生物菌肥處理后，其番茄灰霉病的單株病葉數顯著低于空白對照和化學藥劑對照，其防效達到93.12%，說明本發(fā)明的復合微生物菌肥對番茄灰霉病有很好的防治效果；另外，從表2可看出，施用本發(fā)明的復合微生物菌肥的番茄產量遠遠高于空白對照組，增產率達到了40.45%，與化學藥劑組對比也比其產量高22.55%，而且發(fā)現其果實大而飽滿,結果數多，異形果少，口感好，著色鮮亮，其果實甜度也有明顯提高。表2復合微生物菌肥對番茄灰霉病防效的對比試驗結果處理單株病葉數（片）防效（%）產量（kg）增產率（%）復合微生物菌肥0.33c93.1212540.45化學藥劑1.56b68.4210214.61空白對照4.94a89以上已將本發(fā)明做一詳細說明，以上所述，僅為本發(fā)明之較佳實施例而已，當不能限定本發(fā)明實施范圍，即凡依本申請范圍所作均等變化與修飾，皆應仍屬本發(fā)明涵蓋范圍內。當前第1頁1 2 3